羅偉華

大孔樹脂吸附分離荊芥總黃酮工藝研究

羅偉華

目的 篩選大孔樹脂吸附法分離荊芥總黃酮的最佳洗脫工藝條件。方法 采用D-101型大孔樹脂對(duì)荊芥總黃酮洗脫吸附，觀察上樣液流速、濃度、洗脫液濃度對(duì)荊芥總黃酮含量影響。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，D-101型大孔樹脂最佳洗脫工藝參數(shù)為上樣藥液流速3 ml/min，濃度10 mg/ml，洗脫液乙醇濃度70%。結(jié)論 D-101型大孔樹脂洗脫條件可行方便，適合于荊芥總黃酮分離工藝。

大孔樹脂;荊芥總黃酮;吸附

大孔吸附樹脂是一種多孔性的高分子材料，不含交換基團(tuán)，具有多孔性和較大的比表面積，具有解吸容易的特點(diǎn)，其是通過物理作用從溶液中有選擇性地吸附有機(jī)物質(zhì)，從而達(dá)到分離純化的目的，目前應(yīng)用于中草藥有效成分分離較多［1］。中藥材荊芥中主要化學(xué)成分有黃酮類、酸類、酚類化合物等，我們采用大孔吸附樹脂技術(shù)，分析D-101型大孔樹脂對(duì)荊芥總黃酮分離效果，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與試藥

1.1 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和低溫冷卻液循環(huán)泵為上海愛朗儀器公司生產(chǎn);玻璃層析柱購(gòu)于廣州宇迪科學(xué)儀器公司;UV-2401型分光光度汁為日本島津公司生產(chǎn)。

1.2 藥品與試劑 中藥材荊芥購(gòu)于廣東興寧醫(yī)藥貿(mào)易公司，經(jīng)鑒定符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn);蘆丁對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所;D-101型大孔樹脂、NaNO3、Al(NO3)3、NaOH、乙醇購(gòu)于天津化學(xué)試劑廠。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 受試樣品溶液制備及總黃酮含量測(cè)定 精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，置100 ml量瓶中，用75%乙醇溶解并定容至100 m l，搖勻，得對(duì)照品溶液;精密吸取對(duì)照品溶液 0，1，2，3，4，5 ml，分別置 25 m l容量瓶中，分別加 75% 乙醇至 10 ml，精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 m l，混勻，靜置6 min，精密加入1O%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，靜置，精密加入4%氧氧化鈉溶液10 ml，再加75%乙醇搖勻，靜置，以第1管為空白，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的吸光度。以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.013723X-0.0008，r=0.9999。

取荊芥藥材，粉碎為粉末，稱重100 g，加入85%乙醇浸泡回流提取3次，合并提取液，超聲20 min，過濾，收集濾液，減壓濃縮至200 m l，備用;采用分光光度法測(cè)定總黃酮含量，510nm處測(cè)定吸光光度值，計(jì)算含量。

1.3.2 D-101型大孔吸附樹脂對(duì)荊芥總黃酮的吸附

1.3.2.1 藥液流速對(duì)D-101樹脂吸附影響 取荊芥藥材提取液 100 m l，分別以 1 m l/min，2 ml/min，3 ml/min，4 ml/min，5 ml/min通過預(yù)處理好的D-101樹脂柱，考察不同流速下的吸附效果。

1.3.2.2 藥液不同濃度對(duì)D-101樹脂吸附影響 分別取入5 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml的荊芥提取液，以 2 ml/min流速上樣，計(jì)算黃酮的吸附量。

1.3.2.3 洗脫液乙醇濃度對(duì)D-101大孔樹脂影響 將100 ml濃度為10 mg/m l的荊芥提取液，通過預(yù)處理好的樹脂，用300 ml水洗脫后，依次用10%、30%、50%、70%、90%乙醇洗脫，各濃度分別收集100 ml洗脫液，并將水洗液濃縮至50 ml，各溶液取樣，用分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。總黃酮洗脫率=醇洗脫黃酮量/上柱黃酮量×100%。

2 結(jié)果

2.1 藥液流速對(duì)D-101大孔樹脂吸附效果影響 吸附量是隨著上樣藥液流速的增加而減少的，吸附量隨著接觸時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，當(dāng)吸附流速加快時(shí)，其接觸時(shí)間也相應(yīng)的減少，吸附量減少;從工藝操作時(shí)間等角度分析，選擇3 ml/min的流速上樣。具體結(jié)果見下表1。

表1 藥液流速對(duì)吸附效果的影響

2.2 藥液濃度對(duì)D-101大孔樹脂吸附效果影響 藥液濃度的不同對(duì)荊芥總黃酮的吸附結(jié)果不一，藥液濃度不斷升高，其吸附量呈降低趨勢(shì)，其中荊芥藥液濃度在10 mg/ml時(shí)大孔樹脂的吸附總黃酮量最大。結(jié)果見下表2。

表2 藥液濃度對(duì)D-101大孔樹脂吸附效果影響(mg/ml)

2.3 不同濃度乙醇洗脫液對(duì)D-101樹脂吸附黃酮的影響不同濃度乙醇洗脫液對(duì)D-101樹脂吸附黃酮量影響不一，呈現(xiàn)正態(tài)分布;其中洗脫液乙醇濃度70%的黃酮量最高。結(jié)果見下表3。

表3 不同乙醇洗脫液濃度對(duì)D-101大孔樹脂吸附黃酮影響

3 討論

大孔樹脂作為一種有機(jī)高聚吸附劑，具有選擇性吸附有機(jī)化合物的能力，可應(yīng)用于皂苷、黃酮、蒽醌、生物堿、水溶性酚性成分及中藥提取、分離及純化［1-2］。

本實(shí)驗(yàn)研究針對(duì)黃酮類化合物易溶于乙醇，而微溶于水的特點(diǎn)［3］，采用乙醇回流提取處理樣品，濃縮提取液，加水溶解，再上大孔樹脂柱進(jìn)行吸附純化，增加了大孔樹脂對(duì)荊芥總黃酮的吸附能力。本實(shí)驗(yàn)所采用大孔吸附樹脂吸附制備荊芥總黃酮，以D-101為吸附樹脂，并對(duì)其工藝相關(guān)參數(shù)條件進(jìn)行考察，篩選出最佳的洗脫工藝條件;研究結(jié)果表明將濃度為10 mg/ml的荊芥總黃酮提取液以3 ml/min的流速，經(jīng)過預(yù)處理好D-101大孔吸附樹脂動(dòng)態(tài)吸附，用50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫所得總黃酮含量較高，該洗脫工藝簡(jiǎn)便易行。

［1］史作清，施榮富，范云鴿等.樹脂吸附法在中草藥有效成分提取中應(yīng)用.中草藥，2001，32(7):660.

［2］譚勝兵.大孔樹脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用.菏澤學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29(2):81.

［3］彬果，郭文勇.大孔樹脂吸附技術(shù)在中藥制劑中的應(yīng)用.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，19(6):452-455.

514500 廣東省興寧市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科