劉文艷 楊 鑫 吳曉蘭 劉明輝 蘇 丹 宋光熠 (遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110101)

逍遙散對(duì)酒精性肝病大鼠過(guò)氧化狀態(tài)的影響

劉文艷 楊 鑫 吳曉蘭 劉明輝 蘇 丹 宋光熠 (遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110101)

目的 探討逍遙散治療酒精性肝病的機(jī)制。方法 建立大鼠酒精性脂肪肝模型，隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙散低、中、高劑量組。給藥后觀察藥物對(duì)模型大鼠血清及肝組織生化指標(biāo)的影響。結(jié)果 逍遙散可降低大鼠血清天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)含量;升高肝組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性，降低肝組織丙二醛(MDA)含量。結(jié)論 逍遙散治療酒精性肝病的機(jī)制可能與其抗脂質(zhì)過(guò)氧化，清除過(guò)多自由基有關(guān)。

逍遙散;酒精性肝病;過(guò)氧化

酒精性肝病是由于長(zhǎng)期過(guò)度飲酒引起的中毒性肝臟疾病，是西方發(fā)達(dá)國(guó)家肝硬化的主要病因(占80% ～90%)〔1〕，包括酒精性脂肪肝→酒精性肝炎→酒精性肝硬化等連續(xù)損害。脂肪肝對(duì)肝癌發(fā)生有助動(dòng)作用，而嗜酒和慢性病毒性肝炎并存者肝癌發(fā)生率更高。本文通過(guò)對(duì)大鼠血清中天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)含量及肝組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性，丙二醛(MDA)含量的研究，觀察中藥方劑逍遙散對(duì)酒精性肝損傷的防治作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 選擇純系Wistar健康成年大鼠50只(由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，飼養(yǎng)1 w后分別稱(chēng)重，隨機(jī)分為5組(每組10只，雌雄各半):空白組、模型組、逍遙散低、中、高劑量治療組。

1.2 藥物與試劑 逍遙散由當(dāng)歸、白芍、柴胡、茯苓、白術(shù)、甘草、薄荷、生姜組成(飲片購(gòu)自沈陽(yáng)市鑫貿(mào)大藥房)，加工成超細(xì)粉(平均粒徑14.91μm)，用生理鹽水分別制成1、2、3 g/ml三種制劑。白酒50°，北京二鍋頭(北京市京樂(lè)坊酒業(yè)有限公司)和純橄欖油(西班牙原裝)購(gòu)自沈陽(yáng)市大潤(rùn)發(fā)超市。AST、ALT、γ-GT、SOD、GSH-Px和MDA試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 空白組以0.9%生理鹽水代替同量酒精每日清晨灌胃;模型組采用 50°白酒(第1 周 8 ～12 g·kg－1·d－1，每周遞增2 g/kg，連續(xù)遞增2 w后不再遞增，即第1周8 g·kg－1·d－1，第 2 周 10 g·kg－1·d－1，第 3 周和第 4 周 12 g·kg－1·d－1)、橄欖油(2 g·kg－1·d－1) 的混合液每日清晨灌胃〔2〕;中藥各劑量組與模型組同時(shí)同樣方法造模，并從造模第1天開(kāi)始每日下午4時(shí)灌胃中藥制劑一次，低劑量組(等效于體重為70 kg成人的1日用量〔3〕)、中劑量組(2倍于低劑量組)、高劑量組(3倍于低劑量組)分別灌胃逍遙散超細(xì)粉低、中、高劑量制劑1ml/100 g體重、2ml/100 g體重、3ml/100 g體重〔3〕。以上5組均連續(xù)給藥4 w結(jié)束。實(shí)驗(yàn)期間，正常光照，室溫，正常飼料(購(gòu)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)和自來(lái)水飼養(yǎng)，每周一逐只稱(chēng)重，根據(jù)體重調(diào)整油量、酒量及藥量。治療組末次給藥后，各組大鼠均禁食12 h，分別稱(chēng)重后用乙醚麻醉，剪斷頸動(dòng)脈采血，分離血清(3 000 r/min，10 min)，－20℃保存?zhèn)錂z測(cè)AST、ALT、γ-GT。然后從肝臟上剪下約1 g肝組織，生理鹽水中漂洗，置于高速分散器中，用9 ml生理鹽水制成10%肝勻漿，3 000 r/min離心15 min，靜置取上清液，得肝組織勻漿，分裝于5 ml小瓶?jī)?nèi)，－20℃保存?zhèn)錂z測(cè)SOD、GSH、MDA。

1.4 觀察指標(biāo) 大鼠皮毛、行為、狀態(tài)、體重及死亡情況。

1.5 測(cè)定指標(biāo)、方法及儀器 應(yīng)用紫外分光光度計(jì)(UV-265FW，日本光電工業(yè)株式會(huì)社)檢測(cè)血清AST、ALT、γ-GT等生化指標(biāo);應(yīng)用高速分散器(XHF-1，上海金達(dá)生化儀器廠)檢測(cè)肝組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，因灌胃藥物或酒精灌入氣管而死亡大鼠3只，其余3只因不能耐受酒精而死亡。造模第1周各組大鼠在酒精灌胃后均四肢無(wú)力，精神萎靡，行動(dòng)遲緩，攻擊性降低，多數(shù)流涎，這些癥狀于2 h后逐漸緩解，造模2 w后除空白組外其他各組大鼠皮毛光澤度均較差，以模型組最差，體重增長(zhǎng)緩慢。

2.2 各組大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平比較 與空白組比較，模型組大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平顯著增高(P＜0.05，P＜0.01);逍遙散各劑量組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05，P ＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 逍遙散對(duì)酒精性肝病大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平的影響(±s)

表1 逍遙散對(duì)酒精性肝病大鼠血清AST、ALT、γ-GT水平的影響(±s)

與空白組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01

組別 n AST(IU/L) ALT(IU/L) γ-GT(U/L)空白組103.850±15.993 9 32.669±12.709 20.856±2.818 94.186±8.713模型組 10 49.140±11.0632)30.295±9.4461)112.384±16.7131)逍遙散小劑量組 9 39.251±8.2093)22.533±1.4803) 103.623±9.676逍遙散中劑量組 7 32.373±7.3714)21.211±2.8263)92.926±16.4103)逍遙散大劑量組 9 39.007±8.5253)22.603±3.1373)

2.3 各組大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平比較 與空白組比較，模型組大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平有顯著差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001);逍遙散各劑量組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05，P＜0.001)。見(jiàn)表2。

表2 逍遙散對(duì)酒精性肝病大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平的影響(±s)

表2 逍遙散對(duì)酒精性肝病大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平的影響(±s)

與空白組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01，3)P＜0.001;與模型組比較:4)P ＜0.05，5)P ＜0.001

組別 n SOD(U/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)9 106.802±12.186 38.933±6.094 8.75±2.061模型組 10 74.508±11.6663)21.058±14.1502)10.467±1.6431)逍遙散大劑量組 9 112.938±5.7875)38.838±18.2884) 9.149±3.016逍遙散中劑量組 7 113.056±7.6425)37.060±11.2474)7.914±2.7454)逍遙散小劑量組 9 106.481±6.8225)21.589±17.172 7.894±2.5754)空白組

3 討論

目前認(rèn)為自由基增多是酒精肝形成的一個(gè)重要原因，長(zhǎng)期過(guò)量攝入的酒精性飲品在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)氧化作用產(chǎn)生過(guò)多的氧化應(yīng)激產(chǎn)物，如OH－、O－2及HO－等自由基，這些自由基可攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物，改變生物膜通透性和流動(dòng)性，進(jìn)而影響其結(jié)構(gòu)及功能〔4〕。正常肝內(nèi)存在具有保護(hù)性抗氧化反應(yīng)物質(zhì)，SOD和還原型谷胱甘肽(GSH)是肝細(xì)胞內(nèi)主要的抗脂質(zhì)過(guò)氧化物質(zhì)，SOD能有效清除自由基，以保護(hù)細(xì)胞不受自由基損害。GSH-Px特異催化GSH與過(guò)氧化氫反應(yīng)生成水及氧化型谷胱甘肽(GSSG)，減輕過(guò)氧化物對(duì)細(xì)胞膜損傷，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用〔5〕。肝臟是酒精代謝的主要場(chǎng)所，在肝臟中，乙醇脫氫酶使酒精首先代謝成乙醛，隨后乙醛脫氫酶將乙醛還原成乙酸〔6〕，酒精代謝所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞有嚴(yán)重?fù)p害作用〔7，8〕。長(zhǎng)期飲酒，使SOD活力下降，不能有效清除自由基，過(guò)量攝入的酒精在超過(guò)了肝臟對(duì)酒精的生理代謝解毒能力的情況下，大量代謝為毒性化學(xué)物質(zhì)乙醛，乙醛能與GSH結(jié)合成復(fù)合物，迅速降低細(xì)胞內(nèi)GSH濃度，使GSH經(jīng)GSH-Px催化與過(guò)氧化氫反應(yīng)數(shù)量減少，GSH-Px活性下降，機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力減弱，引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)〔9〕，肝內(nèi)自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化物進(jìn)一步堆積，放大了自由基毒性作用，損傷肝細(xì)胞，致使AST、ALT、γ-GT 釋放入血液，使血清中 AST、ALT、γ-GT 活性升高。肝細(xì)胞膜是氧化應(yīng)激最活躍的部位，因此肝臟是酒精性損傷好發(fā)部位〔4〕。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化物分解的終末產(chǎn)物，因此，SOD和GSH-Px活性降低和MDA含量升高可間接地反映肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化損害程度。另外，長(zhǎng)期飲酒造成的營(yíng)養(yǎng)吸收不良也使食物中抗氧化劑吸收減少。故長(zhǎng)期飲酒既導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)促氧化物質(zhì)產(chǎn)生明顯增多，也使抗氧化物質(zhì)減少〔4〕，促發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡或凋亡。本結(jié)果表明，逍遙散中劑量的抗脂質(zhì)過(guò)氧化效果更好些，其能顯著提高SOD和GSHPx活性，降低MDA含量，提示逍遙散能有效抑制氧自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減輕其對(duì)肝細(xì)胞的損傷。

1 閻林奇.大黃素及其固體分散體對(duì)大鼠酒精性肝損傷干預(yù)作用的研究〔D〕.河北聯(lián)合大學(xué)碩士學(xué)位論文，2011.

2 許惠玉，陳志偉，李心宇，等.中藥復(fù)方對(duì)大鼠酒精性肝損傷防治中ALT、GSH-Px活性研究〔J〕.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001;22(2):124-6.

3 徐淑云，卞如濂，陳 修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:156-1535.

4 苗彥妮.葛花預(yù)防酒精性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究〔D〕.北京中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文，2008.

5 楊牧祥，田元祥，姚樹(shù)坤，等.解酒護(hù)肝飲對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清和肝組織MDA-GSH的影響〔J〕.河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2000;15(4):1-5，14.

6 陳錫美，黃志剛.消化內(nèi)科常見(jiàn)病用藥〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:201.

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R575

A

1005-9202(2012)16-3480-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.062

遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(2009A487)

宋光熠(1963-)，男，教授，主要從事糖尿病、心腦血管病藥理學(xué)研究。

劉文艷(1969-)，女，副教授，碩士，主要從事中藥藥理及毒理學(xué)研究。

〔2012-01-10收稿 2012-02-12修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)