谷化平 尚培中 (中國(guó)人民解放軍第251醫(yī)院，河北 張家口 075000)

老年結(jié)直腸癌中尾型同源轉(zhuǎn)錄因子-2和半乳糖凝素-3蛋白表達(dá)及其意義

谷化平 尚培中 (中國(guó)人民解放軍第251醫(yī)院，河北 張家口 075000)

目的 探討尾型同源轉(zhuǎn)錄因子-2(CDX-2)和半乳糖凝素3(Galectin-3，Gal-3)蛋白表達(dá)與老年大腸癌臨床病理特征的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)90例老年大腸癌組織和30例正常黏膜組織中CDX-2和Gal-3蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 90例老年大腸癌中CDX-2和Gal-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.6%(59/90)和60.0%(54/90)。老年大腸癌組織中CDX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于正常大腸組織(P＜0.05)，而Gal-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于正常黏膜組織(P＜0.05)。CDX-2和Gal-3表達(dá)與老年大腸癌的分化程度、Dukes分期、漿膜浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論 CDX-2和Gal-3蛋白表達(dá)與老年大腸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)其蛋白表達(dá)可作為判斷老年大腸癌預(yù)后的客觀(guān)指標(biāo)。

大腸腫瘤;基因表達(dá);抗原，CDX-2;抗原，Galectin-3;免疫組織化學(xué);預(yù)后

老年大腸癌是消化道常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。大腸癌的形成和轉(zhuǎn)移的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，受多種基因或多因子共同調(diào)控。本文采用免疫組織化學(xué)方法，聯(lián)合檢測(cè)老年大腸癌組織中尾型同源轉(zhuǎn)錄因子-2(CDX-2)和半乳糖凝素3(Galectin-3，Gal-3)蛋白表達(dá)狀況，旨在探討這兩種基因蛋白表達(dá)與老年大腸癌發(fā)生、發(fā)展和臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 取我院2006年1月至2010年1月手術(shù)切除、并經(jīng)病理確診的老年大腸腺癌90例(結(jié)腸癌50例，直腸癌40例)，男54例，女36例，年齡65～79歲，平均(66.89±5.48)歲。取同期患者遠(yuǎn)癌切緣處正常大腸黏膜組織(距癌灶＞4 cm)各30例作為對(duì)照觀(guān)察。標(biāo)本經(jīng)40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。

1.2 試劑 鼠抗人CDX-2、Gal-3單克隆抗體和LSAB試劑盒購(gòu)自邁新生物技術(shù)公司(均為即用型)。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 采用微波-鏈霉菌素-生物素(MWLSAB)免疫組織化學(xué)法和微波-金屬鹽抗原修復(fù)技術(shù)，即將切片常規(guī)脫蠟水化后，放入枸櫞酸緩沖液(10 mmol/L，pH 6.0)內(nèi)，用微波儀170W輻射5 min，冷卻后水洗。其他操作流程同常規(guī)LSAB法，所不同者為三步抗原孵育和正常血清封閉用微波儀130W分別輻射5 min，保溫2 min即可。實(shí)驗(yàn)用已知CDX-2和Gal-3陽(yáng)性胃癌組織作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。H2O2-DAB顯色。

1.4 結(jié)果判斷 CDX-2在細(xì)胞核、Gal-3在細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色者為陽(yáng)性。根據(jù)染色強(qiáng)度及顯色癌細(xì)胞比例將兩種蛋白表達(dá)狀況分為4級(jí):未見(jiàn)棕黃色顆粒為陰性(-);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%為弱陽(yáng)性(+)，25% ～75%為陽(yáng)性(++)，＞75%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。(+)以上為陽(yáng)性結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用配對(duì)資料χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CDX-2和Gal-3蛋白在老年大腸良、惡性病變中的表達(dá)免疫組織化學(xué)染色顯示CDX-2和Gal-3蛋白陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色或棕褐色。CDX-2蛋白陽(yáng)性產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，Gal-3蛋白陽(yáng)性產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)(圖1)。CDX-2蛋白在正常大腸黏膜組織中陽(yáng)性表達(dá)率為93.3%(28/30)，在大腸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為65.6%(59/90)，差異顯著(χ2=13.78，P ＜0.05);Gal-3 蛋白在正常大腸黏膜組織中陽(yáng)性表達(dá)率為0%(0/30)，在大腸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為 60.0%(54/90)，差異顯著(χ2=4.14，P＜0.05)。

2.2 CDX-2和Gal-3蛋白表達(dá)與老年大腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 CDX-2和Gal-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)均與老年大腸癌腫瘤部位、腫瘤大小無(wú)關(guān)，而與老年大腸癌分化程度、Dukes分期、漿膜浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05)(表1)。

2.3 CDX-2蛋白和Gal-3蛋白表達(dá)之間的相互關(guān)系 CDX-2陽(yáng)性表達(dá)的59例老年大腸癌中，Gal-3表達(dá)陽(yáng)性率為47.5%(28/59);在CDX-2陰性表達(dá)的31例老年大腸癌中，Gal-3表達(dá)陽(yáng)性為 83.9%(26/31)，差異顯著(χ2=8.02，P ＜0.05)。

表1 CDX-2和Gal-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)與老年大腸癌臨床病理的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

CDX-2基因最早由在果蠅的保守序列中發(fā)現(xiàn)，屬于同源盒基因的caudal家族成員之一，是編碼腸上皮細(xì)胞分化特異性核轉(zhuǎn)錄因子，結(jié)合腸上皮標(biāo)記物的CDX反應(yīng)元件，誘導(dǎo)和增強(qiáng)腸特異性基因的表達(dá)和活性，促進(jìn)細(xì)胞分化、柱狀形態(tài)和極化的形成。在胚胎期，CDX-2是誘導(dǎo)內(nèi)胚層細(xì)胞向腸上皮轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因素，并隨著發(fā)育過(guò)的進(jìn)展其表達(dá)趨向于腸上皮中，從人類(lèi)受精卵發(fā)育的第6周開(kāi)始，在腸上皮即可檢出CDX-2;在成人，CDX-2是控制腸上皮增殖分化的重要因子，正常表達(dá)的組織主要是從十二指腸至肛管的整個(gè)腸道上皮細(xì)胞，亦可表達(dá)于胰腺上皮細(xì)胞、胃和食管的腸上皮分化細(xì)胞，而正常食管、胃黏膜和其他正常上皮均無(wú)表達(dá)〔1，2〕。有研究發(fā)現(xiàn)，CDX-2在卵巢黏液性腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌、甲狀腺乳頭狀癌、膀胱腺癌和前列腺癌腺癌等也偶見(jiàn)表達(dá)，提示這些腫瘤具有向腸性分化的趨勢(shì)〔3〕。近年來(lái)研究表明，CDX-2表達(dá)與大腸癌的發(fā)生和預(yù)后相關(guān)〔4〕。本研究結(jié)果表明CDX-2失活或缺失參與了老年大腸癌的發(fā)生，檢測(cè)其表達(dá)異常，可作為老年大腸癌高危因素評(píng)價(jià)的參考指標(biāo)之一。有研究發(fā)現(xiàn)，CDX-2雜合性缺失的小鼠在烷化劑的誘導(dǎo)下更易發(fā)生結(jié)腸腫瘤〔5〕;通過(guò)體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)〔6〕，CDX-2 能抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，可降低腫瘤的惡性程度;通過(guò)RNA干擾阻止CDX-2的表達(dá)即可使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng);這些結(jié)果表明CDX-2可能為一種抑癌基因，檢測(cè)其表達(dá)對(duì)老年大腸癌的惡性程度判斷和患者預(yù)后分析均具有重要參考價(jià)值。

Gal-3是Galectin(半乳凝素)家族的一員，能識(shí)別糖蛋白和糖脂的特異性低聚糖結(jié)構(gòu)，廣泛表達(dá)于正常組織和腫瘤組織中，參與多種生理和病理過(guò)程，它可通過(guò)刺激細(xì)胞增殖、阻止腫瘤細(xì)胞凋亡，以及促進(jìn)新生血管形成、介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互黏附作用等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用〔7，8〕。近年來(lái)，通過(guò)在大腸癌中的研究發(fā)現(xiàn)，Gal-3在癌組織中的表達(dá)顯著高于正常腸黏膜組織，并與腫瘤惡性程度和患者的生存期相關(guān)，因此Gal-3被認(rèn)為是大腸癌原發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移腫瘤中可作為獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)〔9，10〕。本研究結(jié)果提示Gal-3蛋白高表達(dá)不僅與老年大腸上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，而且在腫瘤的臨床進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到重要促進(jìn)作用。Gal-3蛋白表達(dá)是老年大腸癌惡性進(jìn)展的生物學(xué)標(biāo)志，對(duì)預(yù)測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能方面具有較大實(shí)用價(jià)值，是一個(gè)預(yù)測(cè)老年大腸癌患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

CDX-2和Gal-3在老年大腸癌的發(fā)生發(fā)展、臨床進(jìn)展和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的病理過(guò)程中并非獨(dú)立事件，可能存在一個(gè)或多個(gè)中間環(huán)節(jié)將兩者聯(lián)系起來(lái)，共同參與了老年大腸癌的演化過(guò)程。因此，在臨床病理活檢中檢測(cè)其基因蛋白表達(dá)，從不同側(cè)面可以更確切、更全面地深入了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展，反映出腫瘤的生物學(xué)行為，也為輔助診斷、預(yù)后判斷和治療提供更為可靠的依據(jù)。

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R735.3

A

1005-9202(2012)16-3405-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.020

谷化平(1950-)，男，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤臨床病理研究。

〔2011-05-18收稿 2011-09-16修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)