吳樹林

不同計數(shù)法對乙肝患者白細(xì)胞檢測的影響

吳樹林

目的 探討不同計數(shù)法對乙肝患者白細(xì)胞檢測的影響。方法 對筆者所在醫(yī)院50例慢性乙型重癥肝炎患者(血清膽紅素150～500 μmol/L)，用血細(xì)胞分析儀計數(shù)和手工方法計數(shù)，對兩種方法進行比較。結(jié)果 高膽紅素血用血細(xì)胞分析儀計數(shù)與手工法計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，高膽紅素血能夠使血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞計數(shù)假性增高。結(jié)論 高膽紅素血對血細(xì)胞分析儀計數(shù)結(jié)果有較大影響，應(yīng)用手工方法復(fù)檢。

計數(shù)法; 乙肝; 白細(xì)胞

黃疸是慢性重癥肝炎的主要表現(xiàn)之一，主要是由肝細(xì)胞受損、壞死后攝取、轉(zhuǎn)化、排泄膽紅素的能力下降使得血液中的膽紅素濃度升高所致。近年來，隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)突飛猛進的發(fā)展，全自動血細(xì)胞分析儀已在全國廣泛應(yīng)用，這不僅提高了實驗結(jié)果的精密性和準(zhǔn)確性，而且也提高了工作人員的效率。但是，各類儀器仍有其不足之處，在日常工作中筆者發(fā)現(xiàn)，用血細(xì)胞分析儀對重癥黃疸肝炎患者進行血常規(guī)測定時，部分患者白細(xì)胞假性增高，如果檢驗人員不進行下一步手工復(fù)查，會發(fā)出不準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果，嚴(yán)重影響臨床醫(yī)生對患者的治療。本文探討不同計數(shù)法對白細(xì)胞計數(shù)分類的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 50例重癥乙型肝炎患者的血常規(guī)標(biāo)本均來自筆者所在醫(yī)院2011年1月～2011年6月感染科患者，其中男33例，女17例，年齡19 d～72歲，其中嬰兒5例。經(jīng)生化檢驗?zāi)懠t素150～500 μmol/L。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC－5380五分類血細(xì)胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控;日本Olympus顯微鏡;血清膽紅素檢測使用羅氏MODULE P800生化分析儀及原裝配套試劑。

1.3 方法 (1)血細(xì)胞分析儀檢測方法:使用邁瑞B(yǎng)C－5380血細(xì)胞分析儀對50份標(biāo)本進行檢測，操作嚴(yán)格按生產(chǎn)廠商的操作手冊進行。即取患者靜脈血2.0 ml，置于EDTAK2抗凝管內(nèi)，充分顛倒混勻，1 h內(nèi)上機檢測。同種標(biāo)本用相同儀器RRBC模式復(fù)檢。(2)手工操作方法:嚴(yán)格按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第2版進行［1］。即用已校正好的微量吸管吸取20 μl上述血樣，放入0.38 ml WBC稀釋液內(nèi)，用改良牛鮑氏計數(shù)板顯微鏡計數(shù)。手工檢測由于使用顯微鏡目測，能夠排除紅細(xì)胞及紅細(xì)胞碎片的影響，此結(jié)果與有關(guān)研究［2，3］相符。體外標(biāo)本去除高膽紅素血漿后，不能導(dǎo)致儀器檢測白細(xì)胞數(shù)的改變，此結(jié)果與有關(guān)研究［4］相符。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用PEMS 3.1醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，數(shù)據(jù)采用單樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

50例重癥黃疸肝炎患者的白細(xì)胞檢測中，血細(xì)胞分析儀檢測與手工操作方法檢測的結(jié)果分別為(6.934±4.323)×109/L和(5.4±2.16)×109/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.1264，P ＜0.001)。

3 討論

深圳邁瑞公司生產(chǎn)的BC－5380型全自動五分類血細(xì)胞分析儀采用半導(dǎo)體激光散射技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)和先進的流式分析裝置對白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板系列多個參數(shù)進行精確的計數(shù)和分類分析，是目前國內(nèi)能生產(chǎn)五分類血細(xì)胞分析儀為數(shù)不多的廠家，具有快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。白細(xì)胞計數(shù)前會自動以溶血劑先將紅細(xì)胞溶解，紅細(xì)胞溶解后血細(xì)胞分析儀再計數(shù)白細(xì)胞池中顆粒數(shù)量，對白細(xì)胞是否有干擾取決于紅細(xì)胞在溶血素作用后的破壞程度。正常人的紅細(xì)胞加入溶血素后很容易溶解，肝病患者肝細(xì)胞受損后其攝取、轉(zhuǎn)化、排泄游離膽紅素的能力下降，從而使患者出現(xiàn)高膽紅素血癥。高膽紅素能夠使紅細(xì)胞膜出現(xiàn)異常，使紅細(xì)胞對溶血素具有一定的抵抗能力，使一部分溶血素被消耗而導(dǎo)致溶血素相對不足，紅細(xì)胞不能夠被完全破壞，未破壞的紅細(xì)胞和碎片由于和淋巴細(xì)胞體積大小接近使血細(xì)胞分析儀誤認(rèn)其為白細(xì)胞，因此導(dǎo)致白細(xì)胞計數(shù)假性增高和白細(xì)胞分類不準(zhǔn)確。同時，高膽紅素能夠和紅細(xì)胞膜結(jié)合，血小板脂質(zhì)結(jié)合形成大分子物質(zhì)，血細(xì)胞分析儀檢測時會把這些大分子物質(zhì)和未破壞的紅細(xì)胞記成淋巴細(xì)胞，從而使白細(xì)胞的總數(shù)明顯高于手工計數(shù)，細(xì)胞分類時淋巴細(xì)胞假性增高，中性粒細(xì)胞相對減少。另外，標(biāo)本的溶血不全可能會堵塞機器。

生理性膽紅素可以清除脂質(zhì)過氧化物，能保持正常細(xì)胞膜脂質(zhì)的流動性。但高濃度的膽紅素容易形成穩(wěn)定的膽紅素自由基［5］，使多余的細(xì)胞膜脂不能被清除，細(xì)胞膜脂結(jié)合蛋白質(zhì)后溶血劑也難以溶解，導(dǎo)致儀器在進行白細(xì)胞計數(shù)時出現(xiàn)誤判，把未溶解的紅細(xì)胞記成白細(xì)胞，出現(xiàn)白細(xì)胞的假性增高，但并不是所有的高膽紅素血癥的白細(xì)胞計數(shù)都假性增高。值得注意的一點是，由于膽紅素會導(dǎo)致白細(xì)胞計數(shù)的假性增高和細(xì)胞分類時淋巴細(xì)胞假性增高，當(dāng)遇到分析儀計數(shù)此兩項同時增高時，應(yīng)用手工方法復(fù)查是否是膽紅素影響的假性增高。

有資料表明，肝病患者和新生兒紅細(xì)胞膜脂類異常，具有抵抗溶血素的作用，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解不全［6］，就會干擾白細(xì)胞的測定，造成白細(xì)胞假性增高。而手工方法用1%的HCL可溶解紅細(xì)胞，不受上述因素的影響。有文獻報道，重癥黃疸患者血液標(biāo)本按儀器要求稀釋后，在顯微鏡下觀察紅細(xì)胞的溶解情況，需經(jīng)120 s才能完全溶解紅細(xì)胞，而一般的血細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞的時間會小于60 s。因此，溶血素的作用時間也是導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解不全的原因。消除膽紅素對白細(xì)胞計數(shù)的影響，可采用離心洗滌，用生理鹽水洗滌后重新檢測。

綜上所述，重癥肝病患者的高膽紅素血液標(biāo)本能夠引起血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞計數(shù)假性增高，如果偏信血細(xì)胞分析儀的檢測結(jié)果，會誤導(dǎo)醫(yī)生按合并感染處理，不僅給患者造成一定的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，還會給患者的病情造成一定的影響。因此，在遇到黃疸患者血細(xì)胞分析白細(xì)胞增高時，必須使用手工方法復(fù)查，才能為臨床提供更為準(zhǔn)確，可靠的依據(jù)。

［1］葉應(yīng)嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第2版.南京:東南大學(xué)出版社，1997:4.

［2］鄺泳云.一種異常白細(xì)胞直方圖的分析及原因初探［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2000，15(1):15.

［3］凌勵，金麗茵，林紫云.肝病患者白細(xì)胞異常直方圖原因初探［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2000，15(6):337 －338.

［4］呂斌斌，梁海麗，馮靜霞.黃疸乳糜對血液細(xì)胞分析結(jié)果的影響［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2004(1):64 －65.

［5］劉湘陶，劉慧娟.膽紅素自由基對大鼠肝細(xì)胞損傷作用的研究［J］.生物化學(xué)雜志，1995，11(1):71 －75.

［6］叢玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗學(xué)［M］.第2版.北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社，1997:41.

10.3969/j.issn.1674 －4985.2012.06.050

466000河南省周口市中心醫(yī)院

吳樹林

2011－12－29)

(本文編輯:王宇)