林江紅 武培彪

(巴彥淖爾市中心血站 內(nèi)蒙古巴彥淖爾 015000)

為了保障臨床用血安全,我國的法律法規(guī)明確規(guī)定獻(xiàn)血者血液樣本必須進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項(xiàng)目的檢測(cè),只有陰性的血液才能允許用于臨床。我們用ELISA檢測(cè)方法對(duì)巴彥淖爾地區(qū)無償獻(xiàn)血者血清樣本進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項(xiàng)目的檢測(cè),在實(shí)際操作中?？梢姷綑z測(cè)結(jié)果為假陽性或假陰性的錯(cuò)誤結(jié)果。為了避免或減少ELISA檢測(cè)實(shí)際操作中的影響因素,我們對(duì)2010年至2011年巴彥淖爾地區(qū)2萬余份無償獻(xiàn)血者血液樣本檢測(cè),就影響檢測(cè)結(jié)果比較常見的因素進(jìn)行了初淺的分析和探討,報(bào)道如下。

1 材料與方法

(1)樣本。

巴彥淖爾地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液樣本。

(2)儀器STAR全自動(dòng)加樣器,FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng);Wellscan MK3酶標(biāo)儀,Wellscan 4MK2洗板機(jī)。

(3)試劑方法ELLSA診斷試劑盒由金豪制藥股份有限公司、萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、英科(廈門)科技有限公司提供,嚴(yán)格按照各廠家提供的ELISA試劑說明書,對(duì)所有被檢血液樣本進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項(xiàng)目的檢驗(yàn)操作。

2 結(jié)果

ELISA試驗(yàn)檢測(cè)工作中會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性的錯(cuò)誤結(jié)果。

3 分析

3.1 試劑的影響因素

在對(duì)無償獻(xiàn)血者血清樣本檢測(cè)時(shí)我們遵照《血站管理辦法》的規(guī)定,每一份樣本都用ELISA法進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項(xiàng)目的初、復(fù)檢驗(yàn),初、復(fù)檢均選用有批準(zhǔn)文號(hào)、批批檢定報(bào)告、防偽標(biāo)簽的2個(gè)不同廠家的試劑盒進(jìn)行篩檢,常會(huì)遇到同一份樣本同一檢測(cè)項(xiàng)目在相同條件下檢測(cè),一家試劑檢測(cè)陰性,另一家試劑檢測(cè)陽性,這是因?yàn)椴煌瑥S家的試劑抗體、抗原組合不同,來源和用量方面也有差異,造成我們?cè)诤Y檢獻(xiàn)血員時(shí),容易發(fā)生漏檢。因此,試劑的選擇是保證ELISA試驗(yàn)測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵要素。我們?cè)谠囼?yàn)前一定要對(duì)購進(jìn)ELISA試劑進(jìn)行血清盤的檢測(cè)。試驗(yàn)前將試劑盒從冰箱中取出后,需要在與室溫平衡再進(jìn)行測(cè)定,目的是能使反應(yīng)微孔的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足測(cè)定需求。不同批號(hào)、不同廠家的試劑,不能混合使用。對(duì)于超過有效期的試劑則嚴(yán)禁使用。

4 操作中的影響因素

ELISA試驗(yàn)操作過程有加樣、溫育、洗板、顯色、結(jié)果判定5個(gè)步驟。加樣時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致孔間差異加大,更不可先把陰陽性及質(zhì)控血清加好后長時(shí)間等待樣品;加酶試劑及樣品,要加在孔底,不能加在孔壁上,加入量不準(zhǔn),導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確;溫育對(duì)于ELISA檢測(cè)是最關(guān)鍵的因素,根據(jù)試劑盒的說明書選擇溫育的時(shí)間和溫度,加完樣本或試劑后將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時(shí),孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃需要一定時(shí)間,如果是將微孔板放入溫箱即開始計(jì)時(shí),這樣就容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,易致弱陽性樣本測(cè)不出來;洗板的關(guān)鍵是洗板次數(shù)選擇。洗板次數(shù)較少,造成殘留,可引起假陽性結(jié)果。洗板次數(shù)過多,可造成抗原抗體結(jié)合物洗脫,造成假陰性結(jié)果;在實(shí)際的操作中,往往對(duì)于顯色的時(shí)間不夠重視,顯色時(shí)間過短容易造成弱陽性樣本的漏檢。顯色時(shí)間過長會(huì)使質(zhì)控值偏高,影響質(zhì)控圖的繪制;讀取結(jié)果可定性分析也能定量分析,但要在15～30min內(nèi)完成,定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10～15cm;定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,需先預(yù)熱15～30min再進(jìn)行測(cè)定。

5 樣本質(zhì)量的影響因素

樣本質(zhì)量的好壞直接影響ELISA檢測(cè)的結(jié)果。樣本溶血、被細(xì)菌污染、樣本貯存時(shí)間過長反復(fù)凍融、樣本凝固不全,這些因素均可導(dǎo)致ELISA檢測(cè)獻(xiàn)血者血液樣本時(shí),造成假陽性或假陰性的錯(cuò)誤結(jié)果。樣本乳糜的血清中有大量的脂肪顆粒,將其加入微孔中易粘附于微孔內(nèi)壁,洗板時(shí)不易洗去,干擾ELISA檢測(cè)結(jié)果。

樣本采集時(shí)必須注意避免人為因素引起的溶血和細(xì)菌污染;檢測(cè)的血清樣本不能立即檢測(cè)時(shí),5d內(nèi)檢測(cè)的樣本可存放于4℃冰箱,1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫保存,凍存后融解的樣本,應(yīng)輕柔的充分混勻后再檢測(cè);采集血清樣本時(shí)用帶分離膠的采血試管或在采血試管中加入適量的促凝劑,避免樣本凝固不全。大力宣傳無償獻(xiàn)血相關(guān)知識(shí),加強(qiáng)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前的問診,防止采集到乳糜的血液,確保血液檢測(cè)質(zhì)量。

綜上所述,ELISA檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于血站對(duì)無償獻(xiàn)血者的篩檢和血液的檢測(cè)工作中。在實(shí)際工作中,ELISA試驗(yàn)影響測(cè)定結(jié)果的因素較多,應(yīng)采取相應(yīng)措施,避免或減少影響因素,才能保證血液檢測(cè)質(zhì)量,為臨床提供合格安全的血液。

[1]李金明.臨床酶免疫測(cè)定技術(shù)[M].人民軍醫(yī)出版社,2005:87～94.

[2]李會(huì)英.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)影響因素的分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2007,4(10):985～986.