陳衛(wèi)衛(wèi),何煒玲,農(nóng)玉梅,梁丹,易蔚,梁秀珍
(廣西中醫(yī)學院,廣西南寧530001)
小兒消食化積膏由炒山楂、炒麥芽等多味中藥組成的經(jīng)驗方,具有消食健脾、理氣化積等功效,主治小兒食積氣滯、消化不良、脘腹脹滿、腹瀉便溏等癥。臨床上以湯劑的形式給藥,療效顯著,深受患者歡迎。但湯劑因服用不便,而且口感不佳,導致小兒服用困難?,F(xiàn)擬將其提取精制后制成食品膏狀物,既保留湯劑的原有優(yōu)點,又彌補湯劑的不足,以大大提高小兒患者的順應(yīng)性。星點設(shè)計-效應(yīng)面法是國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的工藝篩選方法,具有篩選精密度高、試驗次數(shù)少、預測性好等優(yōu)點[1]。本實驗采用二因素五水平的星點設(shè)計表安排提取工藝實驗,以總評“歸一值”作為評價指標,用效應(yīng)面法選擇最佳的提取工藝,為小兒消食化積膏的后續(xù)研究提供參考依據(jù)。
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炒山楂等藥材均購自廣西南寧市老百姓大藥房,經(jīng)廣西中醫(yī)學院寧小清副教授鑒定,均符合《中國藥典》2010年版一部要求;其余試劑均為分析純。
1.2.1 提取次數(shù)的選擇
采用單因素方法,考察影響消瘍分散片提取工藝的因素,為星點設(shè)計各因素及其水平的設(shè)計提供依據(jù)。由于提取次數(shù)為非連續(xù)變量,回歸處理較困難,所以結(jié)合預試驗結(jié)果和工業(yè)生產(chǎn)的實際,將提取次數(shù)定為2 次。
1.2.2 星點試驗設(shè)計
根據(jù)預試驗結(jié)果及文獻[2-6],以加水倍量(10 倍~22倍)、提取時間(90 min~180 min)為考察因素,以枸櫞酸含量和干膏率為評價指標,按倍)、提取時間(90 min~180 min)為考察因素,以枸櫞酸含量和干膏率為評價指標,按照星點設(shè)計-效應(yīng)面法二因素五水平表進行試驗,各因素水平的極值見表1,試驗設(shè)計見表2。
1.2.3 水提液的制備
按處方比例稱取藥材,以星點設(shè)計實驗表中各實驗號的條件分別煎煮,濾過,濾液定容至500 mL,放置備用。
表1 星點設(shè)計因素與水平編碼表Table 1 Factors and levels for central composite design
1.2.4 枸櫞酸含量的測定[7]
精密吸取水提取液25 mL,加水50 mL,加酚酞2滴,用0.1 mol/L 的NaOH 滴定液滴定,計算枸櫞酸的含量(枸櫞酸的含量為每1 克炒山楂藥材中所含枸櫞酸的含量)。
1.2.5 浸膏得率的測定
精密量取各個星點設(shè)計實驗號的水提取液25 mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴鍋上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷卻30 min,迅速精密稱重,計算干膏率。
將枸櫞酸含量和干膏率這兩個指標用Hansan 方法分別轉(zhuǎn)化為0~1 之間的“歸一值”,對以各指標“歸一值”求算幾何平均值,得到總評“歸一值”,見表2。
表2 星點設(shè)計實驗與結(jié)果Table 2 Arrangement and results of central composite design
用Statistica6.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù),以O(shè)D 值為指標進行多元線性回歸擬合,Y (OD)=-0.580 920+0.026 809X1+0.003 962X2(r=0.584 1,P<0.188 37),結(jié)果表明OD 和兩個影響因素之間的線性擬合度不佳,方程預測性不好,因此該模型不合適,故采用二項式擬合得到模型方程Y (OD)=-6.704 05+0.438 919X1+0.049 697X2-0.011 83X12-0.000 15X22-0.000 248X1X2,其中r=0.890 19,結(jié)果表明非線性擬合與線性擬合相比,r值有很大的提高,但各項系數(shù)的P 值有些大于0.05,方程沒有顯著性,因此需要刪項提高可信度。本實驗未將模型進一步簡化,而是以此方程作為分析及模型的預測,通過用Statistica610 統(tǒng)計軟件的三維效應(yīng)面來反映最佳區(qū)域,見圖1。
由圖1 效應(yīng)面分析得知,隨著溶劑倍量和提取時間的增加,最優(yōu)區(qū)域OD 值在0.4~0.6,這時溶劑倍量為14 倍~19 倍,提取時間在135 min~175 min。
經(jīng)綜合考慮后,選定最佳工藝條件為:X1(加水倍數(shù))為17 倍,X2(提取時間)為155 min,提取2 次。
放大處方量5 倍,稱取藥材3 份,根據(jù)優(yōu)選出的最佳工藝進行提取,結(jié)果如下:實際測得OD 值為0.809 6,與理論預測值0.784 5 的偏差率為-3.199%。結(jié)果表明,所建立的數(shù)學模型具有較好的預測性,所選的工藝條件重現(xiàn)性較好。
表3 驗證試驗結(jié)果Table 3 Results of verification test
星點設(shè)計-效應(yīng)面法是國外常用的一種先進的實驗設(shè)計方法,是通過描繪效應(yīng)對考察因素的效應(yīng)面,從效應(yīng)面上選擇最佳的效應(yīng)區(qū),從而回推出自變量的取值范圍即最佳的實驗條件的優(yōu)化法。使用起來直觀、方便、效果較好。相對于正交設(shè)計更接近實際,精度更高,預測性更好。
根據(jù)《中國藥典》2010年版一部“山楂”項下選擇枸櫞酸含量測定法,采用酸堿滴定法測定枸櫞酸的含量,操作簡單可行。
通過效應(yīng)面法,設(shè)計二因素五水平分析方法進行試驗,得到最佳提取工藝為最佳工藝條件為:加水倍為17 倍,提取時間為155 min,提取2 次。經(jīng)驗證,該方法的實際測得值與理論預測值的偏差率為-3.199%。
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