張 平 張本恕

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北 保定 071000)

神經(jīng)變性疾病是一類緩慢起病，病程呈進(jìn)行性發(fā)展，預(yù)后極差的疾病，迄今為止幾乎沒(méi)有任何有效的治療方法。臨床常見(jiàn)的神經(jīng)變性疾病有帕金森病(PD)、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)、亨廷頓舞蹈病(HD)、阿爾茨海默病(AD)等。這些疾病雖病因各不相同但在病理上均有不同部位及不同程度的神經(jīng)元脫失和功能異常。盡管已證實(shí)成體的某些腦組織區(qū)域(如腦室下及海馬齒狀回)仍存在神經(jīng)發(fā)生，甚至在人類也發(fā)現(xiàn)了這一現(xiàn)象，但中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自我修復(fù)能力仍然是十分有限的，原因是因?yàn)槌审w缺乏足夠數(shù)量的內(nèi)源性干細(xì)胞，而對(duì)于神經(jīng)變性疾病，內(nèi)源性干細(xì)胞更為缺乏，加之細(xì)胞構(gòu)成環(huán)境的異常，使丟失的神經(jīng)細(xì)胞無(wú)法得以修復(fù)。替代丟失的神經(jīng)元，使之功能恢復(fù)，延緩病程進(jìn)展，是治療這類疾病的新思路。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是成體干細(xì)胞家族的重要成員，最近醫(yī)學(xué)領(lǐng)域乃至整個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)和前沿。

1 MSCs來(lái)源

MSCs源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，具有自我復(fù)制能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，屬于非終末分化細(xì)胞，它既有間質(zhì)細(xì)胞，又有內(nèi)皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞的特征。起初認(rèn)為MSCs僅存在于骨髓，然而近幾年發(fā)現(xiàn)，MSCs還可來(lái)源于其他組織〔1～4〕，如脂肪組織、胎兒組織、羊水、骨膜。研究證實(shí)人體各個(gè)器官和組織都存在 MSCs〔5～8〕，并且從不同的動(dòng)物貓、狗、狒狒、豬均可獲得。MSCs的數(shù)量隨著年齡增長(zhǎng)〔6〕和身體虛弱〔7〕下降，新生兒的MSCs的量最多，然后到80歲時(shí)大約下降50%〔6〕。

臨床上獲得MSCs的方法最通常是從骨髓中分離，常用的骨髓MSCs分離與培養(yǎng)方法有貼壁培養(yǎng)篩選法、密度梯度離心法、流式細(xì)胞儀或免疫磁珠分選法。貼壁篩選法是根據(jù)干細(xì)胞貼壁特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，如造血系細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等，達(dá)到分離純化干細(xì)胞的目的，此方法操作簡(jiǎn)單，對(duì)細(xì)胞損傷小。因此目前常用方法仍為貼壁法。

2 MSCs的生物學(xué)特性

2.1 MSCs具有多向分化特性 MSCs在上世紀(jì)60年代被發(fā)現(xiàn)后，它的多向分化能力就被人們所重視。目前相當(dāng)多的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，在適當(dāng)?shù)臈l件下，MSCs可以分化為脂肪、成骨、軟骨、骨骼肌、心肌、肌腱等中胚層來(lái)源的細(xì)胞，而且還可以橫向分化〔9〕為外胚層，如神經(jīng)細(xì)胞〔10〕及內(nèi)胚層細(xì)胞，如肝細(xì)胞和胰島細(xì)胞〔11，12〕。

研究證實(shí)MSCs在體內(nèi)外均可以分化為神經(jīng)細(xì)胞。Sanchez等〔13〕用腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BDNF)及全反式維甲酸(ATRA)在體外將大鼠和人的MSCs定向誘導(dǎo)成神經(jīng)細(xì)胞。Woodbury等〔14〕將大鼠骨髓MSCs先用DMEM和β-巰基乙醇誘導(dǎo)，再由DMEM、巰基乙醇(BME)組成的神經(jīng)元誘導(dǎo)介質(zhì)和DMEM、DMSO、丁羥茴醚(BHA)誘導(dǎo)介質(zhì)誘導(dǎo)MSCs產(chǎn)生神經(jīng)元表型，這些細(xì)胞表達(dá)NSE、NeuN、NF-M等神經(jīng)元標(biāo)志。Kopen等〔10〕向新生鼠側(cè)腦室注射骨髓MSCs以求證這些骨髓來(lái)源的多能MSCs在暴露于腦組織的微環(huán)境中是否可以轉(zhuǎn)變?yōu)樯窠?jīng)細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在注射2 d后，MSCs經(jīng)過(guò)前腦，小腦遷移入受者腦組織，且未有MSCs的破壞。位于紋狀體及海馬分子層中的MSCs表達(dá)神經(jīng)膠原纖維蛋白，分化為成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞。在腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性的供者神經(jīng)元細(xì)胞，提示MSCs可能已分化為神經(jīng)元。Kohyama等〔15〕的研究發(fā)現(xiàn)MSCs誘導(dǎo)生成的神經(jīng)元樣細(xì)胞具有神經(jīng)功能，它們能對(duì)去極化刺激有反應(yīng)，乙酰膽堿能快速并可逆地增加鈣離子內(nèi)流，這同神經(jīng)元的反應(yīng)是相同的。因此移植MSCs治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病是可行的。

2.2 MSCs具有“歸巢” MSCs有歸巢現(xiàn)象，尤其組織有損傷或在病理?xiàng)l件下。在體內(nèi)，植入的MSCs可以在體內(nèi)損傷組織微環(huán)境的作用下，遷移定位并分化為相應(yīng)的組織細(xì)胞〔16，17〕。

MSCs自血中穿過(guò)上皮細(xì)胞，到達(dá)受損的組織，具體機(jī)制尚不清楚，研究證實(shí)MSCs表面表達(dá)多種趨化因子受體、選擇素和細(xì)胞黏附分子，從而可促使MSCs向不同組織遷徙，這將使MSCs支持組織再生，修正遺傳缺陷，減緩慢性炎癥反應(yīng)，以及用這些細(xì)胞作為生物制劑或基因良好載體成為可能。

2.3 MSCs的免疫調(diào)節(jié)作用 MSCs屬于未成熟的成體干細(xì)胞，自身免疫原性低，同種異體移植后無(wú)排斥反應(yīng)或反應(yīng)較弱〔18〕，在外周耐受，移植耐受，自身免疫，腫瘤逃逸以及母-胎兒耐受過(guò)程中是重要的免疫調(diào)節(jié)劑〔19，20〕。MSCs能夠抑制T細(xì)胞和 NK 細(xì)胞行使功能〔21，22〕;Corcione等〔23〕的實(shí)驗(yàn)證實(shí) MSCs能顯著減少B淋巴細(xì)胞IgM、IgG、IgA的分泌;最近有學(xué)者利用MSCs的免疫調(diào)節(jié)治療自身免疫性疾病的患者，收到很好的臨床效果〔24〕。另外我們注意到MSCs的免疫抑制作用在治療劇烈移植物抗宿主病(GVHD)時(shí)是非常重要的，但對(duì)于腫瘤的治療，由于移植的MSCs的免疫抑制作用可能會(huì)導(dǎo)致對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)的下降，限制MSCs在腫瘤治療中的應(yīng)用。

3 MSCs治療神經(jīng)變性疾病的進(jìn)展

3.1 MSCs治療PD研究 目前PD臨床以藥物治療為主。左旋多巴可以改善臨床癥狀，但僅是一種遞質(zhì)替代治療，不能中止或逆轉(zhuǎn)病程，而且服用時(shí)間長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)劑末現(xiàn)象、開(kāi)關(guān)現(xiàn)象等一系列并發(fā)癥。外科治療尤其是腦深部刺激治療PD雖然取得了一定的效果，但腦深部刺激治療對(duì)自主神經(jīng)癥狀和認(rèn)知障礙無(wú)明顯療效，且有顱內(nèi)出血、癲癇和一過(guò)性抑郁等并發(fā)癥。如何預(yù)防或治療上述這些并發(fā)癥一直是令臨床醫(yī)生棘手的難題，目前還沒(méi)有有效手段來(lái)防止這些并發(fā)癥。最根本的原因是不論是遞質(zhì)替代治療還是外科手術(shù)治療都不能改善腦內(nèi)環(huán)境，不能增加多巴胺能神經(jīng)元的數(shù)目，相反由于多巴的神經(jīng)毒性和電極的刺激還會(huì)使神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)一步減少，因此尋求一種從病因上增加神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞數(shù)目的治療具有更重要的意義。

移植多巴胺能神經(jīng)元替代已經(jīng)變性的神經(jīng)元，恢復(fù)黑質(zhì)紋狀體多巴系統(tǒng)的完整性并改善其功能，很可能是一項(xiàng)非常有前途的治療措施。Ye等〔25〕證明了骨髓MSCs紋狀體內(nèi)移植可減輕 1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTT)誘導(dǎo)的 PD 大鼠模型的運(yùn)動(dòng)功能障礙。Jin等〔26〕觀察移植MSCs于正常大鼠紋狀體內(nèi)后，對(duì)腦內(nèi)酪氨酸羥化酶(TH)蛋白以及多巴胺(DA)蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)移植細(xì)胞的紋狀體內(nèi)不但TH蛋白和THmRNA的水平明顯增高，而且DA的表達(dá)較非移植細(xì)胞的紋狀體內(nèi)明顯增高，與此同時(shí)，移植的MSCs分化為神經(jīng)元、星形細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。MSCs移植治療PD的可行性打破了腦細(xì)胞受損后不能再生和功能不能恢復(fù)的觀點(diǎn)，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能重建提供了新的途徑。近年來(lái)隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，學(xué)者嘗試將轉(zhuǎn)基因技術(shù)與干細(xì)胞移植相結(jié)合治療PD。Schwarz等〔27〕在體外獲取純化的骨髓MSCs，然后將TH和三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)水解酶I的基因轉(zhuǎn)入MSCs中。將此細(xì)胞輸入到帕金森病的兔模型中，發(fā)現(xiàn)這些被轉(zhuǎn)入的基因能夠在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)9 d，MSCs在體內(nèi)存活達(dá) 87 d。學(xué)者 Venkataramana〔28〕將 7 位帕金森患者自體骨髓來(lái)源的MSCs通過(guò)腦立體定位儀單側(cè)移植入側(cè)腦室旁區(qū)域，患者平均年齡22～62歲，發(fā)病時(shí)間(14.7±7.56)個(gè)月，隨訪10～36個(gè)月，發(fā)現(xiàn)3名患者UPDRS評(píng)分明顯改善，面部表情，步態(tài)以及凍結(jié)發(fā)作均明顯改善，2個(gè)病人減少了口服的治療藥物，這些結(jié)果表明，腦入移植自體骨髓MSCs是安全的，MSCs移植治療PD的可行性打破了腦細(xì)胞受損后不能再生和功能不能恢復(fù)的觀點(diǎn)，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能重建提供了新的途徑。但是真正走上臨床還需要進(jìn)行大宗的臨床的非隨機(jī)實(shí)驗(yàn)研究。

3.2 MSCs治療AD研究 AD是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能和記憶功能障礙，大部分AD病人生活不能自理。發(fā)病年齡為40～90歲，大部分在65歲以后，是老年人群中癡呆最常見(jiàn)的病因。研究發(fā)現(xiàn)AD病人腦內(nèi)Meynert核的膽堿能神經(jīng)元發(fā)生明顯的退行性病變，海馬中的膽堿能神經(jīng)元選擇性喪失功能，大腦皮質(zhì)中乙酰膽堿酯酶(AChE)和膽堿乙?；?ChAT)水平下降〔29，30〕，不僅老年人患AD，30～50歲的青壯年也會(huì)患病，但能夠確診的病人大部分在65歲以上。AD發(fā)病的早期形式多發(fā)生在青年人，僅占總發(fā)病人數(shù)的10%以下，一般認(rèn)為是由家族遺傳導(dǎo)致的。

目前對(duì)AD的治療尚無(wú)很好的方法，主要應(yīng)用AChE抑制劑類藥物和神經(jīng)保護(hù)因子來(lái)緩解癥狀。2010年日本科學(xué)家Toda〔31〕提出，AChE抑制劑是目前姑息治療 AD的臨床有效藥物，但是由于對(duì)周?chē)鞴俚母弊饔?，致使臨床效果有限。AD患者除了有記憶缺陷外，常合并有情感抑郁，因此認(rèn)為同時(shí)抑制AChE和5-羥色胺(5-HT)受體的拮抗劑將是很好的治療方法。另外近年來(lái)在許多臨床前期模型實(shí)驗(yàn)中認(rèn)為美金剛〔32〕可以改善學(xué)習(xí)和記憶能力。但是這些藥物均只能改善癥狀，不能延緩病情發(fā)展。

隨著干細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，干細(xì)胞替代治療作為一種新的治療方案得到人們的重視。已證實(shí)在AD病人的腦內(nèi)有嚴(yán)重的Aβ沉積，主要是由于β和α分泌酶降解淀粉樣β前體蛋白(APP)所致。有報(bào)道表明，將人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(其中富集有臍帶血MSCs)移植到APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)后能夠明顯地緩解小鼠的AD癥狀〔33〕。最新研究表明α分泌酶消化APP后形成的蛋白sAPPα，是一種有效的NTFs，與神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和視黃酸(RA)協(xié)同能夠提高骨髓來(lái)源的成體干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元的轉(zhuǎn)分化率。這就表明將間充質(zhì)干細(xì)胞和sAPPα聯(lián)合使用也許是治療AD的一種新的有效的方法〔34〕。以上進(jìn)展表明MSCs移植后能夠不同程度地緩解AD的癥狀，在AD的治療中表現(xiàn)出很好的潛力。近年來(lái)很多學(xué)者〔35〕認(rèn)為基因治療有可能是肯定的、有效地治療AD的方法，其中包括腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、NGF、Aβ降解酶等。但目前研究多限于模型動(dòng)物，真正用于人的AD臨床治療之前，仍然面臨很多難題。比如如何決定干細(xì)胞的移植劑量、如何有效選擇干細(xì)胞的移植位點(diǎn)、干細(xì)胞的長(zhǎng)期療效怎樣等等。

3.3 MSCs治療HD研究 HD又稱為慢性進(jìn)行性舞蹈病，該病以慢性進(jìn)行性舞蹈樣異常運(yùn)動(dòng)、精神異常、認(rèn)知障礙三聯(lián)征為主要臨床特征。HD無(wú)種族差異性，人群發(fā)病率約為5/10萬(wàn)，發(fā)病年齡為3～70歲，多于35～45歲發(fā)病，病程緩慢進(jìn)展?；颊叱Ｔ诎l(fā)病前把疾病基因遺傳給下一代，通常在中年時(shí)發(fā)病，隨著病情的發(fā)展癥狀加重，出現(xiàn)迅速的不隨意運(yùn)動(dòng)，講話和吞咽困難，認(rèn)知能力減退、消沉，偶爾出現(xiàn)錯(cuò)覺(jué)、幻覺(jué)以及精神分裂癥?；加蠬D的人通常在第一次出現(xiàn)癥狀后的8～25年內(nèi)死亡，盡管藥物可以緩解一些癥狀，但至今尚無(wú)任何有效方法對(duì)其進(jìn)行徹底根治。

早在上個(gè)世紀(jì)九十年代就有研究小組嘗試移植人胎兒紋狀體組織來(lái)治療HD〔36～38〕，這些研究支持了“細(xì)胞移植能夠替代損傷的神經(jīng)元，并且能夠重新建立神經(jīng)連接”的假說(shuō)。最近一些實(shí)驗(yàn)室嘗試了用干細(xì)胞治療HD，取得了一定的進(jìn)展。Lescaudron等〔39〕將自體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植到HD大鼠模型腦內(nèi)損傷的紋狀體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植的細(xì)胞部分表現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞表型，HD大鼠的記憶功能得到改善。

3.4 MSCs治療ALS研究 ALS是一種致命性的進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性疾病。最常見(jiàn)的類型以脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、腦干后組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)核及錐體束的慢性進(jìn)行變性，上下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元同時(shí)受損導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞變性死亡為特征。ALS發(fā)病呈全球分布，國(guó)外發(fā)病率為2/10萬(wàn)，多數(shù)患者在50歲以后出現(xiàn)癥狀，發(fā)病隨年齡增加10歲而增加。通常發(fā)展緩慢，從發(fā)病到癱瘓直至死亡一般約為3～5年。發(fā)病機(jī)制迄今不詳。一小部分ALS病例是由過(guò)氧化物歧化酶Ⅰ(SOD1)基因突變?cè)斐缮窠?jīng)元的蛋白毒性，進(jìn)而引起膽堿能運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的死亡或功能紊亂而引起〔40〕。到目前為止，臨床上仍然沒(méi)有有效的治療方法，Riluzole是目前惟一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于ALS治療的藥物，無(wú)論是對(duì)延髓麻痹還是肢體癱瘓為首發(fā)癥狀的ALS患者都有一定療效。但它僅可以延緩ALS的進(jìn)展〔41〕，不能改善癥狀或逆轉(zhuǎn)進(jìn)行性惡化的趨勢(shì)。鑒于藥物治療ALS未有顯著效果，亦不能阻止其進(jìn)一步惡化的窘境，于是干細(xì)胞治療ALS應(yīng)運(yùn)而生，即用干細(xì)胞產(chǎn)生的新神經(jīng)細(xì)胞替代那些在ALS變性疾病過(guò)程中丟失的神經(jīng)細(xì)胞，從而使疾病得到治療，干細(xì)胞替代治療可能是一種能徹底治愈ALS的方法〔42〕。學(xué)者分別從ALS患者及正常人骨髓中獲得的MSCs具有同樣的表型，同樣的分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和神經(jīng)元樣細(xì)胞，這些結(jié)果證實(shí)體外擴(kuò)增ALS患者骨髓MSCs與正常人骨髓MSCs相比沒(méi)有功能的改變，包括染色體的改變和細(xì)胞老化〔43〕。近年 Mazzini等〔44〕將分離ALS患者的自體骨髓MSCs，體外擴(kuò)增后重懸于病人自體的腦脊液，然后移植入患者的脊髓。接受移植的7位病人均沒(méi)有呼吸衰竭或死亡等嚴(yán)重的副作用，僅僅有輕微的肋間痛和腿部感覺(jué)異常，而且6 w后消失。移植后病人的脊髓體積沒(méi)有被改變，也沒(méi)有異常的細(xì)胞增殖現(xiàn)象，其中4位病人在接受骨髓MSCs移植36個(gè)月后肺活量線性下降明顯減慢。這一結(jié)果表明，骨髓MSCs應(yīng)用于ALS的治療是安全的，沒(méi)有明顯的急慢性毒性〔45〕。Choi〔46〕從 ALS 患者骨髓中分離獲得 MSCs，體外擴(kuò)增培養(yǎng)第三代細(xì)胞，生長(zhǎng)速度最快，建議體外培養(yǎng)早期傳代獲得的MSCs因其穩(wěn)定性好，抗炎效果好，神經(jīng)保護(hù)作用明顯，適合移植治療ALS。

4 存在問(wèn)題和前景

MSCs生物學(xué)特性為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療尤其是神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的治療帶來(lái)了希望，展示美好的前景，但是真正走上臨床還有一段極為坎坷的路〔47〕。干細(xì)胞的自我更新能力包含著一層含義就是能夠無(wú)限的增殖和生長(zhǎng)，很顯然的呈現(xiàn)在我們面前兩個(gè)問(wèn)題:首先，我們?cè)趹?yīng)用MSCs進(jìn)行移植治療時(shí)，是否會(huì)因?yàn)樗臒o(wú)限增殖能力而轉(zhuǎn)變成為惡性增生呢?其次，一旦發(fā)生了腫瘤，那么它是來(lái)源于受體本身的組織還是來(lái)自移植的MSCs呢?因此，我們需要深入研究不同組織來(lái)源的MSCs分化能力和趨式、向不同細(xì)胞定向分化體系以及和不同因素相結(jié)合作用后效果等，有望更好地、安全、有效地服務(wù)于臨床。

1 Campagnoli C，Roberts IA，Kumar S，et al.Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal blood，liver，and bone marrow〔J〕.Blood，2001;98(8):2396-402.

2 In't Anker PS，Scherjon SA，Kleijburg-van der Keur C，et al.Amniotic fluid as a novel source of mesenchymal stem cells for therapeutic transplantation〔J〕.Blood，2003;102(4):1548-9.

3 Nakahara H，Dennis JE，Bruder SP，et al.In vitro differentiation of bone and hypertrophic cartilage from periosteal-derived cells〔J〕.Exp Cell Res，1991;195(2):492-503.

4 Zuk PA，Zhu M，Ashjian P，et al.Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells〔J〕.Mol Biol Cell，2002;13(12):4279-95.

5 da Silva Meirelles L，Chagastelles PC，Nardi NB.Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues〔J〕.J Cell Sci，2006;119(Pt11):2204-13.

6 Fibbe WE，Noort WA.Mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells transplantation〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2003;996:235-44.

7 Inoue K，Ohgushi H，Yoshikawa T，et al.The effect of aging on bone formation in porous hydroxyapatite:biochemical and histological analysis〔J〕.JBone Miner Res，1997;12(6):989-94.

8 Krampera M，Marconi S，Pasini A，et al.Induction of neural-like differentiation in human mesenchymal stem cells derived from bone marrow，fat，spleen and thymus〔J〕.Bone，2007;40(2):382-90.

9 Song L，Tuan RS.Transdifferentiation potential of human mesenchymal stem cells derived from bone marrow〔J〕.FASEB J，2004;18(9):980-2.

10 Kopen GC，Prockop DJ，Phinney DG.Marrow stromal cells migrate throughout forebrain and cerebellum，and they differentiate into astrocytes after injection into neonatal mouse brains〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，1999;96(19):10711-6.

11 Ianus A，Holz GG，Theise ND，et al.In vivo derivation of glucose competent pancreatic endocrine cells from bone marrow without evidence of cell fusion〔J〕.JClin Invest，2003;111(6):843-50.

12 Petersen BE，Bowen WC，Patrene KD，et al.Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells〔J〕.Science，1999;284(5417):1168-70.

13 Sanchez-Ramos J，Song S，Cardozo-Pelaez F，et al.Adult bone marrow stromal cells differentiate into neural cells in vitro〔J〕.Exp Neurol，2000;164(2):247-56.

14 Woodbury D，Schwarz EJ，Prockop DJ，et al.Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons〔J〕.J Neurosci Res，2000;61(1):364-70.

15 Kohyama J，Abe H，Shimazaki T，et al.Brain from bone:efficient metadifferentiation of marrow stromal-derive matute osteoblasts to neurons with Noggin or a demethylating agent〔J〕.Differentiation，2001;68(4-5):235-44.

16 Winkler T，von Roth P，Schuman MR，et al.In vivo visualization of locally transplanted mesenchymal stem cells in the severely injured muscle in rats〔J〕.Tissue Eng Part A，2008;14(7):1149-60.

17 Chen JR，Cheng GY，Sheu CC，et al.Transplanted bone marrow stromal cells migrate，differentiate and improve motor function in rats with experimentally induced cerebral stroke〔J〕.J Anat，2008;213(3):249-58.

18 Le Blanc K.Mesenchymal stromal cells:tissue repair and immune modulation〔J〕.Cytotherapy，2006;8(6):559-61.

19 Rasmusson I.Immune modulation by mesenchymal.stem cells〔J〕.Exp Cell Res，2006;312(12):2169-79.

20 Uccelli A，Moretta L，Pistoia V.Immunoregulatory function of mesenchymal stem cells〔J〕.Eur JImmunol，2006;36(10):2566-73.

21 Glennie S，Soeiro I，Dyson PJ，et al.Bone marrow mesenchymal stem cells induce division arrest anergy of activated T cells〔J〕.Blood，2005;105(7):2821-7.

22 Le Blanc K，Tammik L，Sundberg B，et al.Mesenchymal stem cells inhibit and stimulate mixed lymphocyte cultures and mitogenic responses independently of the major histocompatibility complex〔J〕.Scand J Immunol，2003;57(1):11-20.

23 Corcione A，Benvenuto F，F(xiàn)erretti E.Human mesenchymal stem cells modulate B cell functions〔J〕.Blood，2006;107(1):367-72.

24 Jones OY，Good RA，Cahill RA.Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation for treatment of childhood overlap syndrome and small vessel vasculitis〔J〕.Bone Marrow Transp lant，2004;33(10):1061-3.

25 Ye M，Wang XJ，Zhang YH，et al.Therapeutic effects of differentiated bone marrow stromal cell transplantation on rat models of Parkinson's disease〔J〕.Parkinsonism Relat Disord，2007;13(1):44-9.

26 Jin GZ，Cho SJ，Lee YS，et al.Intrastriatal grafts of mesenchymal stem cells in adult intact rats can elevate tyrosine hydroxylase expression and dopamine levels〔J〕.Cell Biol Int，2009;34(1):135-40.

27 Schwarz EJ，Alexander GM，Prockop DJ，et al.Multipotential marrow stromal cells transduced to produce L-DOPA:engraftment in a rat model of Parkinson disease〔J〕.Hum Gene Ther，1999;10(15):2539-49.

28 Venkataramana NK，Kumar SK，Balaraju S，et al.Open-labeled study of unilateral autologous bone-marrow-derived mesenchymal stem cell transplantation in Pare〔J〕.Transl Res，2010;155(2):62-70.

29 Auld DS，Kornecook TJ，Bastianetto S，et al.Alzheimer's disease and the basal forebrain cholinergic system:relations to β-amyloid peptides，cognition，and treatment strategies〔J〕.Prog Neurobiol，2002;68(3):209-45.

30 German DC，Yazdani U，Speciale SG，et al.Cholinergic neuropathology in a mouse model of Alzheimer's disease〔J〕.JComp Neurol，2003;462(4):371-81.

31 Toda N，Kaneko T，Kogen H.Development of an efficient therapeutic agent for Alzheimer's disease:design and synthesis of dual inhibitors of acetylcholinesterase and serotonin transporter〔J〕.Chem Pharm Bull(Tokyo)，2010;58(3):273-87.

32 Scholtzova H，Wadghiri YZ，Douadi M，et al.Memantine leads to behavioral improvement and amyloid reduction in Alzheimer's-disease-model transgenic mice shown as by micromagnetic resonance imaging〔J〕.J Neurosci Res，2008;86(12):2784-91.

33 Ende N，Chen R，Ende-Harris D.Human umbilical cord blood cells ameliorate Alzheimer's disease in transgenic mice〔J〕.J Med，2001;32(3-4):241-7.

34 Chen CW，Boiteau RM，Lai WF，et al.sAPP alpha enhances the transdifferentiation of adult bone marrow progenitor cells to neuronal phenotypes〔J〕.Curr Alzheimer Res，2006;3(1):63-70.

35 Nilsson P，Iwata N，Muramatsu SI，et al.Gene therapy in Alzheimer's disease-potential for disease modification〔J〕.JCell Mol Med，2010:16.

36 Pakzaban P，Deacon T，Burns L，et al.Increased proportion of AChE-rich zones and improved morphologic integration in host striatum of fetal grafts derived from the lateral but not the medial ganglionic eminence〔J〕.Exp Brain Res，1993;97(1):13-22.

37 Isacson O，Deacon TW，Pakzaban P，et al.Transplanted xenogeneic neural cells in neurodegenerative disease models exhibit remarkable axonal target specificity and distinct growth patterns of glial and axonal fibres〔J〕.Nat Med，1995;1(11):1189-94.

38 Freeman TB，Sanberg PR，Isacson O.Development of the human striatum:implications for fetal striatal transplantation〔J〕.Cell Transplant，1995;4(6):539-45.

39 Lescaudron L，Unni D，Dunbar GL.Autologous adult bone marrow stem cell transplantation in an animal model of Huntington's disease:behavioral and morphological outcomes〔J〕.Int J Neurosci，2003;113(7):945-56.

40 Roberts TJ，Price J，Williams SC，et al.Preservation of striatal tissue and behavioral function after neural stem cell transplantation in a rat model of Huntington's disease〔J〕.Neuroscience，2006;139(4):1187-99.

41 Gurney ME，F(xiàn)leck TJ，Himes CS，et al.Riluzole preserves motor function in a transgenic model of familial amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Neurology，1998;50(1):62-6.

42 Vercelli A，Mereuta OM，Garbossa D，et al.Human mesenchymal stem cell transplantation extends survival，improves motor performance and decreases neuroinflammation in mouse model of amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Neurobiol Dis，2008;31(3):395-405.

43 Ferrero I，Mazzini L，Rustichelli D，et al.Bone marrow mesenchymal stem cells from healthy donors and sporadic myotrophic lateral sclerosis patients〔J〕.Cell Transplant，2008;17(3):255-66.

44 Mazzini L，Mareschi K，F(xiàn)errero I，et al.Autologous mesenchymal stem cells:clinical applications in amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Neurol Res，2006;28(5):523-6.

45 Mazzini L，F(xiàn)errero I，Luparello V，et al.Mesenchymal stem cell transplantation in amyotrophic lateral sclerosis:a phase I clinical trial〔J〕.Exp Neurol，2010;223(1):229-37.

46 Choi MR，Kim HY，Park JY，et al.Selection of optimal passage of bone marrow-derived mesenchymal stem cells for stem cell therapy in patients with amyotrophic lateral sclerosis〔J〕.Neurosci Lett，2010;472(2):94-8.

47 Sadan O，Melamed E，Offen D，et al.Bone-marrow-derived mesenchymal stem cell therapy for neurodegenerative diseases〔J〕.Expert Opin Biol Ther，2009;9(12):1487-97.