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        抗凝護(hù)心Ⅱ號對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響

        2012-01-26 09:49:44陳波馮莉翟鐵軍
        中醫(yī)藥信息 2012年6期
        關(guān)鍵詞:保護(hù)率通心絡(luò)低劑量

        陳波,馮莉,翟鐵軍

        (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040)

        近年來,隨著藥物溶栓及冠心病介入治療,冠脈旁路移植術(shù)等的臨床應(yīng)用,實(shí)現(xiàn)冠脈再通已不是難題。但人們很早就注意到心肌缺血再灌注時(shí)易引起一系列心臟與血管的不良事件,如嚴(yán)重的再灌注心律失常、心肌缺血損傷加重[1]。西醫(yī)通過電復(fù)律及藥物(如α-受體阻滯劑、利多卡因、Ca2+拮抗劑等)防治再灌注心律失常,而本實(shí)驗(yàn)選用復(fù)方中藥抗凝護(hù)心Ⅱ號觀察該藥對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

        清潔級Wistar大鼠50只(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供),體質(zhì)量(250±40)g,雌雄各半。

        1.1.2 實(shí)驗(yàn)用藥

        抗凝護(hù)心Ⅱ號:川芎、黃芪、紅花、桃仁、當(dāng)歸、赤芍、黨參、川牛膝、枳殼、地龍、水蛭等組成,購自黑龍江省藥材公司,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院煎藥室水煎濃縮而成。

        通心絡(luò)膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司,批號:080822);烏拉坦(上?;瘜W(xué)試劑采購站分裝廠,批號:080220);蒸餾水由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室提供。

        1.1.3 主要儀器及設(shè)備

        小動物呼吸機(jī)(DH-50型,浙江大學(xué)儀器廠);心電機(jī)(6511型,上海KOHDEN電子有限公司);電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

        50只清潔級Wistar大鼠,隨機(jī)分為5組,假手術(shù)組、模型組、抗凝護(hù)心Ⅱ號高劑量組、抗凝護(hù)心Ⅱ號低劑量組、通心絡(luò)組,每組各10只,相同條件下分籠飼養(yǎng)。

        1.2.2 給藥方法

        假手術(shù)組:灌服生理鹽水,每天10ml/kg。模型組:灌服生理鹽水,每天10ml/kg。抗凝護(hù)心Ⅱ號高劑量組:灌服濃度0.72g/ml抗凝護(hù)心Ⅱ號,每天10ml/kg??鼓o(hù)心Ⅱ號低劑量組:灌服濃度0.24g/ml抗凝護(hù)心Ⅱ號,每天10ml/kg。通心絡(luò)組:灌服通心絡(luò),濃度為0.05g/ml,每天10ml/kg。各組于術(shù)前14天依照給藥方法分別進(jìn)行灌胃,末次給藥30min后進(jìn)行手術(shù)。1.2.3 模型制備

        大鼠急性心肌梗死模型的制備[2]:用20%烏拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉,將大鼠仰臥固定于鼠板上,將心電儀針狀電極分別插入四肢皮下,標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)記錄心電圖。分離頸總動脈,氣管插管,呼吸機(jī)控制呼吸(呼吸頻率55~60次/分),經(jīng)左側(cè)第3~5肋間開胸暴露心臟,剪開心包,于左心耳與肺動脈圓錐下方找到冠狀動脈左前降支,在冠狀動脈下進(jìn)針,以0號線穿過心肌表層后出針,穩(wěn)定后將直徑1.5mm的硅膠管置于結(jié)扎線與所取血管心肌表層之間,拉緊結(jié)扎線使硅膠管壓迫左冠狀動脈,造成閉塞(假手術(shù)組僅在左冠狀動脈穿線,但不結(jié)扎冠脈,心臟曠置,時(shí)間等同其他組),記錄結(jié)扎前后心電圖。結(jié)扎30min后,拔去引線使冠狀動脈再通,并觀察心電圖有無再灌注心律失常。模型(除假手術(shù)組外)成功標(biāo)準(zhǔn):中斷血流后供血區(qū)心肌顏色由鮮紅轉(zhuǎn)為暗紫,心電圖示ST段抬高與T波融合,呈弓背向上單向曲線,抬高大于0.5mv為結(jié)扎成功的指標(biāo)。30min后解除壓迫,心電圖出現(xiàn)Q波,為造模成功。

        1.2.4 心電圖的處理

        1.2.4.1 分別描記各組再灌注后Ⅱ?qū)?lián)的ST段,觀察Ⅱ?qū)?lián)室性心律失常的發(fā)生率。

        1.2.4.2 ST段測量方法與ST段保護(hù)率的計(jì)算

        ST段振幅,是以兩個(gè)相鄰且齊平的T-P段為基線,測量這兩個(gè)相鄰T-P段之間的ST段值,∑ST增幅指ST段抬高的總和。ST段保護(hù)率=[(模型組∑ST-假手術(shù)組∑ST)-(處理組∑ST-假手術(shù)組∑ST)]÷(模型組∑ST-假手術(shù)組∑ST)×100%。所有觀察指標(biāo)的數(shù)據(jù)均來源于心電圖記錄文件的Ⅱ?qū)?lián)。1.2.4.3 T 波的測量方法與 T 波保護(hù)率的計(jì)算[3]

        本實(shí)驗(yàn)對心肌缺血程度的觀察指標(biāo)為T波的變化。T波高度測量:分別選取缺血前、缺血中、再灌注后Ⅱ?qū)?lián)體表心電圖,選擇清晰波形分析測量導(dǎo)聯(lián)T波振幅,以P-R段為基線,每時(shí)間點(diǎn)測5個(gè)連續(xù)波形,取其平均值。記錄并計(jì)算T波的變化值(△T=缺血中、缺血后T波值-缺血前T波值),無論升高或降低,均取變化的絕對值。

        T波保護(hù)率=[(模型組∑△T-假手術(shù)組∑△T)-(處理組∑△T-假手術(shù)組∑△T)]÷(模型組∑△T-假手術(shù)組∑△T)×100%

        1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        通心絡(luò)組兩只大鼠造模失敗,死亡。

        2.1 心電圖的改變

        2.1.1 各組大鼠∑ST和ST段保護(hù)率的變化

        缺血后各組無顯著差別(P>0.05);再灌注后各組與模型組比較有顯著差別(P﹤0.05);中藥高劑量組與通心絡(luò)組比較無顯著差別(P>0.05);中藥低劑量組與通心絡(luò)組組比較有顯著差別(P﹤0.05);中藥高劑量與中藥低劑量組比較有顯著差別(P﹤0.05),結(jié)果見表1。

        表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護(hù)率(±s)

        表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護(hù)率(±s)

        注:與模型組比較,*P﹤0.05;與通心絡(luò)組比較,△P﹤0.05;中藥高劑量組與低劑量組比較,#P<0.05。

        組別∑ST mV ST段保護(hù)率%缺血后 再灌注后假手術(shù)組 - - -模型組 0.26±0.03 0.26±0.03 -中藥高劑量組 0.23 ±0.03 0.12 ±0.03*# 53.85中藥低劑量組 0.25±0.04 0.20±0.03*△ 23.08通心絡(luò)組 0.25 ±0.03 0.14 ±0.02*46.15

        2.1.2 各組大鼠△T和T波保護(hù)率的變化

        大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎后再灌注,可以引起大鼠的心肌缺血再灌注損傷,表現(xiàn)心電圖的T波發(fā)生改變;抗凝護(hù)心Ⅱ號和通心絡(luò)可顯著抑制再灌注大鼠心電圖△T的改變,具有很明顯的T波保護(hù)作用。缺血前各組∑△T無明顯差異;缺血中,與假手術(shù)組相比,模型組和各藥物組△T明顯增大,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,各藥物組△T改變明顯減小(P<0.05)。再灌注后,與假手術(shù)組相比,模型組和各藥物組△T明顯增大(P<0.05);與模型組相比,各藥物組△T明顯減小(P<0.05);與各藥物組△T沒有明顯差異(P>0.05),見表2。

        表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護(hù)率(±s)

        表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護(hù)率(±s)

        注:與模型組比較,◇P﹤0.05;與假手術(shù)組比較,△P﹤0.05;同組內(nèi)與缺血中比較,#P﹤0.05。

        組別△TmV T波保護(hù)率%缺血后△T 灌注后△T模型組 0.141 ±0.015 0.088 ±0.015#-假手術(shù)組 0.003±0.005◇ 0.003±0.005◇# -通心絡(luò)組 0.111 ±0.015◇△ 0.057 ±0.012◇△# 35.88中藥低劑量組 0.118 ±0.014◇△★ 0.066 ±0.013◇△★# 25.88中藥高劑量組 0.114 ±0.016◇△★ 0.056 ±0.012◇△★#37.65

        2.1.3 各組對大鼠心肌再灌注損傷后室性心律失常發(fā)生率的影響

        抗凝護(hù)心Ⅱ號高、低劑量組以及通心絡(luò)組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組(見表3)。

        表3 各組室性心律失常發(fā)生率

        3 討論

        心肌缺血再灌注損傷主要與鈣超載、氧自由基的損害有關(guān)。鈣超載是心肌缺血再灌注誘發(fā)心肌頓抑及心律失常的重要發(fā)生機(jī)制。由于Ca2+波動激活內(nèi)向離子流,引發(fā)延遲后除極,當(dāng)舒張期膜電位的波動達(dá)到閾值就可激發(fā)早搏,加上缺血與非缺血區(qū)之間傳導(dǎo)速度不一致形成折返沖動導(dǎo)致心律失常。心肌細(xì)胞內(nèi)高Ca2+對心肌細(xì)胞的損傷,細(xì)胞內(nèi)高Ca2+導(dǎo)致線粒體攝鈣增加,消耗ATP,并與磷酸根結(jié)合干擾氧化磷酸化,使ATP生成減少;Ca2+升高可激活磷脂酶引起細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜的損傷,ATP酶加速ATP消耗,蛋白酶促進(jìn)細(xì)胞膜和結(jié)構(gòu)蛋白的分解,核酶激活引起染色體損傷。氧自由基的損傷是因缺血再灌注時(shí)通過黃嘌呤氧化酶途徑產(chǎn)生大量的氧自由基,導(dǎo)致體內(nèi)氧自由基聚集,使細(xì)胞膜通透性、流動性增加,表現(xiàn)為心肌細(xì)胞電活動紊亂而產(chǎn)生心律失常[4-5]。

        本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,抗凝護(hù)心Ⅱ號高、低劑量組以及通心絡(luò)組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組,而ST段及T波保護(hù)率明顯高于模型組。表明抗凝護(hù)心Ⅱ號對缺血再灌注損傷的心肌有保護(hù)作用。因此,推測抗凝護(hù)心Ⅱ號可能有以下作用:1)抑制鈣超載可以減少室性心律失常的發(fā)生率,進(jìn)一步減少鈣超載對心肌頓抑的影響;2)清除氧自由基的作用,減輕氧自由基對心肌的損害,減少室性心律失常的發(fā)生率,發(fā)揮保護(hù)受損心肌。

        [1]張麗,張麟.缺血再灌注損傷與心肌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志,2006,5(10):43 -45.

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        [3]CheungPY,sawckiG,Wozniak M,et al.Martix metalloproteinase - 2 conrtibuets to isehemia - rePerfusion in ury in the heart[J].Circulation,2000,101(15):1833 -1839.

        [4]周波,陳飛,仲維娜,等.從 NO、NOS變化探討瓜蔞薤白白酒湯對心肌缺血再灌注損傷的防治作用[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2010,38(3):36-38.

        [5]薛建軍,張凌云,譚萍.參附注射液對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J].西部中醫(yī)藥,2011,24(10):98 -101.

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