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        抗凝護心Ⅱ號對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響

        2012-01-26 09:49:44陳波馮莉翟鐵軍
        中醫(yī)藥信息 2012年6期
        關鍵詞:保護率通心絡低劑量

        陳波,馮莉,翟鐵軍

        (1.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學,黑龍江 哈爾濱 150040)

        近年來,隨著藥物溶栓及冠心病介入治療,冠脈旁路移植術等的臨床應用,實現(xiàn)冠脈再通已不是難題。但人們很早就注意到心肌缺血再灌注時易引起一系列心臟與血管的不良事件,如嚴重的再灌注心律失常、心肌缺血損傷加重[1]。西醫(yī)通過電復律及藥物(如α-受體阻滯劑、利多卡因、Ca2+拮抗劑等)防治再灌注心律失常,而本實驗選用復方中藥抗凝護心Ⅱ號觀察該藥對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實驗動物

        清潔級Wistar大鼠50只(黑龍江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供),體質量(250±40)g,雌雄各半。

        1.1.2 實驗用藥

        抗凝護心Ⅱ號:川芎、黃芪、紅花、桃仁、當歸、赤芍、黨參、川牛膝、枳殼、地龍、水蛭等組成,購自黑龍江省藥材公司,由黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院煎藥室水煎濃縮而成。

        通心絡膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司,批號:080822);烏拉坦(上?;瘜W試劑采購站分裝廠,批號:080220);蒸餾水由黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院臨床分子生物實驗室提供。

        1.1.3 主要儀器及設備

        小動物呼吸機(DH-50型,浙江大學儀器廠);心電機(6511型,上海KOHDEN電子有限公司);電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 實驗分組

        50只清潔級Wistar大鼠,隨機分為5組,假手術組、模型組、抗凝護心Ⅱ號高劑量組、抗凝護心Ⅱ號低劑量組、通心絡組,每組各10只,相同條件下分籠飼養(yǎng)。

        1.2.2 給藥方法

        假手術組:灌服生理鹽水,每天10ml/kg。模型組:灌服生理鹽水,每天10ml/kg??鼓o心Ⅱ號高劑量組:灌服濃度0.72g/ml抗凝護心Ⅱ號,每天10ml/kg??鼓o心Ⅱ號低劑量組:灌服濃度0.24g/ml抗凝護心Ⅱ號,每天10ml/kg。通心絡組:灌服通心絡,濃度為0.05g/ml,每天10ml/kg。各組于術前14天依照給藥方法分別進行灌胃,末次給藥30min后進行手術。1.2.3 模型制備

        大鼠急性心肌梗死模型的制備[2]:用20%烏拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉,將大鼠仰臥固定于鼠板上,將心電儀針狀電極分別插入四肢皮下,標準肢體Ⅱ導聯(lián)記錄心電圖。分離頸總動脈,氣管插管,呼吸機控制呼吸(呼吸頻率55~60次/分),經(jīng)左側第3~5肋間開胸暴露心臟,剪開心包,于左心耳與肺動脈圓錐下方找到冠狀動脈左前降支,在冠狀動脈下進針,以0號線穿過心肌表層后出針,穩(wěn)定后將直徑1.5mm的硅膠管置于結扎線與所取血管心肌表層之間,拉緊結扎線使硅膠管壓迫左冠狀動脈,造成閉塞(假手術組僅在左冠狀動脈穿線,但不結扎冠脈,心臟曠置,時間等同其他組),記錄結扎前后心電圖。結扎30min后,拔去引線使冠狀動脈再通,并觀察心電圖有無再灌注心律失常。模型(除假手術組外)成功標準:中斷血流后供血區(qū)心肌顏色由鮮紅轉為暗紫,心電圖示ST段抬高與T波融合,呈弓背向上單向曲線,抬高大于0.5mv為結扎成功的指標。30min后解除壓迫,心電圖出現(xiàn)Q波,為造模成功。

        1.2.4 心電圖的處理

        1.2.4.1 分別描記各組再灌注后Ⅱ導聯(lián)的ST段,觀察Ⅱ導聯(lián)室性心律失常的發(fā)生率。

        1.2.4.2 ST段測量方法與ST段保護率的計算

        ST段振幅,是以兩個相鄰且齊平的T-P段為基線,測量這兩個相鄰T-P段之間的ST段值,∑ST增幅指ST段抬高的總和。ST段保護率=[(模型組∑ST-假手術組∑ST)-(處理組∑ST-假手術組∑ST)]÷(模型組∑ST-假手術組∑ST)×100%。所有觀察指標的數(shù)據(jù)均來源于心電圖記錄文件的Ⅱ導聯(lián)。1.2.4.3 T 波的測量方法與 T 波保護率的計算[3]

        本實驗對心肌缺血程度的觀察指標為T波的變化。T波高度測量:分別選取缺血前、缺血中、再灌注后Ⅱ導聯(lián)體表心電圖,選擇清晰波形分析測量導聯(lián)T波振幅,以P-R段為基線,每時間點測5個連續(xù)波形,取其平均值。記錄并計算T波的變化值(△T=缺血中、缺血后T波值-缺血前T波值),無論升高或降低,均取變化的絕對值。

        T波保護率=[(模型組∑△T-假手術組∑△T)-(處理組∑△T-假手術組∑△T)]÷(模型組∑△T-假手術組∑△T)×100%

        1.2.5 統(tǒng)計分析

        2 實驗結果

        通心絡組兩只大鼠造模失敗,死亡。

        2.1 心電圖的改變

        2.1.1 各組大鼠∑ST和ST段保護率的變化

        缺血后各組無顯著差別(P>0.05);再灌注后各組與模型組比較有顯著差別(P﹤0.05);中藥高劑量組與通心絡組比較無顯著差別(P>0.05);中藥低劑量組與通心絡組組比較有顯著差別(P﹤0.05);中藥高劑量與中藥低劑量組比較有顯著差別(P﹤0.05),結果見表1。

        表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護率(±s)

        表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護率(±s)

        注:與模型組比較,*P﹤0.05;與通心絡組比較,△P﹤0.05;中藥高劑量組與低劑量組比較,#P<0.05。

        組別∑ST mV ST段保護率%缺血后 再灌注后假手術組 - - -模型組 0.26±0.03 0.26±0.03 -中藥高劑量組 0.23 ±0.03 0.12 ±0.03*# 53.85中藥低劑量組 0.25±0.04 0.20±0.03*△ 23.08通心絡組 0.25 ±0.03 0.14 ±0.02*46.15

        2.1.2 各組大鼠△T和T波保護率的變化

        大鼠冠狀動脈左前降支結扎后再灌注,可以引起大鼠的心肌缺血再灌注損傷,表現(xiàn)心電圖的T波發(fā)生改變;抗凝護心Ⅱ號和通心絡可顯著抑制再灌注大鼠心電圖△T的改變,具有很明顯的T波保護作用。缺血前各組∑△T無明顯差異;缺血中,與假手術組相比,模型組和各藥物組△T明顯增大,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組相比,各藥物組△T改變明顯減小(P<0.05)。再灌注后,與假手術組相比,模型組和各藥物組△T明顯增大(P<0.05);與模型組相比,各藥物組△T明顯減小(P<0.05);與各藥物組△T沒有明顯差異(P>0.05),見表2。

        表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護率(±s)

        表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護率(±s)

        注:與模型組比較,◇P﹤0.05;與假手術組比較,△P﹤0.05;同組內與缺血中比較,#P﹤0.05。

        組別△TmV T波保護率%缺血后△T 灌注后△T模型組 0.141 ±0.015 0.088 ±0.015#-假手術組 0.003±0.005◇ 0.003±0.005◇# -通心絡組 0.111 ±0.015◇△ 0.057 ±0.012◇△# 35.88中藥低劑量組 0.118 ±0.014◇△★ 0.066 ±0.013◇△★# 25.88中藥高劑量組 0.114 ±0.016◇△★ 0.056 ±0.012◇△★#37.65

        2.1.3 各組對大鼠心肌再灌注損傷后室性心律失常發(fā)生率的影響

        抗凝護心Ⅱ號高、低劑量組以及通心絡組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組(見表3)。

        表3 各組室性心律失常發(fā)生率

        3 討論

        心肌缺血再灌注損傷主要與鈣超載、氧自由基的損害有關。鈣超載是心肌缺血再灌注誘發(fā)心肌頓抑及心律失常的重要發(fā)生機制。由于Ca2+波動激活內向離子流,引發(fā)延遲后除極,當舒張期膜電位的波動達到閾值就可激發(fā)早搏,加上缺血與非缺血區(qū)之間傳導速度不一致形成折返沖動導致心律失常。心肌細胞內高Ca2+對心肌細胞的損傷,細胞內高Ca2+導致線粒體攝鈣增加,消耗ATP,并與磷酸根結合干擾氧化磷酸化,使ATP生成減少;Ca2+升高可激活磷脂酶引起細胞膜和細胞器膜的損傷,ATP酶加速ATP消耗,蛋白酶促進細胞膜和結構蛋白的分解,核酶激活引起染色體損傷。氧自由基的損傷是因缺血再灌注時通過黃嘌呤氧化酶途徑產生大量的氧自由基,導致體內氧自由基聚集,使細胞膜通透性、流動性增加,表現(xiàn)為心肌細胞電活動紊亂而產生心律失常[4-5]。

        本實驗結果表明,抗凝護心Ⅱ號高、低劑量組以及通心絡組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組,而ST段及T波保護率明顯高于模型組。表明抗凝護心Ⅱ號對缺血再灌注損傷的心肌有保護作用。因此,推測抗凝護心Ⅱ號可能有以下作用:1)抑制鈣超載可以減少室性心律失常的發(fā)生率,進一步減少鈣超載對心肌頓抑的影響;2)清除氧自由基的作用,減輕氧自由基對心肌的損害,減少室性心律失常的發(fā)生率,發(fā)揮保護受損心肌。

        [1]張麗,張麟.缺血再灌注損傷與心肌細胞凋亡研究進展[J].中國現(xiàn)代臨床醫(yī)學雜志,2006,5(10):43 -45.

        [2]施新猷.醫(yī)學動物實驗方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1979:235.

        [3]CheungPY,sawckiG,Wozniak M,et al.Martix metalloproteinase - 2 conrtibuets to isehemia - rePerfusion in ury in the heart[J].Circulation,2000,101(15):1833 -1839.

        [4]周波,陳飛,仲維娜,等.從 NO、NOS變化探討瓜蔞薤白白酒湯對心肌缺血再灌注損傷的防治作用[J].中醫(yī)藥學報,2010,38(3):36-38.

        [5]薛建軍,張凌云,譚萍.參附注射液對心肌缺血再灌注損傷保護作用的研究進展[J].西部中醫(yī)藥,2011,24(10):98 -101.

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