紀(jì)亞明

(北京小湯山醫(yī)院，北京 102211)

決明子是豆科決明屬植物決明(Cassia obtusifolia L．)或小決明(Cassia tora L．)的成熟種子，具有清肝、明目、利水、通便的功效，臨床上常用于治療高血脂、高血壓、便秘、口腔潰瘍等病癥，具有較好的臨床療效［1－2］。決明子主要產(chǎn)于安徽、江蘇、浙江、廣東、廣西、四川等省區(qū)，通過檢測不同產(chǎn)地決明子的蒽醌、大黃酚、橙黃決明素、總蒽醌的含量差異，表明不同產(chǎn)地的決明子質(zhì)量存在一定的差異［3－4］，但是較少有綜合多個指標(biāo)的評判，因此評判方法存在一定的局限性。因此，筆者建立基于橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、總蒽醌含量的決明子品質(zhì)綜合評判方法，結(jié)果表明，該方法方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，能夠全面系統(tǒng)地評價決明子化學(xué)品質(zhì)，現(xiàn)將結(jié)果分析如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(惠普HP－1110四元泵，HP－1110 DAD檢測器，HP Chemstation化學(xué)工作站);KQ3200超聲波清洗器(120W，40kHz，昆山市超聲儀器有限公司);電子天平(德國賽多利斯)。

試劑:甲醇為色譜純;其它試劑均為分析純;水為娃哈哈純凈水;所有試劑均經(jīng)0．45um的濾膜濾過。

對照品:橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。

藥材:分別從陜西、山東、河南、安徽、湖北、云南、四川采購，每個地方各采購3個批次，分別標(biāo)記為，A11、A12、A13、A21、A22、A23、A31、A32、A33、A41、A42、A43、A51、A52、A53、A61、A62、A63、A71、A72、A73，通過我院經(jīng)驗豐富的教授鑒定為決明子為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L．)或小決明(Cassia tora L．)的成熟種子。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

Kromasil C18(250mm ×4．6mm，4μm);C2H3N:1%CH3COOH為流動相;室溫;1ml/min;檢測波長為254nm，洗脫時間為45min，梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

2．2 對照品溶液制備

精密稱取適量的干燥橙黃決明素、大黃素、大黃酚

作者簡介:紀(jì)亞明(1965－)，男，主管中藥師，主要研究方向:中藥調(diào)劑。

收稿日期:2012－06－11

修回日期:2012－07－08

和大黃素甲醚對照品，加入甲醇定容成100ml，超聲溶解，獲得濃度分別為橙黃決明素 20ug/ml、大黃素15.5ug/ml、大黃酚 51ug/ml、大黃素甲醚 12ug/ml的混合溶液。

2．3 供試品溶液制備

精密稱取不同產(chǎn)地的過三號篩的決明子藥材粉末各0．5g，置于50ml容量瓶中，移液管精密加入50ml甲醇，精密稱重，超聲30min后放冷，再稱定重量，滴管補(bǔ)足減失的甲醇，搖勻，濾膜濾過。精密量取25ml續(xù)濾液，蒸干，加入30ml 10%鹽酸溶液并置于水浴中加熱水解1h，放置室溫冷卻后，用30ml氯仿振搖提取并濾過，共提取3次，合并濾過液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，0．45um的濾膜濾過，取續(xù)濾液備用。

2

．4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混合對照品溶液 2、4、8、10、15μl進(jìn)樣，以各對照品的峰面積為縱坐標(biāo)，橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求算回歸方程，結(jié)果表明，橙黃決明素在0.04ug～0．3ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為，Y=103872214X+62 273，r=0．999 9;大黃素在 0．031－0.232 5ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=108721X －2 102，r=0．999 9;大黃酚在 0．102ug～0.765ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為 Y=78799X+9 037，r=0．999 9;大黃素甲醚在 0．024ug ～0.18ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=93221X－1 322，r=0．999 8。

2．5 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定各指標(biāo)成分峰面積，計算各指標(biāo)成分精密度，結(jié)果表明，橙黃決明素 RSD=0.73%，大黃素 RSD=0.41%、大黃酚 RSD=0.94%，大黃素甲醚 RSD=0.48%，RSD均＜2%，各指標(biāo)成分精密度均良好。

2．6 重復(fù)性試驗

按供試品測定方法測定，對同一批樣品重復(fù)測定5份，計算樣品中橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量。結(jié)果表明，橙黃決明素RSD=1．13%，大黃素RSD=1．53%、大黃酚RSD=1．04%，大黃素甲醚RSD=0．96%，RSD均＜2%。

2．7 穩(wěn)定性試驗

取任一供試品溶液，按供試品測定方法測定，分別于配制后0，2，4，8，24小時進(jìn)樣，計算樣品中橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量。結(jié)果橙黃決明素RSD=1．09%，大黃素 RSD=1．47%、大黃酚RSD=1．11%，大黃素甲醚 RSD=0．88%，RSD 均 ＜2%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2．8 加樣回收率試驗

精密稱取20份已知含量的任一批號的供試品，精密加入等量橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品，揮干溶劑后，按供試品溶液的制備方法制備，測定，計算回收率，結(jié)果表明，橙黃決明素平均回收率100．19%。RSD=0．48%，大黃素平均回收率99.69%。RSD=0．62%，大黃酚平均回收率99．71%。RSD=0．34%，大黃素甲醚平均回收率 99．55%。RSD=0．62%，表明該方法可行。

2．9 樣品測定及結(jié)果

精密吸取混合對照品溶液與不同產(chǎn)地供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，每個批次測定3次，計算平均值，測定結(jié)果見圖1，表2。

表2 不同產(chǎn)地決明子藥材蒽醌成分測定結(jié)果

2．1 0 不同產(chǎn)地決明子樣品聚類分析

圖1 決明子的HPLC色譜圖

圖2 不同產(chǎn)地決明子樣品聚類分析

由圖2結(jié)果可知，不同產(chǎn)地批次的決明子可歸為3 類，分別為 A31、A32、A33、A41、A42、A43、A71、A72、A73為一類，即分別為河南、安徽、四川;A21、A22、A23為一類即為山東;其余 A11、A12、A13、A51、A52、A53、A61、A62、A63為一類，即為陜西、湖北、云南，再由表2各成分含量可知，河南、安徽、四川區(qū)域決明子中蒽醌含量較高，其次是陜西、湖北、云南，最差的為山東。

3 討論

通過測定樣品的全波長掃描圖，顯示幾個蒽醌類成分最大吸收波長相似，均在254nm處呈現(xiàn)強(qiáng)吸收，因此本文以254nm作為檢測波長，這與文獻(xiàn)的報道相符［5］。洗脫條件考察了甲醇:水(60∶40 及 57∶43)、乙腈:水(25∶75)、乙腈:水(30∶70 及 25∶75)和甲醇:1%醋酸(60∶40 及 57∶43)、乙腈:1%HAC(25∶75)恒速洗脫的圖譜的分離效果、出峰時間及樣品的其余成分的干擾性，結(jié)果表明，雖然乙腈:1%HAC(21∶79)的分離效果好、出峰時間適宜且不受其余成分干擾，但是時間太長，因此采用本文梯度洗脫條件，既保證了不同成分的分離效果，又能縮短洗脫時間。

決明子中的橙黃決明素能顯著降低高脂血癥大鼠的 TC、LDL －C 和 TG［6］，大黃素具有抗炎、抑菌、保肝、抗癌、保護(hù)腎臟、瀉下、保護(hù)胰腺、利尿、利膽、降低內(nèi)毒素等作用［7］，大黃酚具有提高記憶力及抗衰老作用，大黃素甲醚能夠保護(hù)急性肝損傷，對缺血再灌注損傷也具有保護(hù)作用［8－9］。本文的研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地決明子中蒽醌成分含量存在顯著差異，其中河南、安徽、四川區(qū)域決明子中蒽醌含量較高，其次是陜西、湖北、云南，最差的為山東。綜上所述，綜合橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和總蒽醌含量的分析方法，可更靈敏地表征決明子的品質(zhì)差異，為決明子的質(zhì)量控制提供參考及商品規(guī)格劃分提供依據(jù)，采購優(yōu)質(zhì)的決明子可從河南、安徽、四川采購。

［1］侯長軍，張平平，霍丹群．決明子的應(yīng)用研究進(jìn)展［J］．海峽藥學(xué)，2007，19(7):7 －9．

［2］曹群．炮制方法對決明子中蒽醌類成分含量的影響［J］．西部中醫(yī)藥，2012，25(6):21 －22．

［3］張毅，黃小平，翁代群，等．HPLC測定不同產(chǎn)地決明子中蒽醌類成分［J］．中國中藥雜志，2008，33(23):2797 －2799．

［4］胡軼娟，萬麗，張加雄，等．高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地決明子中橙黃決明素含量［J］．時珍國醫(yī)國藥，2006，17(7):1138 －1139．

［5］蔣波，高珣，畢開順，等．HPLC法同時測定六味安消膠囊中蒽醌類成分含量［J］．中藥材，2009，32(6):975 －977．

［6］李明元，羅孟軍，葉娉，等．橙黃決明素的降血脂作用研究［J］．中藥藥理與臨床，2008，6(9):24 －26．

［7］張斯時．大黃素的藥理作用研究概況［J］．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2006，23(11):12－14．

［8］張麗雁，宿文輝，熊瑛，等．大黃素甲醚對大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用［J］．中國基層醫(yī)藥，2007，14(12):2014 －2015．

［9］陳立英，廖仁昊，蘇立凱，等．腦缺血預(yù)處理聯(lián)合大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注后炎性反應(yīng)影響的臨床觀察［J］．北京醫(yī)學(xué)，2007，29(9):566－567．