何夢婕，楊婷，楊漾，蕭海容，張康寧，廖立東，包旭*

(1.四川大學華西藥學院，四川成都610041;2.甘肅獨一味生物制藥股份有限公司，甘肅康縣746500)

獨一味Lamiophlomis rotate(Benth.)Kudo為唇形科獨一味屬植物，該屬僅一種，又名獨步通，藏語稱“大巴”、“打布巴”，分布在甘肅、青海、四川、云南、西藏等地。其根及其全草入藥，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用藥之一［1］。具有活血止痛、化瘀止血［2］之功效，用于治療各種外科手術后的刀口疼痛、出血、外傷骨折、筋骨扭傷、風濕痹痛等［3］。

獨一味巴布膏是專門針對軟組織挫傷所引起的血瘀疼痛專門研制的新藥。采用比較先進的巴布膏成型技術，彌補了其他外用劑型容易過敏、剝離困難等缺點。本實驗采用砝碼和啞鈴造成大鼠急性軟組織挫傷模型，研究其對急性軟組織挫傷的作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物、試劑獨一味巴布膏:為棕褐色膏體，0.727 g(生藥)/g(巴布膏)，由甘肅獨一味生物制藥股份有限公司提供。賦形劑:為白色膏體，由甘肅獨一味生物制藥股份有限公司提供。扶他林:白色乳膠劑，20 g/支(含雙氯芬酸鈉0.2 g)，由北京諾華制藥有限公司生產。硫化鈉:規(guī)格:500 g/瓶，分析純，由天津市科密歐化學試劑有限公司生產。

1.2 動物SD大鼠，體質量190～220 g，雌雄各半，由四川大學實驗動物中心提供，動物使用許可證號:第9號。實驗動物使用設施許可證號:第113號。

1.3 儀器分析天平，北京賽多利斯天平有限公司，型號:BS210S。電子天平，成都市東風計量儀器有限公司，型號:T1000。

1.4 方法

1.4.1 砝碼法［4］取SD大鼠60只，給藥前24 h剪去大鼠背部及右下肢長毛，然后用8%硫化鈉溶液對其脫毛處理，脫毛面積分別為5 cm×5 cm，2 cm×2 cm。第2天將脫毛且皮膚無破損的大鼠逐個置于自制挫傷模型臺上，以0.2 kg砝碼自20 cm的高度自由落下，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續(xù)同上操作3次，造成急性挫傷模型;按體質量、性別及挫傷程度隨機分為6組，每組10只，雌雄各半。大鼠陰性組每鼠滴涂生理鹽水10 mL/kg體質量，陽性對照組涂抹扶他林0.67 g/kg體質量，賦形劑組涂抹賦形劑4.5 g/kg體質量，藥物高、中、低劑量組分別涂抹獨一味巴布膏4.5 g(生藥)/kg、3.0g(生藥)/kg、1.5 g(生藥)/kg體質量。每天給藥前用生理鹽水擦洗給藥處，待皮膚干燥后再給予藥物涂抹。每日給藥1次，連續(xù)給藥5 d。每日觀察挫傷處的紅腫，瘀血情況。并根據周國林等［5］軟組織挫傷的治療觀察的評分標準再細化形成的標準進行各組鼠的評分:①有輕微紅腫，但無鬧瘀斑及行為障礙，0～1分;②有輕微紅腫和瘀斑，但無行為障礙，1.1～2分;③有輕微紅腫和瘀斑，以及輕微的行為障礙(能行走，不影響行動)，2.1～3分;④有明顯紅腫和瘀斑，行為障礙(向右側傾斜)，3.1～4分;⑤嚴重的紅腫和瘀斑，完全不能自發(fā)行走，4.1～5分。于第5天處死大鼠，取傷肢肌肉固定在10%甲醛溶液中，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色后在光學顯微鏡下觀察其病理變化。所得數據均以±s)表示，用SPSS10.0統(tǒng)計軟件對組間差異進行方差分析。根據周國林等［5］肌肉挫傷評分標準(見表1)對各只鼠評分并進行統(tǒng)計。

1.4.2 啞鈴法［5］造模時以5 kg啞鈴自10 cm的高度，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續(xù)同上操作2次，造成急性挫傷模型。其余操作及評分標準與1.4.1項及表1相同。

2 結果

2.1 獨一味巴布膏對大鼠急性軟組織挫傷的影響見表2、表3。

表1 肌肉挫傷病理評分標準

表2 對大鼠急性軟組織挫傷作用的影響(砝碼)(分值，±s)

表2 對大鼠急性軟組織挫傷作用的影響(砝碼)(分值，±s)

注:各組與陰性對照組比較，*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林組與賦形劑組比較，△△△P＜0.001;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d陰性組—104.01±0.48 4.17±0.44 4.30±0.43 4.42±0.404組別劑量/(g生藥·kg－1)動物/只給藥前分值給藥后(d)分值.01±0.533.72±0.27扶他林組0.67 g·kg－1104.03±0.53 3.91±0.49 3.14±0.71 2.85±0.55＊＊＊△△△2.40±0.37＊＊＊△△△1.78±0.79＊＊＊△△△賦形劑組4.5103.91±0.43 4.18±0.36 4.28±0.36 4.26±0.413.91±0.283.67±0.39獨一味高劑量組4.5103.98±0.52 4.04±0.42 3.80±0.33 3.46±0.45＊＊＊2.98±0.58＊＊＊2.74±0.64＊＊＊獨一味中劑量組3.0103.90±0.41 4.07±0.38 3.90±0.38 3.90±0.31*3.54±0.42*3.36±0.47*獨一味低劑量組1.5103.98±0.27 4.11±0.30 4.06±0.32 4.08±0.333.85±0.393.64±0.27

表3 對大鼠急性組織挫傷作用的影響(啞鈴)(分值，±s)

表3 對大鼠急性組織挫傷作用的影響(啞鈴)(分值，±s)

注:各組與陰性組比較*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林組與賦形劑組比較，△△△P＜0.001;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d陰性組—104.01±0.35 4.21±0.34 4.35±0.36 4.47±0.354組別劑量(g生藥·kg－1)動物/只給藥前分值給藥后(d)分值.19±0.343.97±0.28扶他林組0.67 g·kg－1104.09±0.39 3.89±0.33 3.51±0.29 3.20±0.27＊＊＊△△△2.83±0.31＊＊＊△△△2.19±0.90＊＊＊△△△賦形劑組4.5103.95±0.42 4.07±0.38 4.16±0.34 4.23±0.364.27±0.354.20±0.36獨一味高劑量組4.5104.01±0.39 3.88±0.37 3.63±0.33 3.51±0.36＊＊＊3.28±0.34＊＊＊3.19±0.30＊＊＊獨一味中劑量組3.0104.02±0.31 3.91±0.30 3.67±0.27 3.59±0.26*3.41±0.24*3.12±0.37*獨一味低劑量組1.5103.98±0.23 3.93±0.26 3.85±0.27 3.75±0.313.66±0.303.49±0.31

由表2、3可見，獨一味高、中劑量有良好的改善大鼠急性軟組織挫傷引起的紅腫、瘀血及行走能力。與陰性組比較，具有顯著差異。

2.2 病理組織學檢查結果獨一味巴布膏對大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學評分見表4、表5，圖1、圖2。

表4 對大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學評分(砝碼)(分值，±s)

表4 對大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學評分(砝碼)(分值，±s)

注:各組與陰性對照組比較，＊＊P＜0.01;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

組別劑量/(g生藥·kg－1)動物/只分值(x±s)102.4±0.70扶他林組0.67g·kg－1100.5±0.53＊＊賦形劑組4.5 g·kg－1102.5±0.85獨一味高劑量組4.5100.7±0.48＊＊獨一味中劑量組3.0101.5±0.53＊＊獨一味低劑量組陰性對照組－1.5102.6±0.70

表5 對大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學評分(啞鈴)(分值，±s)

表5 對大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學評分(啞鈴)(分值，±s)

注:各組與陰性對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

只分值陰性對照組組別劑量/(g生藥·kg－1)動物/102.2±0.63扶他林組0.67 g·kg－1100.6±0.52＊＊賦形劑組4.5 g·kg－1102.7±0.67獨一味高劑量組4.5100.9±0.32＊＊獨一味中劑量組3.0101.5±0.85*獨一味低劑量組－1.5102.3±0.67

①陰性組:可見大面積肌肉纖維出現變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細血管擴張充血和增生現象，組織間隙可見大量炎性細胞浸潤。炎癥面積廣。見圖1F、圖2F。

②陽性組:肌肉纖維結構完整，局部區(qū)域可見肌纖維排列紊亂，變性，斷裂，變形范圍小，有一定數量的炎性細胞浸潤。肌纖維間可見毛細血管擴張充血和增生現象。見圖1E、圖2E。

圖1 啞鈴法病理組織學照片(10×10)

圖2 砝碼法病理組織學照片(10×10)

③賦形劑組:可見大面積肌肉纖維出現變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細血管擴張充血和增生現象，組織間隙可見大量炎性細胞浸潤。炎癥面積廣。見圖1B、圖2B。

④獨一味高劑量組:肌肉纖維結構完整，局部區(qū)域可見肌纖維排列紊亂，變性，斷裂，變形范圍小，有一定數量的炎性細胞浸潤。肌纖維間可見毛細血管擴張充血和增生現象。與陽性組比較，肌纖維變性例數多。見圖1C、圖2C。

⑤獨一味中劑量組:肌肉纖維結構出現局部性缺失，嚴重可見肌纖維變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細血管擴張充血和增生現象，組織間隙可見數量較多的炎性細胞浸潤。見圖1D、圖2D。

⑥獨一味低劑量組:可見大面積肌肉纖維出現變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細血管擴張充血和增生現象，組織間隙可見大量炎性細胞浸潤。炎癥面積廣。見圖1A、圖2A。

以上結果表明，獨一味巴布膏以4.5、3.0 g(生藥)/kg給大鼠皮膚涂抹給藥，每日1次，連續(xù)5 d，能改善砝碼和啞鈴所致大鼠急性挫傷癥狀。說明獨一味巴布膏具有顯著改善肌肉組織挫傷的作用。

3 討論

急性軟組織挫傷系指人體運動系統(tǒng)、皮膚以下骨骼之外的組織所發(fā)生的一系列扭傷、挫傷、拉傷等外傷［6］因素而致局部損傷、出血、水腫、肌肉痙攣或肌肉錯位，包括肌肉、韌帶、筋膜、肌腱、滑膜、脂肪、關節(jié)囊等組織以及周圍神經、血管的不同情況的急性損傷［7］。引起損傷后機體的反應為:首先是無數毛細血管的破裂、出血，局部有細胞的失活。隨即發(fā)生炎性反應，在組織胺、5-羥色胺等炎性因子的作用下，微血管先發(fā)生短暫的收縮，然后擴張和充血，通透性增加，血管內的水、蛋白和一些細胞從血管內滲入組織間隙，主要以局部急性炎癥和組織修復為特征，臨床表現為局部疼痛、壓痛、腫脹、青紫瘀斑、肢體活動功能障礙等［8］。中醫(yī)認為其病機為“氣滯與血瘀”并見，在治療軟組織挫傷方面有長期的臨床實踐，其中以中藥外治法獨具特色，包括貼藥、敷藥、擦劑、騰洗藥等，一般采用活血化瘀、理氣止痛的治療原則［9］。局部外服中藥可以使藥效集中作用于局部，高效而且安全，發(fā)揮較大的治療作用［10］。

巴布膏劑在《中國藥典》2005年版中由于皮膚親和性好、使用安全方便、刺激性小、生產無工業(yè)“三廢”，已被公認為是透皮給藥體系發(fā)展的新方向［11］，獨一味作為傳統(tǒng)的治療跌打損傷藏藥，在多年的臨床應用中，其鎮(zhèn)痛、消炎、活血化瘀的作用確切，但上市銷售品種均以口服制劑為主，如膠囊劑、顆粒劑、滴丸等，將其開發(fā)成外用巴布膏劑，實現了劑型和給藥途徑上的重大突破。

機械損傷能使組織斷裂或細胞破裂，擊傷的強弱和持續(xù)時間的不同，引起的后果也不同［12］。本實驗采用直接擊傷的方法造成動物軟組織損傷，所以實驗時嚴格控制了打擊的高度和質量，使在等同的條件下造成軟組織損傷的強度一致。本研究中，獨一味巴布膏對啞鈴和砝碼兩種方法所致的急性軟組織挫傷，無論從肉眼觀察，還是病理組織學檢查，均驗證了該藥物在治療血瘀(軟組織損傷)方面的藥理作用，為臨床應用提供了藥理學參考。

［1］馬維寧.藏藥獨一味及制劑的藥理及臨床研究概述［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2005，2(1):39-40.

［2］沈建偉，王銳娟，王環(huán)，等.藏藥獨一味的研究進展［J］.安徽農業(yè)科學，2008，36(5):1920-1922.

［3］李茂星，賈正平，張汝學.鎮(zhèn)痛止血藥獨一味的研究概況［J］.中藥材，2004，27(3):222-224.

［4］李衛(wèi)星，譚大琦.消瘀止痛膏對大鼠急性軟組織損傷的治療作用［J］.中醫(yī)正骨，2000，12(1):11-12.

［5］周國林，姚全勝，潘玉英.一種動物軟組織損傷的實驗方法［J］.中國藥理學通報，1991，7(5):396-399.

［6］丁偉國，章建華.中醫(yī)藥治療急性軟組織損傷實驗研究進展［J］.甘肅中醫(yī)學院學報，2008，25(1):51-53.

［7］楊小欣.活血化瘀藥治療急性軟組織扭挫傷機理分析［J］.中醫(yī)正骨，2003，15(10):57.

［8］佃仁森，王和鳴，練克儉，等.中藥促進軟組織損傷修復的臨床研究進展［J］.中國中醫(yī)骨傷科雜志，2008，16(3):68-72.

［9］趙士貴.獨一味的藥理及臨床應用［J］.時珍國醫(yī)國藥，2004，15(12):873-873.

［10］王樂楊，金立倫.中藥外用治療急性軟組織損傷的研究進展［C］//2010年度全國醫(yī)藥學術論文交流會暨臨床藥學與藥學服務研究進展培訓班論文集，2010.

［11］賈偉，劉云斌.中藥巴布劑的研究現狀［J］.中國中藥雜志，2003，28(1):7-10.

［12］徐闖，王建發(fā)，王曉旭，等.三七紅花酒對軟組織損傷大鼠療效觀察［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2010(1):33-35.