張小青 張雪菊

甘肅奇正藏藥有限公司，甘肅蘭州730100

HPLC測定十味黑冰片丸中沒食子酸含量

張小青 張雪菊

甘肅奇正藏藥有限公司，甘肅蘭州730100

目的:研究十味黑冰片丸中沒食子酸含量HPLC的測定方法。方法:采用反相高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為乙腈－4%磷酸溶液(5:95)，檢測波長為272nm，流速0．8mL·min－1。結(jié)果:沒食子酸對照品在0．4～2．0ug濃度內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0．9993。平均加樣回收率99．64%，RSD為0．22%(n=6)。結(jié)論:該方法準(zhǔn)確可靠、簡便，可用于十味黑冰片丸的質(zhì)量控制。

十味黑冰片丸;沒食子酸;HPLC;含量測定

本文選擇了測定訶子藥材中沒食子酸的含量作為本品質(zhì)控定量指標(biāo)，采用了十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，建立了準(zhǔn)確、簡便、可靠的沒食子酸分析方法，能有效的控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，利于提高藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理水平。

1 儀器、試劑與樣品

儀器高效液相色譜儀(美國Aglient公司1200系列)包括:Aglient1200雙元泵，自動進(jìn)樣器，紫外檢測器，柱溫箱，色譜工作站、CSF－IB超聲波清洗器(上海超聲波儀器廠)

試劑乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純，水為重蒸水。

對照品沒食子酸(中國藥品生物制品檢定所，批號:110831－2009);

樣品十味黑冰片丸(20101101、20101102、20101103由本研究院提供)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Aglient－XDBC18色譜柱(4.6mm×150mm，5um);流動相:乙腈－4%磷酸溶液(5:95);流速:0.8ml·min－1;檢測波長:272nm;柱溫:25℃。理論板數(shù)n=7024;相鄰峰分離度R=2.06;拖尾因子T=0.977。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備取沒食子酸對照品10.30mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，制成濃度為0.412mg·mL－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約0.6g，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加入甲醇80ml，超聲處理30分鐘，放冷，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.3 陰性對照液的制備按處方中藥味的比例，自配不含訶子藥材的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性液。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密吸取沒食子酸對照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品的進(jìn)樣量(ug)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=4954.7x－35.949(r=0.9993)，沒食子酸在0.4～2.0ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果:進(jìn)樣量為0.412時，峰面積為2067.33;進(jìn)樣量為0.824時，峰面積為4036.64;進(jìn)樣量為1.236時，峰面積為6019.50;進(jìn)樣量為1.648時，峰面積為8049.14;進(jìn)樣量為2.060時，峰面積為10267.80。

2.4 空白試驗

精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液各10ul，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，結(jié)果陰性對照液在與沒食子酸對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無干擾。

2.5 精密度試驗

精密吸取濃度同一對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，結(jié)果第1次峰面積為4036.83，第2次峰面積為4029.06，第3次峰面積為4068.91，第4次峰面積為4026.26，第5次峰面積為4027.25;5次平均值為4037.66，RSD值為0.47%。試驗結(jié)果表明，精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品(批號20101101)溶液10μl，分別于配制后0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果0h峰面積為3167.02，2h峰面積為3161.08，4h峰面積為3151.82，6h峰面積為3184.68，8h峰面積為3158.97，12h峰面積為3176.25;各個時間段平均值為3163.63，RSD為1.37%。試驗結(jié)果表明，供試品溶液在12小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

取本品(批號:20101101)6份，按供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣10μl，計算沒食子酸的含量及RSD，結(jié)果樣品1含量3.63，樣品2含量3.97，樣品3含量3.02，樣品4含量3.01，樣品5含量3.98，樣品6含量3.02;平均值為3.43，RSD值為1.16%。試驗表明，重復(fù)性較好。

2.8 回收率試驗

取已知含量的同一批樣品(批號:20101101，含量為3.43mg·g－1)6份，研細(xì)，每份約0.30g，精密稱定，分別精密加入濃度為0.412mg·mL－1的沒食子酸對照品溶液各2ml，測定峰面積，求得沒食子酸含量，計算回收率，測定結(jié)果回收率為99.64，RSD0.22。

2.9 樣品中沒食子酸的含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依法測定，計算含量，結(jié)果20101101含量為3.43，20101102含量為4.93，20101103含量為4.26。

3 討論

用HPLC法測定十味黑冰片丸中測定沒食子酸的含量時，流動相(乙腈:水)易產(chǎn)生拖尾，加入一定比例的磷酸可使峰形減少拖尾，增加沒食子酸峰形對稱性。通過線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率的試驗考察，證明該方法快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能有效控制本制劑的質(zhì)量。

［1］朱彭齡．現(xiàn)代液相色譜［M］．蘭州:蘭州大學(xué)出版社，1996:215－254．

［2］徐小平．HPLC測定4種藏藥中的沒食子酸的含量［J］．華西藥學(xué)雜志，2003，18(6)448－450．

［3］潘國慶．HPLC測定藏成藥九味青鵬散中的沒食子酸的含量［J］．中成藥，2006，28(9)1391－1393．

R927.2

A

1007－8517(2012)19－0037－02

張小青，女，大專，中級工程師，主要從事藏藥生產(chǎn)質(zhì)量研究。

2012.08.11)