張 峰 李建新 戰(zhàn)祥彩 于燕群

山東省日照市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，山東日照 276800

膠體金免疫結合試驗基于酶免疫結合試驗發(fā)展起來的固相標記免疫測定技術，因其具有單份測定、快速、簡單等優(yōu)點在目前的臨床檢測中得到了廣泛的應用。 膠體金免疫結合試驗除了使用商品試劑之外不需要其他儀器設備，且在數(shù)分鐘內可肉眼觀察結果， 現(xiàn)將膠體金免疫結合試驗的檢測原理以及在各類疾病預防控制領域檢驗中的應用報道如下。

1 膠體金免疫技術

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如枸櫞酸鈉、抗壞血酸、鞣酸、白磷等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并在靜電作用下成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。 膠體金在弱堿條件下帶負電荷，可與帶正電荷基團的蛋白質分子形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以對蛋白質的生物特性不造成影響。 膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如PHA、SPA、ConA 等。 根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如顏色反應、顆粒大小、形狀及高電子密度，加上結合物的免疫和生物學特性，在組織學、病理學、免疫學和細胞生物學等領域對膠體金進行廣泛地應用。

膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。 吸附機理可能是蛋白質的正電荷基團與膠體金顆粒表面負電荷因靜電吸附而形成牢固結合。 用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑，也就是不同顏色的膠體金顆粒。 這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與免疫球蛋白、葡萄球菌A 蛋白、牛血清白蛋白多肽綴合物、抗生素、糖蛋白、毒素、酶、激素等非共價結合，因而成為基礎研究和臨床實驗中非常有用的工具。

2 膠體金免疫結合試驗檢測原理

膠體金免疫結合試驗用載體微孔濾膜包被已知的抗體或抗原，待檢標本經(jīng)過濾膜的毛細管作用，膜上包被的抗原或抗體和標本中的抗體或抗原結合，通過膠體金結合物實現(xiàn)檢測。 目前在醫(yī)學檢驗中的應用主要是快速免疫金滲濾法 (Dot-immuogold Filtration Assay,DIGFA)和免疫層析法(Immunochromatogra-phy)，用于檢測 抗雙鏈DNA 抗體和HCG 、HBsAg 等，具有快速、簡單、準確和無污染等優(yōu)點。

3 膠體金免疫結合試驗在疾病預防、控制、檢驗方面的應用

3.1 膠體金免疫結合試驗對細菌性疾病的檢驗應用

3.1.1 用于檢測鼠疫耶爾森菌 快速免疫金滲濾法檢測鼠疫耶爾森菌因其不與小腸結腸耶氏菌發(fā)生交叉反應，因此具有良好的特性，最低檢出限為2.4×105cfu/mL。

免疫層析法檢測鼠疫耶爾森菌的靈敏度是1×105cfu/mL，用F1 抗體金探針檢測F1 抗原的最低檢出限10 μg/L，對土壤、面粉、奶粉、水、酵母粉以及淀粉等材料中的鼠疫耶爾森菌檢驗，得到同樣的結果。

3.1.2 用于檢測沙門菌 采用抗原吸收法，使抗沙門菌在封閉的環(huán)境下與其他的腸道桿菌發(fā)生交叉反應，將標記膠體金溶膠制成探針，然后采用多膜復合的方法制成免疫層析條，免疫層析的條靈敏度12.1×106cfu/mL，沙門菌不和其他腸道桿菌反應，檢測108～1011cfu/mL 菌懸液并未出現(xiàn)鉤狀效應。 建立檢測沙門菌09抗氧的快速免疫金滲濾法，檢測沙門菌09 抗原單克隆抗體3-47-0 以及膠體金標記親和純化的羊抗鼠IgG，檢測腸炎沙門菌標準菌株的靈敏度為6×104cfu/點，所有含09 抗原的沙門菌可用快速免疫金滲濾法進行檢測，同時不與其他的沙門菌、革蘭陽性菌和腸桿菌科其他細菌反應。

3.1.3 用于檢測金黃色葡萄球菌 快速免疫金滲濾法用于檢測金黃色葡萄球菌，最低檢測下限3.3×106～6.1×106cfu/mL。 檢測了12株大腸埃希菌和18 株不產(chǎn)毒素金黃色葡萄球菌，其中，各有一株發(fā)生了交叉反應，志賀菌、沙門菌8 株，腐生菌、鏈球菌7 株都未發(fā)生交叉反應。

3.2 膠體金免疫結合試驗對病毒性疾病的檢驗應用

3.2.1 用于檢驗艾滋病抗體 對18 家申報注冊艾滋病抗體快速檢測試劑實施臨床評價，300 份強陽性標本18 家試劑檢測靈敏度均為100%；450 份健康獻血員樣品，15 家試劑（3 家未檢測）特異性為96.9%～100%；259 份高危人群樣品，18 家試劑靈敏度為73.6%～94.9%，特異性1 家為58.7%，其他大部分在95.3%以上。

3.2.2 用于檢驗流行性出血熱抗體 用膠體金免疫結合試驗，檢測80 份流行性出血熱患者血清均陽性，采用膠體金免疫試劑盒檢測陽性80 份，靈敏度97.9%。檢測家貓血清、黑線姬鼠、兔免疫血清共10 份，檢測結果全部為陽性。 檢測健康人群血清40 份，檢測結果全部陰性。 用膠體金免疫試劑盒檢測乙腦、鉤體病、乙肝、其他出血性疾病等220 份全部陰性。 用膠體金免疫滲濾法檢測60 份HFRS 患者血清中的抗?jié)h坦病毒IgM 抗體，16 份病程3 d內，其中14 份陽性，余下44 份病程4 d 及以上全部陽性。

3.2.3 用于檢驗柯薩奇病毒 因為柯薩奇病毒易引起多種疾病，故研制了柯薩奇病毒IgM 抗體膠體金免疫層析診斷試紙條用于檢驗薩奇病毒，檢測36 份血清，以RT-PCR 作為標準，膠體金免疫結合試驗靈敏度96.3%，特異性66.8%。

3.3 膠體金免疫結合試驗對寄生蟲病的檢驗應用

3.3.1 血吸蟲抗體 用快速免疫金滲濾法檢測血吸蟲抗體，總靈敏度為96.8%，其中，急性血吸蟲患者靈敏度為99.9%，慢性患者靈敏度97.8%，晚期患者靈敏度92.8%。 血吸蟲流行區(qū)病人康復特異性83.1%，非流行區(qū)治愈病人特異性96.1%，20 例華支睪血吸蟲病人、198 例健康人均為陰性，總的特異性為96.1%。 快速免疫金滲濾法的特異性、靈敏度以及診斷效率和膠體金SEA-dipstick 方法相似。所謂膠體金SEA-dipstick 方法即用血吸蟲可溶性蟲卵抗原包被dipstick 硝酸纖維薄膜，該方法對于急性血吸蟲患者靈敏度為100%，對慢性患者靈敏度98.1%，對健康人檢測假陽性為0.19%。

3.4 膠體金免疫結合試驗對其他微生物疾病的檢驗應用

3.4.1 用于檢測梅毒 膠體金免疫結合試驗可用于檢測臨床梅毒，與美國梅毒螺旋體特異性抗體膠體金法和日本富士公司的TPPA 試劑相比，我國的膠體金試劑盒檢測臨床病例，靈敏度以72.5%高于其他兩種試劑。 采用膠體金免疫結合試驗檢測孕婦血清、紅斑狼瘡患者以及其他正常體檢人群，得到孕婦血清35 例、紅斑狼瘡等其他患者血清80 例、正常體檢血清25 例均為陰性。

4 結語

膠體金免疫結合試驗在疾病預防控制領域檢驗中的應用還見于破傷風抗體、結核抗體、風疹抗體、土拉菌、流感病毒、登革熱抗體以及衣原體等的檢測。 膠體金免疫結合試驗以其操作快速、簡便、不需要貴重儀器設備等優(yōu)點，在疾病預防控制領域檢驗中得到運用。 然而，目前膠體金免疫試劑沒有統(tǒng)一標準，致使大部分實驗室使用自發(fā)研制的膠體金試劑，這就使得膠體金免疫結合試驗的特異性、靈敏性 眾說紛紜、不一致，因此在疾病預防控制領域有待進一步完善膠體金免疫結合試驗的標準。

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