張兵 高兵 王強(qiáng) 何小龍 杜廣剛

（四川省人民醫(yī)院，四川成都610072）

嚴(yán)重?zé)齻缙?，由于毛?xì)血管通透性增高致有效循環(huán)血容量相對不足引起微循環(huán)障礙，從而削弱腸黏膜的屏障功能，并導(dǎo)致腸道細(xì)菌及其產(chǎn)物的易位，腸道內(nèi)細(xì)菌移至腸外，通過腸淋巴循環(huán)和門脈系統(tǒng)侵入腸系膜淋巴結(jié)（MLN）、肝臟、脾臟等其他臟器，細(xì)菌釋放的內(nèi)毒素大量吸收入血，引起腸源性內(nèi)毒素血癥和全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS），最終導(dǎo)致多系統(tǒng)器官功能障礙綜合征（MODS）的發(fā)生［1］。本研究通過復(fù)制嚴(yán)重?zé)齻笫竽Ｐ停私鈶?yīng)用參附治療后大鼠腸粘膜屏障功能的改變，旨在為臨床早期保護(hù)腸粘膜提供治療策略?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料健康成年雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量（250±20）g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心提供。參附注射液由雅安三九藥業(yè)有限公司提供，國藥準(zhǔn)字Z20043116，批號031104.1，規(guī)格10 mL/支。內(nèi)毒素鱟試劑盒購自上海市伊華臨床醫(yī)學(xué)科技公司。

1.2 實驗方法 利用隨機(jī)數(shù)字表將動物隨機(jī)分成3組，即對照組（A組，6只）、燒傷組（B組，12只）、參附治療組（C組，12只）。B、C組腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉，背部剃毛，浸于95℃水浴中18 s，形成30%TBSAⅢ°燒傷（切片證實），按Parkland公式（4 mL/%TBSA/Kg）腹腔注射乳酸林格氏液抗休克補液，于傷后即刻和傷后8 h各注入24 h總量的一半。參附治療組大鼠在燙傷后即刻腹腔注射參附注射液（10 mL/kg）。燙傷后動物分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、水，以確保液體抗休克的一致性［2］。

1.3 檢測方法 血漿內(nèi)毒素的測定：各組動物于燒傷后72 h，無菌心臟穿刺采血2 mL，注入肝素鈉抗凝試管，離心分離血漿（1000 r離心5 min），-35℃冰凍保存，偶氮基質(zhì)顯色鱟試驗（LAL）定量測定血漿內(nèi)毒素含量。腸道細(xì)菌移位量測定，方法 如下。（1）腹腔沖洗液培養(yǎng)：腋動脈放血處死動物，消毒，開腹腔，取1 mL 0.15 M磷酸鹽緩沖液（PBS）反復(fù)沖洗腹腔，收集沖洗液，取0.1 mL接種于LB瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。只有腹腔沖洗液培養(yǎng)陰性的動物為本實驗的統(tǒng)計對象。（2）內(nèi)臟組織勻漿細(xì)菌培養(yǎng)：無菌分離肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)，稱重，剪碎后勻漿，取勻漿液0.1 mL接種于LB瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48 h后計算菌落數(shù)，計算每克組織內(nèi)細(xì)菌菌落形成單位（CFU）及其標(biāo)準(zhǔn)差。（3）菌種鑒定：將腸系膜淋巴結(jié)、肝、脾組織勻漿液培養(yǎng)獲得的菌落，用自動細(xì)菌鑒定儀Auto-4（美國DADE公司）及配套的NC21鑒定板進(jìn)行菌種鑒定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件行單因素方差分析及Student-Newman檢驗。計量資料以（±s）表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組燒傷后72 h血漿內(nèi)毒素含量比較見表1。與對照組相比，傷后72 h燒傷組大鼠血漿內(nèi)毒素含量明顯升高（P＜0.01）；而參附治療組大鼠血漿內(nèi)毒素含量與對照組相近（P＞0.05）。

表1 各組大鼠燒傷后72 h血漿內(nèi)毒素含量（Eu/L，±s）

表1 各組大鼠燒傷后72 h血漿內(nèi)毒素含量（Eu/L，±s）

與對照組比較，△P＜0.01。下同。

組別n內(nèi)毒素含量對照組61181.50±529.10燒傷組127614.60±3221.80△參附治療組121203.20±628.40

2.2 各組大鼠燒傷后腸道細(xì)菌移位量比較見表2。除對照組外，燒傷組和參附治療組內(nèi)臟組織細(xì)菌培養(yǎng)均有菌落形成，參附治療組內(nèi)臟組織細(xì)菌移位量明顯低于燒傷組（P＜0.01），而略高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。菌種鑒定的結(jié)果 均為腸道寄生菌（大腸埃希菌或腸球菌）。

表2 各組大鼠燒傷后肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位量（CFU，±s）

表2 各組大鼠燒傷后肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位量（CFU，±s）

與燒傷組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別n腸系膜淋巴結(jié)肝臟脾臟對照組60燒傷組12928.00±501.20*0 0 185.00±93.70△322.00±178.10*參附治療組12225.00±123.60▲▲78.00±41.20▲▲106.00±68.30▲

3 討論

胃腸道血運豐富，極易受到缺血缺氧的損害，因此成為燒傷后最易受損的器官之一。正常狀態(tài)下，胃腸道依賴于胃腸黏膜屏障的防御機(jī)能，能夠保護(hù)宿主免受腸腔中細(xì)菌、內(nèi)毒素的侵襲。嚴(yán)重?zé)齻蟀l(fā)生的急性胃腸黏膜缺血損害以及由此而引起的胃腸道屏障功能的改變，是導(dǎo)致燒傷后SIRS和MODS發(fā)生的重要原因，也是降低燒傷休克復(fù)蘇質(zhì)量、誘發(fā)腸源性感染和內(nèi)毒素血癥的危險因素。因此，維護(hù)胃腸黏膜的完整性、減少炎癥介質(zhì)的釋放，是降低燒傷病死率的關(guān)鍵［3-5］。

參附注射液組方源自參附湯，其用人參大補元氣，附子溫壯真陽，兩藥相配，最能振奮元陽，益氣固脫［6］。該注射液有效成分為人參皂苷和烏頭類生物堿。研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷具有促進(jìn)前列腺素的釋放和擴(kuò)張冠狀動脈作用，有與強(qiáng)心苷相似的強(qiáng)心作用；同時可改善微循環(huán)，擴(kuò)張血管，達(dá)到升壓、穩(wěn)壓作用。烏頭堿有β受體興奮作用，可激動超氧化物歧化酶（SOD），清除氧自由基，保護(hù)細(xì)胞，同時對血壓有雙向調(diào)節(jié)作用［7］。因此參附注射液具有強(qiáng)心、升壓、擴(kuò)張冠狀動脈、改善心臟血液循環(huán)的功能；增強(qiáng)血清SOD活性，并能降低脂質(zhì)過氧化物的含量，同時可使溶酶體膜趨于穩(wěn)定，溶酶釋放減少，使細(xì)胞損傷減輕［7］。

本研究表明，大鼠嚴(yán)重?zé)齻竽c粘膜通透性增加，血漿內(nèi)毒素含量明顯增高，給予參附注射液后，血漿內(nèi)毒素未有明顯下降；同時，腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾臟等組織勻漿培養(yǎng)結(jié)果 亦提示燒傷后72 h，在腸外組織中可發(fā)現(xiàn)腸道細(xì)菌，說明腸黏膜連續(xù)性受到破壞致腸道細(xì)菌易位，但參附治療組檢出菌量明顯低于未治療組，說明參附注射液對嚴(yán)重?zé)齻笫蟮哪c黏膜結(jié)構(gòu)有修復(fù)作用，有助于維持腸粘膜屏障的正常功能。以上結(jié)果 表明，在嚴(yán)重?zé)齻缙趹?yīng)用參附注射液對腸黏膜屏障有一定的保護(hù)作用，可減少腸道細(xì)菌易位，有助于降低燒傷所致腸源性感染的發(fā)生，對燒傷所致腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷有一定的修復(fù)作用。

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