曾 緯，劉 飛，張德利

（重慶市中藥研究院，四川 重慶 400065）

冬蟲夏草是我國(guó)特產(chǎn)珍稀名貴中藥材，系麥角菌科真菌冬蟲夏草（Cordyceps sinensis） 寄生于蝠蛾屬 （Hepialus）昆蟲幼蟲體內(nèi)形成的蟲菌復(fù)合體。因產(chǎn)于青藏高原局部高寒山區(qū)，生長(zhǎng)緩慢，野生資源極為稀少。冬蟲夏草對(duì)人體有良好的保健功能，對(duì)多種疾病有獨(dú)特治療作用，具有極高的市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。自上世紀(jì)70年代以來(lái)，因冬蟲夏草新療效的發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)需求猛漲，價(jià)格直線上升而遭致掠奪式的采挖；加之大氣變暖，生境遭到嚴(yán)重破壞，野生產(chǎn)量迅速減少，資源瀕危，在2003年已被列為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)品種。要解決日益嚴(yán)重的供需矛盾，人工培殖冬蟲夏草勢(shì)在必行。

在國(guó)家科技項(xiàng)目支持下，重慶市中藥研究院從1979年開始對(duì)冬蟲夏草人工培殖技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)研究，并一直處于該研究領(lǐng)域前列。在人工批量飼養(yǎng)寄主蝠蛾的研究中，飼養(yǎng)的蝠蛾幼蟲曾出現(xiàn)一種嚴(yán)重病害即綠僵病，可導(dǎo)致幼蟲大量死亡。通過(guò)系列研究病害發(fā)生情況和試驗(yàn)各環(huán)節(jié)的防治措施，解決了一系列技術(shù)難題，最終整合形成一套綠僵病綜合防治方法，可有效地防治蝠蛾幼蟲綠僵病。

1 綠僵病危害程度調(diào)查

1.1 調(diào)查方法

在飼養(yǎng)過(guò)程中，每次更換幼蟲飼料、基質(zhì)時(shí)，將發(fā)現(xiàn)的死蟲剔出，取蟲體組織及蟲體上生長(zhǎng)出的產(chǎn)物在顯微鏡下觀察鑒定（或經(jīng)保濕培養(yǎng)后再觀察鑒定）。統(tǒng)計(jì)各類死蟲占總死蟲數(shù)的比例。

1.2 調(diào)查結(jié)果

歷時(shí)3年對(duì)數(shù)批次萬(wàn)余頭人工飼養(yǎng)條件下的蝠蛾幼蟲進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)真菌性病害死蟲最為嚴(yán)重，占97%以上，其中又以綠僵病最嚴(yán)重，其他病害相比較少。

例1：對(duì)378條3齡~5齡幼蟲飼養(yǎng)觀察，3個(gè)月總共死去375條，期間3次調(diào)查統(tǒng)計(jì)，綠僵病死蟲平均占61.3%。

例2：對(duì)飼養(yǎng)的1齡~3齡幼蟲7個(gè)月內(nèi)進(jìn)行3次檢查，在623條死蟲中綠僵病致死數(shù)量也居首位，平均占81.6%?？梢?jiàn)綠僵病是一種危害蝠蛾各齡幼蟲的嚴(yán)重病害。

2 病原

經(jīng)分離培養(yǎng)觀察，鑒定為半知菌綱、綠僵菌屬、金龜子綠僵菌Metarrhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin[1]。

3 侵染發(fā)病特點(diǎn)

據(jù)觀察，主要在各齡幼蟲階段發(fā)病，蛹階段發(fā)病很少，卵、成蟲階段未見(jiàn)發(fā)病。綠僵菌分生孢子粘附在幼蟲表皮上，孢子萌發(fā)出芽管，芽管前端產(chǎn)生膨大的附著孢，附著孢上產(chǎn)生1條或多條侵染絲穿透幼蟲表皮進(jìn)入蟲體。菌絲在蟲體內(nèi)斷裂成菌絲段，隨血淋巴流動(dòng)。當(dāng)菌絲段增殖并伸長(zhǎng)生長(zhǎng)到一定數(shù)量后充滿體腔，感病蟲死亡，僵化，后期僵蟲體表菌絲產(chǎn)生大量綠色分生孢子。

4 侵染源及傳播

未經(jīng)滅菌的（養(yǎng)蟲用過(guò)的）基質(zhì)、飼料、用具上的病原菌，僵蟲體上產(chǎn)生的孢子均能成為初次（再次）侵染源。分生孢子可隨著幼蟲個(gè)體取食活動(dòng)，飼養(yǎng)環(huán)境中其他昆蟲如蚊蟲、跳蟲、螨蟲等的活動(dòng)，飼養(yǎng)人員的操作管理活動(dòng)等在幼蟲群體中反復(fù)傳播侵染。

5 癥狀

感病蟲體痹軟，爬行緩慢，刺激反應(yīng)遲鈍，體節(jié)微腫脹，節(jié)間稍縊縮，部分有體色退淡的現(xiàn)象。僵蟲體色發(fā)黃，微扁形，節(jié)間皺迭干縮，質(zhì)地軟綿不堅(jiān)。僵蟲體表長(zhǎng)出淺層細(xì)密白色絨狀菌絲體，菌絲上形成鏈生的卵圓形分生孢子，孢子鏈排列緊密，隨著孢子增多，顏色逐漸加深變綠，當(dāng)孢子層不斷增厚形成肉眼可見(jiàn)觸之即落的鮮綠色的粉被時(shí)，蟲體消解消失。

6 綠僵病綜合防治方法

根據(jù)綠僵菌生物學(xué)特性和病害發(fā)生的特點(diǎn)結(jié)合蝠蛾幼蟲飼養(yǎng)操作過(guò)程，在不同環(huán)節(jié)分別采用化學(xué)、物理防治方法，對(duì)養(yǎng)蟲各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行人工控制。采取“預(yù)防為主，綜合防治”的措施，防止和減少綠僵病發(fā)生及危害。

6.1 減少病菌初次來(lái)源首先是對(duì)蝠蛾卵表面清潔和清洗

初產(chǎn)出的蝠蛾卵用鑷子夾除掉粘附在卵表面的雜物，以免卵上粘附病原菌或害蟲卵。蝠蛾卵保濕孵化期內(nèi)，每天檢查2次，一旦發(fā)現(xiàn)有長(zhǎng)霉現(xiàn)象，應(yīng)立即用清水反復(fù)多次沖洗，直至除去霉變或其它滋生物。

6.2 器材消毒

凡是用于培殖冬蟲夏草的器材、用具，使用之前必須消毒，以防止帶入病菌。養(yǎng)蟲工具（飼養(yǎng)容器）用清水刷洗干凈，并用60℃以上濕熱滅菌15 min以上后取出用滅菌薄膜袋封閉，送飼養(yǎng)室倒放在飼養(yǎng)架上排干水分備用。其它金屬材料制作的工具，如鏟、夾、鑷等用清水浸泡刷洗干凈后，也可采用電熱恒溫100℃～120℃干熱滅菌1 h～1.5 h，冷卻后備用。養(yǎng)蟲用過(guò)的用具、器材、容器必須立即消毒，以殺滅粘附在上面的病原菌種原，以防止在環(huán)境中造成再次傳播。

6.3 基質(zhì)消毒

將養(yǎng)蟲用的基質(zhì)拌入適量水?dāng)噭颍购吭?0%~60%范圍內(nèi)，裝入塑料薄膜袋內(nèi)，用繩捆扎封緊袋口，將土袋置于電熱鼓風(fēng)干燥箱或濕熱消毒箱中，使袋內(nèi)部中心溫度上升至60℃以上，恒溫30 min以上消毒，冷卻后供養(yǎng)蟲使用。

6.4 飼料消毒

將采挖的飼料（如珠芽蓼等）去掉泥沙、雜物、根須、枝葉和腐爛部分，多次淘洗，洗凈表面泥沙后晾干。將晾干的珠芽蓼置入40%～95%的乙醇溶液中浸泡滅菌10 min～20 min，邊淘洗邊撈起過(guò)濾，流水沖洗浸泡0.5 h后，撈起倒在濾水的工具上攤晾，風(fēng)干表面水分。環(huán)境要求相對(duì)通風(fēng)，忌雜菌污染（工具、房屋事前必須經(jīng)過(guò)消毒，消毒方法同場(chǎng)地消毒），待水干后用干凈滅菌的刀切塊投喂幼蟲。

6.5 培殖場(chǎng)地消毒

在投放幼蟲前5 d~7 d將飼養(yǎng)室、養(yǎng)蟲架等進(jìn)行消毒滅菌，可用40%~95%的乙醇溶液或1∶5 000倍來(lái)蘇爾溶液噴灑屋壁，拖洗地板、擦洗養(yǎng)蟲架等，密閉2 d至5 d后即可使用。飼養(yǎng)過(guò)程中，如果發(fā)現(xiàn)有螨蟲、蚊蟲等有害昆蟲出現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)將養(yǎng)蟲盒（連同盒內(nèi)的土壤、飼料、蟲在內(nèi)）整體取出，置于臭氧消毒箱中進(jìn)行殺蟲處理5 min~20 min。

6.6 工作人員消毒

在進(jìn)入培殖場(chǎng)地之前，應(yīng)更換經(jīng)過(guò)滅菌的專用工作服、鞋子，并用洗手劑清洗雙手，然后用消毒毛巾擦干，培殖冬蟲夏草的場(chǎng)所應(yīng)禁止吸煙，禁止帶入未經(jīng)過(guò)消毒的雜物。衣服、毛巾等用品應(yīng)當(dāng)每次使用后進(jìn)行消毒。

6.7 人流、物流通道的消毒

人流、物流通道每次使用后要打掃清潔，每周定期用75%乙醇、1∶5 000倍來(lái)蘇爾或4%過(guò)氧乙酸溶液擦洗墻面，鞋底、推車等以消毒盤盛裝消毒液在經(jīng)過(guò)時(shí)進(jìn)行消毒。培殖場(chǎng)所嚴(yán)格實(shí)行物流單向運(yùn)動(dòng)，新料、廢料分流不同通道的原則，以免交叉感染傳帶?。êΓ┫x種原。

6.8 培殖過(guò)程中切斷?。êΓ┫x種原傳播和防止再次傳染

對(duì)培殖的蝠蛾幼蟲應(yīng)每天抽查，如發(fā)現(xiàn)基質(zhì)表面有霉變物，應(yīng)立即用工具除去。在飼養(yǎng)管理過(guò)程中，一旦發(fā)現(xiàn)有蟲生真菌危害，應(yīng)及時(shí)發(fā)現(xiàn)和剔除病、死蟲體以防止病害傳播，同時(shí)用少量的殺菌劑噴撒周圍的土壤基質(zhì)，以切斷病菌再次傳染源，減少其傳播。用鑷子將腐敗的飼料塊揀出，再在飼料表面覆蓋有消毒液的土壤基質(zhì)。大幼蟲最易被病原菌感染，除了及時(shí)排除病死蟲外，還應(yīng)采取化學(xué)藥物和物理方法等綜合防治措施。每次飼養(yǎng)培殖過(guò)程完成后，運(yùn)出培殖室的一切用具、基質(zhì)、殘余飼料等均必須全部進(jìn)行干熱或濕熱消毒處理，以防止病原留存、傳播。

7 綜合防治結(jié)果

采用綜合防治方法以后，在1991年至2012年對(duì)數(shù)十批次數(shù)萬(wàn)以上蝠蛾的飼養(yǎng)觀察中，蝠蛾綠僵病未再發(fā)生。

[1]A.A.耶夫拉霍娃.昆蟲病原真菌[M]．北京：科學(xué)出版社，1982：231-232.