鄒 華 王 東 彭 韜 謝家印 楊雪琴 單錦露

腫瘤標(biāo)志物(tumor markers,TM)是指腫瘤細(xì)胞分泌或脫落到體液、組織中的物質(zhì)，或是在宿主對體內(nèi)寄生物反應(yīng)產(chǎn)生并進(jìn)入到體液、組織中的物質(zhì)。1種腫瘤可以有多種不同的腫瘤標(biāo)志物，不同腫瘤也可以表達(dá)相同的腫瘤標(biāo)志物。C-12型多腫瘤芯片常用于腫瘤的臨床診斷，具有檢測快速、易于操作，以及高通量、聯(lián)合指標(biāo)分析等優(yōu)點(diǎn)，同時對腫瘤高危人群的篩查也具有顯著的臨床意義[1]。本文對資料完整的25 076例多腫瘤蛋白芯片檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，重點(diǎn)分析不同人群和常見腫瘤中NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)陽性檢測率，探討NSE單項(xiàng)及聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物與不同人群及常見腫瘤的相關(guān)性，為深入了解C-12型多腫瘤芯片中NSE陽性檢測在腫瘤篩查和診斷中的重要價值，提供臨床依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

我院自2003年12月至2011年7月，應(yīng)用浙江湖州數(shù)康生物科技有限公司生產(chǎn)的C12型腫瘤診斷用蛋白芯片試劑盒(簡稱C12)，采用化學(xué)免疫法完成多腫瘤蛋白芯片檢測38 600例次，其中診斷不明確者4 229例，同一患者多次檢測達(dá)11 106例次，可供分析的病例共25 076例，其中男性15 993例，女性9 083例；年齡12～94歲，平均55.82歲。惡性腫瘤患者均經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織學(xué)檢查確診。

25 076例可供分析的病例中，惡性腫瘤組(腫瘤組)11 485例，包括肺癌4 004例、腸癌1 178例、肝癌1 069例、食管癌785例、乳腺癌477例、胃癌375例、胰腺癌266例、卵巢癌208例、子宮內(nèi)膜癌78例、前列腺癌63例及其它腫瘤2 982例，男性7 226例，女性4 259例，平均年齡55.86歲；良性病變組(良性組)3 803例，男性2 248例，女性1 555例，平均年齡55.91歲；正常體檢組(正常組)9 788例，男性6 519例，女性3 269例，平均年齡55.73歲。3組患者性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。

1.2 檢測方法

抽取空腹靜脈血2 ml，分離血清，-20℃保存待測。72 h內(nèi)應(yīng)用HD2001A 生物芯片檢測儀進(jìn)行檢測，試劑盒為浙江湖州數(shù)康生物科技有限公司生產(chǎn)的C12型腫瘤診斷用蛋白芯片試劑盒(簡稱C12)。12 種腫瘤標(biāo)志物包括：糖類抗原199(CA19-9)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原242 (CA242)、糖類抗原125(CA125)、糖類抗原153 (CA153)、甲胎蛋白(AFP)、鐵蛋白( Ferritin)、游離型前列腺特異性抗原(fPSA)、前列腺特異性抗原( PSA)、生長激素( HGH)及絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。正常參考值范圍為:CA125<35 U/mL，CA19-9<35 U/mL，CA153<35 U/mL，CA242<20 U/mL，CEA<5 ng/mL，AFP<20 ng/mL，NSE<13 ng/mL，PSA<5 ng/mL，fPSA<1 ng/mL，HGH<7.5 ng/mL，F(xiàn)erritin<219 ng/mL(女)、322 ng/mL(男)，β-HCG<3 ng/mL，高于正常參考值判定為升高或陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)，年齡采用t檢驗(yàn)，其它資料采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 不同人群NSE陽性檢測率

由表1可見，11485例惡性腫瘤患者中，NSE檢測陽性者103例(0.90%)；3 803例良性病變中，NSE檢測陽性者14例(0.37%)；正常體檢9 788例中，NSE檢測陽性者3例(0.03%)。腫瘤組NSE檢測陽性率顯著高于良性疾病組及正常組 (P<0.05)；良性疾病組NSE檢測陽性率顯著高于正常組(P<0.05)。

表1 各組中NSE檢測陽性率情況(例，%)

2.2 各種腫瘤患者中NSE檢測陽性率情況

由表2可見， NSE檢測陽性率前列腺癌最高(3.20%)，其次為卵巢癌(1.92%)、肺癌(1.15%)、肝癌(0.94%)。各腫瘤患者NSE檢測陽性率比較無顯著差異(P>0.05)。

表2 各種腫瘤中NSE檢測陽性率情況(例，%)

注：其他腫瘤包括皮膚癌、腎癌、頭頸部腫瘤、惡性淋巴瘤、惡性黑色素瘤、胸腺瘤等

2.3 各良性疾病中NSE檢測陽性情況

3803例良性疾病中NSE檢測陽性者14例，其中慢性胃炎2例，急性胃炎、冠心病、腦梗塞、慢性腎炎、腎病綜合征、腎功能不全、肝硬化、膽囊息肉、結(jié)核性心包炎、梗阻性黃疸、不完全性腸梗阻、膀胱乳頭狀瘤各1例，各類良性疾病中NSE檢測陽性率無顯著差異(P>0.05)。

2.4 腫瘤患者中NSE聯(lián)合其它腫瘤標(biāo)志物檢測陽性情況

由表3可見，103例NSE檢測陽性的腫瘤患者中，其他腫瘤標(biāo)志物檢測陽性率最高的是CA125(78.64%)，其次為Ferritin(72.82%),CEA(52.43%)和CA199(44.66%)。

表3 NSE與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測陽性情況(例，%)

3 討論

腫瘤標(biāo)志物是目前早期發(fā)現(xiàn)腫瘤和評估療效的手段之一。多腫瘤芯片通過利用抗原抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理，在固相基質(zhì)上結(jié)合多腫瘤標(biāo)志物抗體，捕捉被檢測者血清中的對應(yīng)腫瘤標(biāo)志物，通過特定的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光信號，實(shí)現(xiàn)對腫瘤標(biāo)志物定量檢測到目的[2]。同時，通過聯(lián)合檢測克服單一腫瘤標(biāo)志物檢測作為診斷手段其靈敏度和特異度的有限性，提高惡性腫瘤的診斷準(zhǔn)確率，降低漏診率[3]，因而在惡性腫瘤的臨床診斷中得到了廣泛應(yīng)用。

神經(jīng)元特異性烯醇化酶 (NSE) 是神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中1種參與糖酵解的酸性蛋白酶,為二聚體的烯醇化酶異構(gòu)酶的1種，是有價值的脫羧基化細(xì)胞系列細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物，主要作用是催化二磷酸甘油變成烯醇式磷酸丙酮，可以反映細(xì)胞更新及凋亡率。正常情況下，NSE主要特異性地存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)中，在起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的腫瘤組織也有異常表達(dá)[4]。

NSE升高最常見于神經(jīng)母細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌 (SCLC) ，在其它腫瘤如甲狀腺髓質(zhì)癌、嗜鉻細(xì)胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等患者的血清NSE也可升高。目前 NSE已作為神經(jīng)系統(tǒng)損傷和 SCLC的標(biāo)志物,被用于腫瘤的鑒別診斷、放化療療效判斷、預(yù)后監(jiān)測等[5]。不同組織類型的肺癌患者的癌組織和血清中NSE 含量按高低排列依次為SCLC、大細(xì)胞癌、鱗癌和腺癌[6]。盧先鋒等[7]統(tǒng)計(jì)分析712篇文獻(xiàn)，共統(tǒng)計(jì)5 2832例肺癌患者血清，NSE靈敏度39.73%。王勇等[8]NSE單項(xiàng)檢測敏感度0～44.78%，聯(lián)合檢測靈敏度50%～89.47%。國內(nèi)外文獻(xiàn)顯示 NSE不僅在 SCLC 中明顯升高,也在一些NSCLC中明顯升高,總陽性率達(dá) 50%左右[9]。小細(xì)胞肺癌是1種神經(jīng)內(nèi)分泌起源的腫瘤，NSE是目前診斷小細(xì)胞未分化肺癌最敏感、最特異的標(biāo)志物，可作為鑒別肺癌病理類型的重要指標(biāo)[10]。FIZAZI動態(tài)觀察135例小細(xì)胞肺癌患者，發(fā)現(xiàn)NSE水平對小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后判斷很有意義[11]。

不同方法的NSE測定有一定差異。放免法測定靈敏度高，特異性強(qiáng)，樣品不需要分離純化，可直接測定[12]。蔡燕燕采用放射免疫法，檢測 374例肺癌患者、161例肺良性病變和 158例正常對照組血清NSE水平,結(jié)果顯示肺癌患者血清NSE水平顯著性高于肺良性疾病患者和正常對照組,小細(xì)胞肺癌血清NSE水平為最高,且NSE水平有隨肺癌分期升高而增高的趨勢[13]。酶聯(lián)免疫吸附ELISA法檢測小細(xì)胞肺癌患者血清神經(jīng)元烯醇化酶 NSE的敏感度為 80%[14]。應(yīng)用液相芯片技術(shù)，定量檢測人血清NSE靈敏度為93.5%，特異度為97%[15]。

本組資料顯示，應(yīng)用C12型腫瘤蛋白芯片檢測NSE，惡性腫瘤患者NSE檢測陽性發(fā)生率明顯高于良性病變患者及正常體檢者，但NSE檢測陽性在各種腫瘤中的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NSE檢測陽性在惡性腫瘤患者中靈敏度低，肺癌NSE靈敏度僅1.15%，其中小細(xì)胞肺癌其陽性率僅1.30%。同時，本中心應(yīng)用C12型腫瘤蛋白芯片，檢測CEA、CA19-9等其他11項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物其陽性率與文獻(xiàn)報道的基本相符合[16,17]。何江、黃竅銘、王玉芳、鄭玲等[18～21]用C12型腫瘤蛋白芯片對惡性腫瘤及肺癌檢測的結(jié)果也顯示NSE檢出陽性率偏低(0～15%)。分析C12型腫瘤蛋白芯片檢測NSE陽性率低的原因，可能包括以下因素：NSE指標(biāo)在血清中很不穩(wěn)定，其活性將會隨時間的延長而迅速下降，檢出率則相應(yīng)降低；聯(lián)合檢測隨著腫瘤標(biāo)志物檢測項(xiàng)目增多單項(xiàng)檢測靈敏度下降；高濃度的鉤狀效應(yīng)導(dǎo)致被檢測的腫瘤指標(biāo)陽性率降低；機(jī)體或組織中一些抗體與腫瘤標(biāo)志物形成免疫復(fù)合物。此外，不排除少數(shù)由于操作和技術(shù)上的失誤引起檢測結(jié)果的偏差。

目前主張?jiān)谝欢ǚ秶鷥?nèi)有選擇地采用多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測來提高診斷靈敏度[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，C12型腫瘤蛋白芯片中NSE陽性率低，這是此腫瘤蛋白芯片系統(tǒng)存在的缺陷，但是，我們可以對腫瘤標(biāo)志物的組合考慮其檢測方法的可行性及經(jīng)濟(jì)性，對某一惡性腫瘤優(yōu)選出3～5項(xiàng)較敏感的標(biāo)志物以獲得滿意的靈敏度和特異度。根據(jù)不同腫瘤特性分別設(shè)計(jì)針對不同腫瘤的特異性較高的腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片，如設(shè)計(jì)專門針對肺癌的CEA、CA153、NSE、CYFRA21-1、SCC、CA125等聯(lián)合檢測芯片，有助于肺癌及其組織學(xué)分型的早期診斷[23]。通過結(jié)合患者的臨床及影像資料，選擇針對不同腫瘤的特異性較高的腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片進(jìn)行檢測，以期更能實(shí)現(xiàn)協(xié)助診斷、療效評價、預(yù)后監(jiān)測等重要意義。

雖然C12型腫瘤診斷用蛋白芯片中NSE陽性率較低，但NSE單項(xiàng)或聯(lián)合其它腫瘤標(biāo)志物仍可用于多種腫瘤的篩查和臨床診斷。

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