王衛(wèi)鋒 葛 莉 李 芳 李 凡 陜西省中醫(yī)藥研究院（西安 710003）

正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選婦寧舒顆粒的提取工藝

王衛(wèi)鋒 葛 莉 李 芳 李 凡 陜西省中醫(yī)藥研究院（西安 710003）

目的：優(yōu)選中藥婦寧舒顆粒的水提取工藝。方法：采用L9（34））正交試驗(yàn)，以梔子苷為指標(biāo)，再輔助以干膏量，以煎煮時(shí)間、加水量和煎煮次數(shù)為考察因素，篩選最佳的水提取工藝。結(jié)果：最佳的提取工藝為加水煎煮3次，第一次加10倍量，煎煮1.5h，第二、三次分別加8倍量水，各煎煮1h，所得梔子苷和干膏量均較高。結(jié)論：優(yōu)選得到的提取工藝合理，操作可行，質(zhì)量可控。

婦寧舒顆粒由梔子、黃芪、金銀花等7味中藥組成，主要用于婦科炎癥的治療。其中梔子、黃芪、金銀花、土茯苓四味藥材以水提取入藥。為了有效控制提取工藝，本文采取正交實(shí)驗(yàn)法，對(duì)婦寧舒顆粒水提取工藝采用高效液相色譜法測(cè)定梔子苷的含量，結(jié)合出膏量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)，確定最佳提取工藝。

1 儀器與試藥1.1 試藥 梔子、黃芪、金銀花、土茯苓等中藥均購(gòu)自陜西省藥材公司，經(jīng)檢驗(yàn)均符合《中國(guó)藥典》2010年版一部的規(guī)定［1］；梔子苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110749-200714），所用化學(xué)試劑為分析純（天津富宇化學(xué)試劑廠）、液相用試劑為色譜純（美國(guó)Fisher scintific）、水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 儀器 高效液相色譜儀（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二極管陣列檢測(cè)器，活德國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司；Millennium 32色譜工作站）、C 色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超聲波清洗機(jī)（H66025T）、TGL-16G離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）、HCTP11B10托盤藥物天平（北京市宣武區(qū)天平廠）、BP211D型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯天平有限公司）、四孔水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果2.1 水提工藝正交設(shè)計(jì) 為了確定最佳的提取參數(shù)，擬采用正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝中所涉及的條件進(jìn)行優(yōu)選，通常情況下：提取次數(shù)、煎煮時(shí)間、加水量對(duì)提取結(jié)果影響較大，因此，以提取次數(shù)、煎煮時(shí)間、加水量作為影響因素，各選擇三個(gè)水平，以L9（34）表安排試驗(yàn)，篩選最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。

表1 煎煮工藝條件正交試驗(yàn)因素水平表

2.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定 梔子為方中主藥，梔子苷為其主要有效成分之一，且其含量測(cè)定有成熟方法，可用HPLC法測(cè)定提取物中梔子苷的含量，因此選擇以梔子苷的含量并結(jié)合出膏量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.3 樣品溶液的制備 按處方比例量稱取水提工藝部分的藥材共340g，共9份，按正交實(shí)驗(yàn)表下設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件以加熱回流方式進(jìn)行提取，合并提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。

2.4 收膏率測(cè)定方法 取各正交試驗(yàn)號(hào)濃縮液100mL，于干燥蒸發(fā)皿中水浴蒸干，80℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，稱重，計(jì)算。

2.5 梔子苷的含量測(cè)定［2－5］2.5.1 色譜條件：色譜柱：C18色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（15∶85）；流速1.0mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)238nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含38.4ug的溶液，搖勻，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備：分別精密吸取各提取液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇約30mL，超聲5min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.5.4 測(cè)定法：分別吸取對(duì)照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入色譜儀，測(cè)定并計(jì)算。

2.6 結(jié)果及分析 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3、表4。

表2 水提L9（34）正交試驗(yàn)表及結(jié)果

表3 梔子苷含量方差分析表

表4 干膏量方差分析表

試驗(yàn)結(jié)果表明，以梔子苷為指標(biāo)，表2中極差值大小顯示，各因素作用主次為提取次數(shù)對(duì)梔子苷和干膏的提取量影響較大，由正交試驗(yàn)結(jié)果以及方差分析結(jié)果表現(xiàn)出來的最佳工藝為A3B2C1。即：加10、8、8倍量水煎煮提取3次，第一次1.5h，第二、三次各1.0h。

2.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方量稱取各藥材共1020g，共3份，按照所選提取條件試驗(yàn)，并測(cè)定梔子苷含量和出膏率。結(jié)果見表5。

3次驗(yàn)證試驗(yàn)表明，檢測(cè)指標(biāo)接近或者高于正交表中最優(yōu)值，說明優(yōu)選的提取條件基本可行。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論3.1 在對(duì)水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)選時(shí) 我們同時(shí)考察了梔子苷的含量和出膏率，這比采取單一指標(biāo)對(duì)提取工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)更加科學(xué)和合理。

3.2 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的最佳工藝 經(jīng)三批中試放大生產(chǎn) 結(jié)果產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：3.

［2］李 巖.高效液相色譜法測(cè)定腎炎靈片中梔子苷含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2011，9（22）：224-225.

［3］張大軍，王兆華.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)腎寧片中梔子苷含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（12）：88-89.

［4］鄧義娟.高效液相色譜法測(cè)定安宮靈顆粒中梔子苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2011，20（16）：39-40.

［5］陳偉康，方建和，丁銀平.RP-HPLC法測(cè)定清肝利膽膠囊中梔子苷 ［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（7）：71-73.

婦寧舒顆粒／化學(xué) 梔子／分析 含量測(cè)定

R284

A

1000 -7369（2012）04-0484-03

（收稿2011-11-03；修回2011-12-03）