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        乳巖寧湯急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

        2012-11-22 01:08:50殷東風(fēng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院沈陽110032
        陜西中醫(yī) 2012年4期
        關(guān)鍵詞:舌草莪術(shù)藥量

        潘 琳 殷東風(fēng) 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院(沈陽110032)

        乳巖寧湯是在臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制而成,用于治療乳腺癌,并具有顯著療效,但未經(jīng)毒理實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)。為給臨床用藥提供安全的實(shí)驗(yàn)依據(jù)下。我們對(duì)其進(jìn)行了安全毒理學(xué)評(píng)價(jià),為臨床用藥提供可靠的科學(xué)數(shù)據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 乳巖寧湯由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、莪術(shù)15g,生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、白花蛇舌草各15g組成。

        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠50只,雌雄各半,4~6周齡,體重20±2g,一次性購(gòu)自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,分籠飼養(yǎng),顆粒飼料喂養(yǎng),自由飲水。

        1.3 主要器材 灌胃器、燒杯、量筒、天平。

        2 方 法 2.1 乳巖寧方及其制備 由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、甘草、半枝蓮、莪術(shù)、龍骨、牡蠣、白花蛇舌草等14味中藥組成,一次性購(gòu)于北京同仁堂藥房,藥液煎煮按照中藥常規(guī)煎法進(jìn)行,濃縮至終濃度為2.7g·mL-1,無菌實(shí)驗(yàn)陰性,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        2.2 急性毒性實(shí)驗(yàn) 2.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn):取昆明種小鼠10只,雌雄各半,體重20±2g,給藥前禁食12h,以乳巖寧含生藥3.57g/mL濃度按0.4mL/10g體重灌胃,給藥2次,上午、下午各1次,中間間隔8h,給藥后觀察小鼠一般情況。見小鼠活動(dòng)自如,進(jìn)食、飲水正常,大便呈濕潤(rùn)顆粒狀,10只小鼠72h內(nèi)無一只死亡,也無明顯中毒反應(yīng),提示本品難以測(cè)出LD50,故選擇最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

        2.2.2 正式實(shí)驗(yàn):最大耐受量(MTD)測(cè)定:取昆明種小鼠40只,雌雄各半,體重20±2g,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、乳巖寧低、中、高劑量4組。4組小鼠在灌胃給藥前均先禁食12h,均按0.4mL/10g體重灌胃,給藥2次,上午、下午各1次,中間間隔8h,最后一次給藥后2h結(jié)束禁食??瞻讓?duì)照組予等體積生理鹽水,乳巖寧低、中、高劑量組分別按照142.8g/kg、285.3g/kg、428.2g/kg灌胃,連續(xù)觀察1周。

        2.3 觀察指標(biāo) 2.3.1 每天觀察并記錄各組小鼠的體重、皮膚毛發(fā)、眼和粘膜的變化、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等及其中毒和死亡情況。

        2.3.2 于用藥后24、48、72h、第7天分別檢測(cè)小鼠血常規(guī)、肝腎功。

        2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),脫頸處死小鼠,取心、肝、脾、肺、腎標(biāo)本固定、石蠟包埋、切片、HE染色,光鏡觀察藥物對(duì)上述各臟器的影響。

        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0軟件,單因素方差分析(ANOVA),數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,以P<0.05為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

        3 結(jié) 果 3.1 給藥后實(shí)驗(yàn)組小鼠飲食正常 體重增加,活動(dòng)自如,皮毛光滑,大小便正常,無異常分泌物,無任何不良反應(yīng),至實(shí)驗(yàn)結(jié)束無小鼠死亡。實(shí)驗(yàn)前各組小鼠體重比較無明顯差異,實(shí)驗(yàn)后各組體重比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),如表1。

        3.2 血常規(guī)及肝腎功的變化情況 血液指標(biāo)見表2。

        3.3 大體病理形態(tài)學(xué)觀察 經(jīng)大體解剖和病理檢查,主要臟器無異常。

        表1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重情況

        討 論 乳巖寧湯是由《傷寒論》的柴胡加龍骨牡蠣湯加減而來,主要由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、莪術(shù)、白花蛇舌草等14味中藥組成,其以小柴胡湯[1]為主方和解少陽、調(diào)暢氣機(jī),加入龍骨、牡蠣鎮(zhèn)定安神,輔以山慈菇、莪術(shù)、白花蛇舌草、浙貝母等解毒化瘀,軟堅(jiān)散結(jié)。研究表明方中人參的有效活性成分(人參皂苷Rg3)、黃芩甙、莪術(shù)油等[2-3]均有抑制腫瘤細(xì)胞增殖與浸潤(rùn)、抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡等多重作用。乳巖寧湯是臨床治療乳腺癌的經(jīng)驗(yàn)方,臨床上未發(fā)現(xiàn)任何明顯毒性反應(yīng),故進(jìn)行本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以更好的指導(dǎo)臨床。因其毒性較小,在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)給昆明種小鼠灌胃無法測(cè)出其半數(shù)致死量(LD50),故改做小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

        乳巖寧湯臨床常用生藥口服劑量為2.77g/(kg·d),(按照成人體重60kg計(jì)算),受藥物濃度和給藥體積的影響,本實(shí)驗(yàn)設(shè)定小鼠的最大給藥量為428.2g生藥/(kg·d),即可供灌胃的最大濃度3.57g/mL,小鼠灌胃可承受的最大體積(0.8mL/20g體重),1d2次灌胃給藥,根據(jù)公式計(jì)算約為臨床患者擬用劑量的154.6倍(>100倍)。據(jù)文獻(xiàn)[4],按體重計(jì)算,小鼠ld最大給藥量相當(dāng)于成人臨床日用量的100倍以上則較為安全,可以提供臨床研究試用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,給予小鼠最大給藥量后未見任何中毒癥狀及死亡現(xiàn)象,給藥后實(shí)驗(yàn)組小鼠飲食正常,體重增加,活動(dòng)自如,皮毛光滑,大小便正常,說明該藥無明顯毒性,臨床應(yīng)用是安全可靠的。

        表2 用藥前后各實(shí)驗(yàn)組小鼠血常規(guī)及肝腎功的情況

        [1]邢向榮,殷東風(fēng).運(yùn)用柴胡劑從肝論治提高惡性腫瘤患者生存質(zhì)量的臨床分析[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2007,21(1):58-59.

        [2]孫 燕,林洪生,朱允中等.長(zhǎng)春瑞濱合并順鉑(NP)加參一膠囊或安慰劑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的多中心雙盲隨機(jī)臨床研究報(bào)告[J].中國(guó)肺癌雜志,2006,9(3):254-258.

        [3]林小聰,劉新光陳小文等.黃芩甙對(duì)重組人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其動(dòng)力學(xué)分析[J].癌癥,2004,23(8):874-878.

        [4]謝秀瓊.中藥劑制劑開發(fā)與應(yīng)用[M].第二版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:540.

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