王建輝

湖南省婦幼保健院檢驗科(湖南 長沙 410008)

接骨膏是根據(jù)長江三峽地區(qū)民間中醫(yī)鄭賢群先生驗方篩選整理而成[1]，主要成分為獨正桿、刺老苞、刺五加三味，有消腫止痛、續(xù)經(jīng)、接骨、生肌、抗炎、活絡(luò)、正骨等功效，大量臨床觀察表明，該中藥適用于各類跌打損傷、關(guān)節(jié)腫痛、尤其是對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者有顯著療效，同時該膏劑使用方便，無毒副作用。現(xiàn)階段接骨膏已廣泛用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療，但是對其治療效果及作用機制還有待于進(jìn)一步研究。為了探討接骨膏對風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療效果及作用機理，本研究應(yīng)用接骨膏治療弗氏完全佐劑誘導(dǎo)建立的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠，觀察其臨床療效及其作用機制。

1 材料和方法

1.1實驗動物及分組健康Wirst大鼠(由湖南省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供)30只，體重200～220 g，隨機分為3組，每組10只，即關(guān)節(jié)炎模型組、接骨膏(5 g/kg·bw)實驗組(以下簡稱實驗組)、雷公藤多苷片(6 g/kg·bw)治療組(以下簡稱治療組)。

1.2藥品試劑接骨膏制備：分別取獨正桿、刺老苞、刺五加根皮曬干，搗碎或切成小塊，按獨正桿∶刺五加∶刺老苞=2∶1∶1的比例混合加水煎煮，采用膏滋法制備成煎膏劑(每毫升含生藥1 g)，成品為棕色稠膏，味甜微苦；雷公藤片由黃石市制藥廠生產(chǎn)(批號:040318)，雷公藤多苷片臨用時調(diào)制(每片含提取物10 mg)；弗氏完全佐劑(SIGMA產(chǎn)品)、IL-8試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放射免疫所提供；IL-10試劑盒由深圳晶美生物工程公司提供。

1.3弗氏完全佐劑大鼠模型制備與檢測方法實驗大鼠均在左后足跖皮內(nèi)注射費氏完全佐劑(0.2 ml/只)致炎，于致炎第8 d灌胃給藥;實驗組給藥劑量5 g/kg·bw，同時關(guān)節(jié)炎局部外敷接骨膏，關(guān)節(jié)炎模型組給同等容積生理鹽水；治療組給藥劑量6 g/kg·bw，每天給藥一次，共21 d。關(guān)節(jié)炎指數(shù)[2]評價(Arthritisindex AI)：記錄實驗大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度分5級，0級：無紅腫；1級：足小趾關(guān)節(jié)紅腫；2級：趾關(guān)節(jié)、足跖部均紅腫；3級：踝關(guān)節(jié)以下均紅腫；4級：包括踝關(guān)節(jié)，全部紅腫。初次免疫后7 d起，每7 d評分1次。用排水法測足爪體積，以足爪腫脹抑制率觀察接骨膏對病變的抑制作用。采用放免法檢測病變小鼠外周血IL-8、IL-10的含量。取小鼠繼發(fā)病變左側(cè)踝關(guān)節(jié)，病理學(xué)光鏡觀察關(guān)節(jié)滑膜組織、炎性細(xì)胞浸潤、軟骨破壞及骨侵蝕情況。

2 結(jié)果

2.1關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較分別記錄實驗組、治療組大鼠給藥前(免疫后7 d)、給藥7 d、14 d、21 d的關(guān)節(jié)炎指數(shù)及同期模型組大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)(見表1)，顯示治療前模型組、實驗組、治療組關(guān)節(jié)炎指數(shù)無明顯區(qū)別(P>0.05)。給藥后不同時期，實驗組及治療組關(guān)節(jié)炎指數(shù)均明顯低于模型組，有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。實驗組和治療組給藥后與給藥前比較關(guān)節(jié)炎指數(shù)均有顯著性差異(P<0.01)，實驗組與治療組之間無顯著性差異(P>0.05)。

2.2關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察模型組：踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯病變，關(guān)節(jié)軟骨面毛糙凹凸不平、缺損，關(guān)節(jié)腔變窄，且滑膜組織不同程度增生，滑膜內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，表面滑膜組織可見灶性壞死，有的滑膜絨毛形成突向關(guān)節(jié)腔內(nèi)；實驗組及治療組：病變關(guān)節(jié)部分可見到不同程度的輕、中度慢性炎癥,且軟骨表面欠滑,未見明顯軟骨破壞及骨侵蝕，滑膜細(xì)胞僅輕度增生,且排列整齊、細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,見少量炎性細(xì)胞浸潤。

表1 給藥前后各組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較

與同期模型組比較ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；與同組給藥前比較*P<0.01

2.3對大鼠繼發(fā)性炎癥反應(yīng)的影響給藥后不同時間各組大鼠足腫脹度比較可見(表2),實驗組和治療組在給藥7 d后與模型組比較無明顯差異(P>0.05),但在給藥14 d和21 d后大鼠腫脹度與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。實驗組和治療組在給藥后3個不同時期與給藥前比較均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),實驗組和治療組無差異(P>0.05)。

表2 不同時間各組大鼠患側(cè)足腫脹度比較

與同期模型組比較ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；與同組給藥前比較*P<0.05,**P<0.01

2.4對大鼠外周血細(xì)胞因子的影響經(jīng)灌胃用藥3周后，實驗組和治療組大鼠血清中IL-8水平較模型組和給藥前明顯降低(P<0.05，P<0.01)，而IL-10水平較模型組和給藥前明顯升高(P<0.01)，且實驗組和治療組無顯著差異(見表3)。

3 討論

RA是一種以慢性炎癥為特征的免疫性疾病，是常見的關(guān)節(jié)病變[3]。主要侵犯全身各處關(guān)節(jié)，呈多發(fā)性和對稱性慢性增生性滑膜炎，由此引起關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)囊的破壞，最后導(dǎo)致關(guān)節(jié)強直畸形。證屬中醫(yī)“痹癥”。其病因營為衛(wèi)失調(diào) ，腠理空疏 ，正氣虛弱,風(fēng)寒濕邪侵入經(jīng)絡(luò)，引起氣血不暢，致使筋骨關(guān)節(jié)腫脹疼痛，屈伸不利，久之致腎虛骨枯等病癥。目前，RA治療目的主要以緩解癥狀，控制病情進(jìn)展，預(yù)防關(guān)節(jié)畸形為主。

表3 各組大鼠外周血IL-8、IL-10的含量

與同期模型組比較ΔP<0.01；*P<0.05,與同組給藥前比較**P<0.01

現(xiàn)代藥理證明，中草藥接骨膏方中的主藥能有效改善微循環(huán)，消腫止痛，擴張血管，降低毛細(xì)血管通透性，減少炎性滲出，促進(jìn)炎性滲出吸收；而應(yīng)用于皮下則有活血散瘀消腫止痛之功效。我們采用內(nèi)服加外用的模式用藥后發(fā)現(xiàn)，實驗組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯降低,足趾腫脹程度也大大減輕,并且能有效控制大鼠炎癥細(xì)胞浸潤、關(guān)節(jié)狹窄、軟骨和骨的侵蝕破壞，與模型組及治療前比較均有顯著性差異，達(dá)到與雷公藤片相似的治療效果。

細(xì)胞因子系維持免疫細(xì)胞功能協(xié)調(diào)運轉(zhuǎn)，相互聯(lián)絡(luò)的“信使”，其促炎因子與抗炎因子間的失衡[4]是導(dǎo)致肌體組織免疫損傷和“炎癥瀑布”的主要因素。IL-8是免疫和炎癥反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，可以在體內(nèi)趨化中性粒細(xì)胞并改變其受體[5],誘導(dǎo)各種炎癥性疾病[6，7]的發(fā)生,在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中也起重要作用，同時IL-8的表達(dá)與其活性調(diào)控有利于炎癥性疾病的治療。IL-10由CD4+T細(xì)胞等分泌，是具有潛在抗炎作用的細(xì)胞因子，它可以抑制和終止炎癥反應(yīng)[8]。本實驗在應(yīng)用接骨膏后可見， IL-8活性的釋放明顯被抑制，而IL-10的水平顯著升高，表明病變大鼠體內(nèi)炎癥受到明顯抑制。

綜上所述，中草藥接骨膏對RA大鼠關(guān)節(jié)的原發(fā)性和繼發(fā)性損害均有明顯的抑制作用，表明本方具有良好的益氣活血、通絡(luò)止痛、祛風(fēng)除濕和抗炎效應(yīng)，這與該方臨床上良好的抗炎消腫和鎮(zhèn)痛作用相吻合，值得進(jìn)一步深入研究。

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