劉旺華， 曾 飛， 趙海霞

(四川省南充衛(wèi)生學(xué)校， 四川 南充 637000)

隨意皮瓣是修復(fù)創(chuàng)面、重建功能、改善外形常用的皮瓣[1]。在整形與重建外科領(lǐng)域中，往往需要利用皮瓣來修復(fù)組織的缺損；但隨意皮瓣的成活有嚴(yán)格的長(zhǎng)寬比例限制，一旦超出該比例，臨床上皮瓣遠(yuǎn)端的缺血壞死屢見不鮮，給患者身心造成了極大的痛苦，因此尋找有效的方法預(yù)防術(shù)后皮瓣的缺血壞死具有重要的臨床意義。

桃紅四物湯在預(yù)防及治療皮瓣壞死，促進(jìn)其存活的臨床研究中取得了較好的效果。本次實(shí)驗(yàn)用桃紅四物湯旨在觀察其促進(jìn)大鼠背部隨意皮瓣存活的作用，并探討其對(duì)新生血管的影響及促進(jìn)皮瓣存活的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD雄性大鼠40只，體重(220±20)g，由川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK(川)2008-18。

1.2 藥物 桃紅四物湯由桃仁、紅花、當(dāng)歸、白芍、熟地、川芎6味中藥組成，藥物購(gòu)自北京同仁堂成都分店。以上藥物加水浸泡1 h，常規(guī)煎煮、過濾及水浴蒸發(fā)制成1 mL含1 g生藥的水煎液(濃度100%)，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑 CD34試劑盒，批號(hào)：BA3414購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；生物素化山羊抗兔IgG(H+L)，批號(hào)：ZB-2050，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；辣根酶標(biāo)記鏈親和素(HRP/A-V)，批號(hào)：ZB-2404，購(gòu)自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司；DAB顯色劑批號(hào)：DAB-0031，購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組造模 將實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為對(duì)照組20只，治療組20只。10%的水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，大鼠背部以8%硫化鈉脫毛，溫水洗凈。設(shè)計(jì)2 cm×8 cm大小隨意皮瓣，蒂位于雙側(cè)髂嵴連線上。切開皮膚及皮下筋膜淺層掀起皮瓣至肉膜深面，結(jié)扎基底部活躍出血點(diǎn)。3-0絲線將皮瓣原位縫合，切口涂紅霉素軟膏。所有手術(shù)均由同一人完成，術(shù)后大鼠分籠喂養(yǎng)。

2.2 給藥方法 造模的同時(shí)開始給藥，每日1次。治療組以桃紅四物湯浸膏0.8 mL/100 g灌胃，對(duì)照組以等量生理鹽水灌胃，共7 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 皮瓣存活率 皮瓣壞死以皮膚顏色變黑、組織回縮、彈性差、質(zhì)地變硬、切割組織不出血為標(biāo)準(zhǔn)。術(shù)后第7 d，乙醚麻醉大鼠后，仰臥位置掃描儀上，掃描皮瓣，并以Image-Pro Plus 6.0軟件分析皮瓣壞死區(qū)域，利用公式(皮瓣存活率=皮瓣存活表面積/皮瓣總表面積×100%)，計(jì)算各組皮瓣存活率。

2.3.2 組織學(xué)觀察 沿皮瓣中軸線的近、中、遠(yuǎn)三段(距離蒂部2、4、6 cm 部位)中心切取大小為1.0 cm x 1.0 cm的全層皮瓣組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色，光鏡下觀察病理學(xué)結(jié)果。

2.3.3 皮瓣微血管密度(MVD)計(jì)數(shù) 采用CD34免疫組織化學(xué)染色。凡與周圍結(jié)締組織成分分離、經(jīng)CD34抗體染成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇被認(rèn)為是1個(gè)微血管。每張切片在中央?yún)^(qū)隨機(jī)選取8個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)所有微血管，然后求其平均數(shù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 皮瓣成活率測(cè)定 術(shù)后第7 d，與空白對(duì)照組比較，桃紅四物湯組皮瓣的平均成活率明顯增多(P<0.05)。見表1。

表1 2組皮瓣平均存活率

3.2 組織學(xué)觀察 所有皮瓣壞死區(qū)的組織學(xué)形態(tài)相似，均表現(xiàn)為急性炎癥、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。桃紅四物湯組皮下成纖維細(xì)胞增生明顯，肉芽組織增生顯著，皮下組織水腫不明顯，血管擴(kuò)張；空白對(duì)照組皮下成纖維細(xì)胞，肉芽組織，毛細(xì)血管增生均明顯低于桃紅四物湯組。

3.3 微血管密度檢測(cè) 桃紅四物湯組經(jīng)CD34抗體染色陽性微血管數(shù)中段明顯多于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組皮瓣單位面積平均毛細(xì)血管計(jì)數(shù) ±s ,個(gè)/mm2)

4 討論

近年來隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，對(duì)皮瓣存活的發(fā)生機(jī)制的研究不斷深入，其重在改善自身血液循環(huán)狀態(tài)，促進(jìn)缺血皮瓣血管的新生。因此，在促進(jìn)皮瓣存活的治療過程中，如何讓缺血皮瓣微循環(huán)重建，成為目前治療缺血皮瓣存活的重要方面。

近代中醫(yī)研究皮瓣，多認(rèn)為血虛夾瘀。血瘀是本病主要的病因，治療上應(yīng)以養(yǎng)血以扶正，活血以化瘀祛邪。桃紅四物湯養(yǎng)血活血化瘀止痛，養(yǎng)血不滯血，化瘀不傷正，補(bǔ)中有行，破中有收，方中熟地、白芍乃血中血藥，當(dāng)歸、川芎是血中氣藥，陰陽動(dòng)靜相配，故能補(bǔ)血，又能和血，加入活血祛瘀的桃仁、紅花為主藥，突出了活血化瘀的作用。

本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示：桃紅四物湯能增加超長(zhǎng)隨意皮瓣的成活面積，增加皮瓣毛細(xì)血管密度，可能誘導(dǎo)新生血管的生成，從而促進(jìn)缺血皮瓣的成活率及生存質(zhì)量，提示其促進(jìn)缺血皮瓣成活的作用機(jī)制可能是誘導(dǎo)新生血管的生成，促進(jìn)缺血皮瓣的成活。

[1]肖海濤，李永林，王立夫，等.EGF對(duì)大鼠背部隨意皮瓣存活的影響[J].江蘇醫(yī)藥，2006，32(4)：349～351.