李漢熙，楊香，張民鋒，施溯筠＊

（1.延邊大學(xué)長白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 延吉133002；2.延邊大學(xué)工學(xué)院 計(jì)算機(jī)科學(xué)與技術(shù)系，吉林 延吉133002）

鈴蘭抗氧化性研究

李漢熙1，楊香2，張民鋒1，施溯筠1＊

（1.延邊大學(xué)長白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 延吉133002；2.延邊大學(xué)工學(xué)院 計(jì)算機(jī)科學(xué)與技術(shù)系，吉林 延吉133002）

以DPPH·清除能力作為考察指標(biāo)，通過正交實(shí)驗(yàn)確定鈴蘭抗氧化物質(zhì)的最佳提取方案，并測(cè)定鈴蘭提取物清除羥自由基（·OH）和過氧化氫（H2O2）的能力及還原力.結(jié)果表明：提取鈴蘭抗氧化物質(zhì)的最優(yōu)方案是用蒸餾水在75℃下提取30 min，其對(duì)DPPH·的清除率達(dá)96.1%，且對(duì)DPPH·的清除能力隨濃度的增加而增強(qiáng)；鈴蘭水提取物對(duì)·OH和H2O2表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除能力及還原力，這說明鈴蘭水提物具有較好的抗氧化性.

鈴蘭；水提液；抗氧化性

鈴蘭（ConvallariakeiskeiMiq.）為百合科多年生草本植物，別名香水草、蘆藜花、鈴鐺花、草玉鈴、君影草、鹿鈴草，主要產(chǎn)于我國吉林、黑龍江、河北、山東、河南、山西、陜西等省，尤以東北盛產(chǎn)，是一種珍貴的藥用植物［1］.鈴蘭含有豐富的具有特殊分子結(jié)構(gòu)、功能復(fù)雜多樣的生物活性物質(zhì)，可治療心力衰竭、心房纖顫以及由高血壓和腎炎引起的左心衰竭等癥［2］.正常濃度的自由基具有調(diào)節(jié)細(xì)胞間的信號(hào)傳遞和細(xì)胞生長、抑制病毒和細(xì)菌的作用，若機(jī)體自由基產(chǎn)生過多或清除過慢時(shí)，便會(huì)通過攻擊生命大分子物質(zhì)及各種細(xì)胞器而造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平及組織水平的各種損傷，進(jìn)而加速機(jī)體的衰老進(jìn)程并誘發(fā)包括腫瘤在內(nèi)的各種疾?。?］.近年來，自由基的產(chǎn)生和清除一直是生物、醫(yī)藥、環(huán)境和農(nóng)學(xué)研究的熱點(diǎn)，許多高效、安全、天然的抗氧化劑不斷被發(fā)現(xiàn)［4］，但有

關(guān)鈴蘭抗氧化的研究未見報(bào)道.本實(shí)驗(yàn)選擇吉林省長白山產(chǎn)鈴蘭為研究材料，以DPPH·清除率為篩選指標(biāo)，通過對(duì)提取溶劑、提取溫度和提取時(shí)間等因素進(jìn)行優(yōu)化篩選，確定出鈴蘭提取液的最佳提取方案，并進(jìn)一步測(cè)定了鈴蘭提取液的羥自由基（·OH）和過氧化氫（H2O2）的清除率及其還原力，以期綜合探討鈴蘭的抗氧化能力.

1 材料與儀器

鈴蘭于2010－06－05—2010－06－15采自吉林省汪清縣天橋嶺.鈴蘭全草自然陰干，粉碎，過60目篩，備用.1，1－二苯基－2－苦肼基（DPPH）、鄰二氮菲等購自Sigma公司.

儀器有：U－1900紫外分光光度計(jì)（Hitachi High－Technologies Corporation，Japan）；HH－W恒溫水浴箱（金壇市恒豐儀器廠）；FA604A電子天平（上海精天電子儀器有限公司）.

2 測(cè)定方法

2.1 鈴蘭抗氧化物質(zhì)的提取

通過正交實(shí)驗(yàn)［5］考察提取溶劑、提取溫度和提取時(shí)間等3個(gè)試驗(yàn)因素對(duì)鈴蘭抗氧化物質(zhì)提取的影響（表1）.每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，以10 mg／mL的鈴蘭水提液對(duì)DPPH·的清除率作為指標(biāo)，選用L9（33）正交試驗(yàn)表優(yōu)選鈴蘭抗氧化物質(zhì)的提取條件（表2）.

2.2 DPPH·清除率的測(cè)定

將0.1 m L的樣品和2.9 m L的62.5μmol／L DPPH－甲醇溶液混合，空白管以0.1 m L的甲醇代替樣液，對(duì)照管為0.1 m L上述樣液加2.9 m L甲醇；渦漩，室溫靜置20 min，于517 nm處分別測(cè)定吸光值［6］.樣品對(duì)DPPH·的清除率（%）＝［1－（A－Ab）／A0］×100%，其中A、Ab和A0分別為樣品管、對(duì)照管及空白管測(cè)定的吸光值.

2.3 ·OH清除率的測(cè)定

采用鄰二氮菲－Fe氧化法［7］進(jìn)行測(cè)定.

2.4 H2 O2清除率的測(cè)定

參照鄭超楠等的方法［8］進(jìn)行測(cè)定.

2.5 還原力的測(cè)定

參照Oyaizu的方法［9］進(jìn)行測(cè)定.

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 鈴蘭抗氧化物質(zhì)的提取

DPPH·的清除率是評(píng)價(jià)物質(zhì)抗氧化能力的指標(biāo)之一.從表2直觀分析可知：得A1＞A2＞A3、B1＞B2＞B3、C3＞C2＞C1；在10 mg／m L的濃度和A1B1C3條件下，鈴蘭提取液的DPPH·清除率最高，達(dá)96.1%，即用蒸餾水在75℃提取30 min為鈴蘭抗氧化物質(zhì)提取的最佳提取條件.從表2還可看出，各因素對(duì)鈴蘭抗氧化物質(zhì)提取的影響依次為A＞C＞B，即提取溶劑＞提取溫度＞提取時(shí)間.

表1 鈴蘭抗氧化物質(zhì)的提取因素水平表

表2 鈴蘭抗氧化物質(zhì)的提取L9（33）正交試驗(yàn)表

3.2 鈴蘭水提物對(duì)DPPH·的清除作用

以上述方法制備不同濃度的鈴蘭水提物，測(cè)定其對(duì)DPPH·的清除能力.與Vc比較顯示：鈴蘭也具有明顯地清除DPPH·的能力（圖1），并且隨著鈴蘭水提物濃度的增加，其對(duì)DPPH·的清除率逐漸上升；其濃度為6 mg／m L時(shí)，清除DPPH·的能力與Vc接近，這表明鈴蘭水提物是一種較好的DPPH·清除劑.

圖1 鈴蘭水提物對(duì)DPPH·的清除作用

3.3 鈴蘭水提物對(duì)·OH的清除作用

對(duì)上述方法制備的不同濃度的鈴蘭水提物進(jìn)行·OH清除能力的測(cè)定.圖2顯示：鈴蘭水提物具有明顯地清除·OH的能力，并且隨著鈴蘭水提物濃度的增加，其對(duì)·OH的清除率逐漸上升；其濃度為4 mg／mL時(shí)，清除·OH的能力已與Vc接近，這表明鈴蘭水提物是一種較好的·OH清除劑.

圖2 鈴蘭水提物對(duì)·OH的清除作用

3.4 鈴蘭水提物對(duì)H2 O2的清除作用

對(duì)上述方法制備的不同濃度的鈴蘭水提物進(jìn)行H2O2清除能力的測(cè)定.圖3顯示：鈴蘭水提物具有較好地清除H2O2的能力，并且隨著鈴蘭水提物濃度的增加，其對(duì)H2O2的清除率逐漸上升；其濃度為1 mg／mL時(shí)，對(duì)H2O2的清除率（79.23%）接近于Vc的水平.

圖3 鈴蘭水提物對(duì)H 2 O2的清除作用

3.5 鈴蘭水提物的還原力

對(duì)上述方法制備的不同濃度的鈴蘭水提物進(jìn)行還原力的測(cè)定.圖4顯示：鈴蘭水提物具有較強(qiáng)的還原力，并且隨著鈴蘭水提物濃度的增加，反應(yīng)液的A700值逐漸上升；其濃度為5 mg／m L時(shí)，其還原力的A值已與Vc的A值接近.

圖4 鈴蘭水提物的還原力

4 結(jié)論

本研究表明：鈴蘭水提物對(duì)·OH和H2O2表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除能力及還原力，說明鈴蘭水提液具有很好的抗氧化性；鈴蘭抗氧化物質(zhì)的最佳提取條件是用蒸餾水在75℃下提取30 min，其對(duì)DPPH·的清除率達(dá)96.1%，且對(duì)DPPH·的清除能力隨濃度的增加而增強(qiáng).

［1］孫啟時(shí)，王維寧，張澤軍.藥用植物鈴蘭的研究［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，12（3）：178－181.

［2］馬成亮.鈴蘭的栽培及利用價(jià)值［J］.特種經(jīng)濟(jì)植物，2002，25（3）：25.

［3］張全斌，于鵬展，周革非，等.海帶褐藻多糖硫酸酯的抗氧化活性研究［J］.中草藥，2003，34（9）：824－826.

［4］鄭榮梁，黃中洋.自由基生物學(xué)［M］.3版.北京：高等教育出版社，2007：52－56.

［5］薛冰，金在久，施溯筠.林蛙皮的抗氧化性研究［J］.華西藥學(xué)雜志，2010，25（4）：431－433.

［6］Kim D，Lee K W，Lee H J，et al.Vitamin C equivalent antioxidant capacity（VCEAC）of phenolic phytochemicals［J］.J Agric Food Chem，2002，50（13）：120－125.

［7］范冠字，謝虹，吳志剛.水溶性幾丁聚糖對(duì)羥自由基的清除作用［J］.中國公共衛(wèi)生，2006，22（6）：676－677.

［8］鄭超楠，金在久，施溯筠.林蛙腦蛋白酶解物抗氧化性研究［J］.延邊大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，36（2）：155－157.

［9］Oyaizu M.Studies on products of browning reactions：antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosa mine［J］.Japanese Journal of Nutrition，1986，44：307－315.

Antioxidant activities ofConvallariakeiskeiMiq.

LI Han－xi1，YANG Xiang2，ZHANG Min－feng1，SHI Su－yun1＊
（1.KeyLaboratoryforNaturalResourceofChangbaiMountain＆FunctionalMolecules（YanbianUniversity），MinistryofEducation，Yanji133002，China；2.DepartmentofComputerScienceandTechnology，CollegeofEngineering，YanbianUniversity，Yanji133002，China）

Antioxidant activities of water extract ofConvallariakeiskeiMiq.are determined through the orthogonal experiment of DPPH·scavenging capacity.Moreover，the·OH and H2O2scavenging capacity and reducting power ofConvallariakeiskeiMiq.extract are analyzed.The optimized extract technology for the antioxidant extract ofConvallariakeiskeiMiq.are as follows：theConvallariakeiskeiMiq.with water extraction solvent for 30 min at 75℃.The DPPH·scavenging capacity is 96.1%，and the scavenging ability of DPPH·is enhanced with increasing concentration.ConvallariakeiskeiMiq.water extract sho wstronger·OH and H2O2scavenging ability and reducting power.It is sho wthatConvallariakeiskeiMiq.water extract here stronger antioxidant ability.

ConvallariakeiskeiMiq.；water extract；antioxidant activity

R285.5

A

1004－4353（2012）01－0064－03

2011－09－13

延邊大學(xué)“211”工程三期建設(shè)項(xiàng)目（YB211－0302）

＊通信作者：施溯筠（1972—），女，博士，副教授，研究方向?yàn)樘烊簧镔Y源的開發(fā)與活性成分研究.