潘志雄，劉曉峰，劉丹

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江 332000)

不同采血管對(duì)同型半胱氨酸測(cè)定結(jié)果的影響

潘志雄，劉曉峰，劉丹

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江 332000)

同型半胱氨酸；分離膠；抗凝劑

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過程中去甲基化所產(chǎn)生的重要中間產(chǎn)物。近年來(lái)，許多研究發(fā)現(xiàn)同型半胱氨酸與心血管疾病及腦中風(fēng)有密切關(guān)系，體內(nèi)同型半胱氨酸濃度被視為心、腦及周圍血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[1，2]。目前，國(guó)內(nèi)用何種標(biāo)本(血清或血漿)測(cè)定同型半胱氨酸已做了一些研究報(bào)道，但沒有明確的統(tǒng)一規(guī)定。本文通過對(duì)兩種不同類型采血管采集的標(biāo)本檢測(cè)Hcy的結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來(lái)源 隨機(jī)選擇30例門診患者的靜脈血，分別將2ml血液注入兩支乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管和一只分離膠真空采血管中，剔除有黃疸、溶脂或溶血的標(biāo)本。

1.1.2 儀器和試劑 采用日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品由臺(tái)塑生醫(yī)科技股份有限公司提供，分離膠真空采血管由積水醫(yī)療科技(中國(guó))有限公司生產(chǎn)，EDTA-K2抗凝管由美國(guó)BD公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 采樣處理 抗凝管組混勻后立刻以3000r/min離心5min；分離膠管組在血液凝固后以3000r/min離心5min。

1.2.2 Hcy濃度即刻值的測(cè)定 離心后的三組血清(漿)標(biāo)本立即上機(jī)同時(shí)測(cè)定，將測(cè)定結(jié)果作為相應(yīng)標(biāo)本的Hcy濃度即刻值(采血至進(jìn)樣整個(gè)過程控制在 15min 內(nèi))。

1.2.3 檢測(cè)方法 以臺(tái)塑公司出品的酶法試劑在日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Hcy濃度即刻值(μmol/L)比較 分離膠管血清組為10.9+7.1μmol/L；EDTA-K2抗凝管血漿組Ⅰ為10.2+7.2μmol/L；EDTA-K2抗 凝 管 血 漿 組 Ⅱ 為10.3+7.4μmol/L，分離膠管血清組與抗凝管血漿組數(shù)據(jù)比較差異非常顯著(P<0.01)。

2.2 不同采血管的Hcy濃度在室溫隨時(shí)間延長(zhǎng)的變化比較見表1(各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得數(shù)據(jù)與所在組即刻值采用方差分析比較)。分離膠管血清組在室溫下保存，4h內(nèi)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)得結(jié)果與該組Hcy濃度即刻值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，抗凝組Ⅰ、Ⅱ在室溫條件下保存，1h及以后各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得結(jié)果均較Hcy濃度即刻值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3 討論

表1 30例門診患者不同采血管、室溫放置不同時(shí)間的Hcy濃度變化(±s，μmol/L)

表1 30例門診患者不同采血管、室溫放置不同時(shí)間的Hcy濃度變化(±s，μmol/L)

注：抗凝組Ⅰ為離心后不再混勻的血漿；抗凝組Ⅱ?yàn)闇y(cè)定后混勻放置，于下次測(cè)定前5min離心的血漿。*與抗凝組Ⅰ即刻值比較P＜0.01；△與抗凝組Ⅱ即刻值比較P＜0.01。

組別 即刻值 30min 1h 2h 3h 4h F P標(biāo)本放置時(shí)間分離膠組抗凝組Ⅰ抗凝組Ⅱ10.9±7.1 10.2±7.2 10.3±7.4 10.8±7.4 10.3±7.5 10.6±7.8 11.1±7.2 11.1±7.2*13.8±11.9△11.1±7.3 11.7±7.1*15.9±13.9△11.0±7.3 11.8±7.3*18.5±16.2△11.0±6.7 11.9±5.8*19.6±18.2△0.528 69.79 251.8>0.05<0.01<0.01

在正常機(jī)體內(nèi),同型半胱氨酸的生成和清除保持著嚴(yán)格的動(dòng)態(tài)平衡。正常成人Hcy濃度大約為5～15μmol/L,其中約 70%～80%與血漿蛋白(主要是清蛋白)結(jié)合,約1%以游離硫醇的形式存在于血液循環(huán)中,約20%～30%自身結(jié)合成同型胱氨酸二聚體,或與其它的硫醇如半胱氨酸結(jié)合形成混合二硫化物[3]。目前，學(xué)術(shù)界對(duì)Hcy測(cè)定的標(biāo)本類型(血清或血漿)尚缺乏統(tǒng)一認(rèn)識(shí)，導(dǎo)致在各實(shí)驗(yàn)室之間標(biāo)本類型不一致，結(jié)果相差懸殊。由于Hcy可從血細(xì)胞釋放入血漿，故其血漿Hcy水平存在時(shí)間依賴性，室溫下正常人體的Hcy水平每小時(shí)增高5%～15%，這種增高與血液Hcy原水平無(wú)關(guān)[4]。從表1可以看出，抗凝組Ⅰ標(biāo)本是離心放置的，而抗凝組Ⅱ標(biāo)本是混勻放置的，抗凝組Ⅱ的測(cè)定結(jié)果明顯高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的抗凝組Ⅰ，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)差距加大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血液標(biāo)本室溫放置時(shí)間不能超過30min，檢測(cè)血漿Hcy的重要步驟是在采集血樣后立即離心除去血細(xì)胞，并及時(shí)測(cè)定，否則由于常溫下血細(xì)胞持續(xù)釋放Hcy至血漿，將導(dǎo)致其檢測(cè)值增高。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種不同真空采血管比較，分離膠管血清組的測(cè)定結(jié)果顯著高于抗凝管血漿組 (P＜0.01)，與王永鋒[5]的報(bào)道相符。這可能與離心前，從血液凝固到血清分離需要額外的時(shí)間，使血細(xì)胞釋放Hcy入血清有關(guān)。實(shí)驗(yàn)還表明分離膠管血清組在室溫下保存4h其結(jié)果幾乎不變化，與該組Hcy濃度即刻值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義 (P>0.05)。這是由于分離膠對(duì)血清成分呈現(xiàn)惰性，血樣在分離膠管中離心后，分離膠在血清與血塊之間形成膠狀的隔離層，因此在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)阻止了血細(xì)胞產(chǎn)生的Hcy進(jìn)入血清，從而使測(cè)定結(jié)果在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。用分離膠管對(duì)Hcy檢測(cè)結(jié)果，在離心后可以穩(wěn)定4h，對(duì)于采血后不能及時(shí)測(cè)定或需送外院測(cè)定的標(biāo)本可使用，但是測(cè)定結(jié)果與抗凝管有顯著差異(P<0.01)，需及時(shí)離心，并制定本實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。積極采取恰當(dāng)措施，盡量避免人為因素造成測(cè)定結(jié)果的差異，以便更好地輔助臨床診斷。

[1]黃淑英，姚全良.血清同型半胱氨酸水平與冠心病的關(guān)系[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27(5)：497-506.

[2]陸 勝，季雄娟.腦梗死患者血清同型半胱氨酸測(cè)定的臨床應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27(1)：92-108.

[3]HankeyGJ,Eikeboom JW.Homocysteine and vascular disease[J].Lancet,1999,(3)54:407-413.

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[5]王永鋒，田 宇.同型半胱氨酸兩種不同類型標(biāo)本測(cè)定結(jié)果比較[J].實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(20)：1259-1260.

R446.11+2

B

1674-1129(2012)04-0400-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.041