張偉東，夏文杰，張曉梅，黃 爽

(廣州血液中心，廣東 廣州 510095)

LCT配合血小板的輸注對(duì)HLA抗體的影響

張偉東，夏文杰，張曉梅，黃 爽

(廣州血液中心，廣東 廣州 510095)

目的了解隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者輸注淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(Lymphocyte cytotoxicity test,LCT)配合血小板后，其人類組織相容性抗原(Human leukocyte antigen，HLA)抗體的變化，探討HLA抗體陽(yáng)性患者的血小板有效輸注方式。方法選取5例由于HLA抗體陽(yáng)性引起的隨機(jī)血小板輸注無(wú)效，需長(zhǎng)期輸注LCT配合血小板的患者，以每輸注LCT配合血小板5個(gè)治療量為一間隔期，動(dòng)態(tài)檢測(cè)患者的HLA抗體強(qiáng)度和特異性。結(jié)果隨著輸入血小板數(shù)量的增加，5例患者的HLA抗體強(qiáng)度逐漸減弱，2例患者的HLA抗體特異性發(fā)生改變。結(jié)論LCT能夠解決由于HLA抗體陽(yáng)性引起的隨機(jī)血小板輸注無(wú)效，但隨著輸入抗原的改變HLA抗體的特異性亦會(huì)發(fā)生改變，產(chǎn)生新特異性的HLA抗體，建立HLA相合血小板供者庫(kù)是最有效的解決方法。

淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)；HLA抗體；血小板輸注

輸注淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn) (Lymphocyte cytotoxicity test,LCT)配合血小板是解決隨機(jī)血小板輸注無(wú)效的方法之一[1]。我們動(dòng)態(tài)觀察了隨機(jī)血小板輸注無(wú)效的HLA抗體陽(yáng)性患者輸注LCT配合血小板后HLA抗體的變化情況，旨在了解LCT在解決血小板輸注無(wú)效中的應(yīng)用價(jià)值，探討HLA抗體陽(yáng)性患者的血小板有效輸注方式。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 對(duì)各醫(yī)院送檢隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者90例進(jìn)行HLA抗體檢測(cè)，選取5例需長(zhǎng)期輸注血小板的HLA抗體陽(yáng)性患者，其中再生障礙性貧血1例，多發(fā)性骨髓瘤1例，β-地中海貧血干細(xì)胞移植術(shù)后3例，年齡3～50歲。

1.2 輸注血小板效果判斷 采用血小板增加修正值 (CCI)，CCI=輸后血小板增加值×體表面積/輸注血小板總數(shù)×1011，若輸注后1h CCI<10×109/L或24hCCI<5.0×109/L 為無(wú)效[2]。

1.3 試劑 ⑴T淋巴細(xì)胞熒光免疫磁珠；⑵美國(guó)One Lambda公司生產(chǎn)的Lambda Antigen TrayTMELISA-LATM試劑盒；⑶美國(guó)One Lambda公司生產(chǎn)的Lambda Antigen TrayTMELISA-LAT1240試劑盒；所有試劑嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，在有效期內(nèi)使用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 ⑴采用ELISA-LATM試劑盒對(duì)各醫(yī)院送檢隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者進(jìn)行HLA抗體檢測(cè)。⑵選取5例HLA抗體陽(yáng)性患者行淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(LCT)配型血小板，試驗(yàn)結(jié)果陰性輸注；對(duì)5例患者在輸注LCT配合血小板每5個(gè)單位后使用ELISA-LAT1240試劑盒測(cè)定HLA抗體強(qiáng)度和特異性。

HLA抗體強(qiáng)度計(jì)算公式：

HLA抗體特異性判斷：根據(jù)陽(yáng)性反應(yīng)孔與試劑公司提供的細(xì)胞抗原盤(pán)確定特異性。

1.5 儀器 ⑴日本OLYMPUS 1×70倒置相差熒光顯微鏡；⑵美國(guó)Bio-Tek公司生產(chǎn)的ELX800型通用酶標(biāo)儀。

2 結(jié)果

2.1 90例隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者中有57例HLA抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率為63.3%。其中5例長(zhǎng)期輸注血小板患者的HLA抗體強(qiáng)度隨輸注LCT配合血小板的數(shù)量的增加而逐漸減弱甚至逆轉(zhuǎn)。

2.2 伴隨著HLA抗體強(qiáng)度的減弱，有2例患者HLA抗體特異性發(fā)生了改變，見(jiàn)表1。

3 討論

表1 2例患者的HLA抗體特異性情況

血小板表面存在著與其他細(xì)胞或組織共有的抗原，如HLA抗原、ABO抗原、Rh抗原。產(chǎn)生血小板輸注無(wú)效的免疫學(xué)原因主要是HLA抗原引起的，其次是血小板特異性抗原(HPA)，在廣東漢族人群僅有HPA-3和HPA-15系統(tǒng)抗原是引起血小板輸注無(wú)效的潛在抗原[3]。輸注LCT配型相合血小板能夠改善因HLA抗體陽(yáng)性引起的隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者的CCI。本次實(shí)驗(yàn)觀測(cè)90例隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者中有57例HLA抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率為63.3%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[4]。其中5例需長(zhǎng)期輸注LCT配型相合血小板的HLA抗體陽(yáng)性患者，HLA抗體強(qiáng)度逐漸減弱甚至逆轉(zhuǎn)，推測(cè)與兩方面的因素形成有關(guān)：一是抗體本身對(duì)特異性免疫應(yīng)答具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，隨著抗體數(shù)量的增加，加速了抗原的清除，從而降低了抗原濃度，形成抗獨(dú)特型抗體；二是免疫抑制藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用，在一定程度上抑制同種免疫的發(fā)生。

5 例患者中有2例患者伴隨著HLA抗體強(qiáng)度的減弱，HLA抗體特異性發(fā)生了改變：1例再生性障礙貧血患者第一次檢測(cè)的HLA抗體特異性為：-A24；-B27,51,57,輸入相合血小板5U后，出現(xiàn)了新的抗體-A30；輸入相合血小板10U后，又增加了抗體-B55；另 1例β-地中海貧血患者第一次檢測(cè)的HLA抗體特異性為：-A11,29,30,31,32,33;-B13,27,37,55,60,61，在輸入相合血小板15U后，出現(xiàn)了新的抗體-B35。我們認(rèn)為這是由于LCT試驗(yàn)雖然可以幫助患者選擇避開(kāi)針對(duì)體內(nèi)HLA特異性抗體的抗原，但其無(wú)法識(shí)別非HLA交叉反應(yīng)組的相應(yīng)HLA抗原[5]，使機(jī)體接受新抗原的刺激產(chǎn)生新的抗體，持續(xù)輸注無(wú)效，降低臨床預(yù)期值。

我們建議對(duì)長(zhǎng)期輸注配型血小板患者的HLA抗體應(yīng)實(shí)施動(dòng)態(tài)觀察檢測(cè)，LCT能夠解決由于HLA抗體陽(yáng)性引起的隨機(jī)血小板輸注無(wú)效，但隨著輸入抗原的改變，HLA抗體的特異性亦會(huì)發(fā)生改變，產(chǎn)生新特異性的HLA抗體，建立HLA相合血小板供者庫(kù)是最有效的解決方法。

[1]Levin MD.The value of alloantibody detection in predicting response to HLA-matched platelet transfusions[J].Br J Haematol.2004,124(2):244-50.

[2]田兆嵩.臨床輸血進(jìn)展[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社，2010：21-23.

[3]張偉東,夏文杰,葉 欣,等.血小板抗原譜細(xì)胞的建立和應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008,(4)26:372-373.

[4]Fabris F,Soini B,Sartori R，et al.Clinical and laboratory factors that affect the post-transfusion platelet increment[J].Transfus Sci，2000,23(1):63-68.

[5]魏亞明,呂 毅.基礎(chǔ)輸血學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：245-246.

R457.1+2，R446.62

B

1674-1129(2012)04-0357-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.015