吳永恒, 王秋月, 馮政夫, 李彬斌, 朱 偉

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 山東 青島 266109)

飼料粗蛋白含量對(duì)刺參消化酶及消化道結(jié)構(gòu)的影響

吳永恒, 王秋月, 馮政夫, 李彬斌, 朱 偉

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 山東 青島 266109)

本實(shí)驗(yàn)以魚(yú)粉、酪蛋白以及藻粉等為主要原料配制了粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%、16%、20%、24%、28%、32%的6種半精制刺參(Apostichopus japonicus)飼料, 研究飼料中粗蛋白含量對(duì)刺參生長(zhǎng)、蛋白酶和淀粉酶活性以及腸道結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明, 刺參飼料中粗蛋白含量對(duì)刺參的生長(zhǎng)、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率以及消化道中蛋白酶和淀粉酶活性都有明顯影響, 腸道蛋白酶和淀粉酶活性對(duì)飼料粗蛋白含量有適應(yīng)性, 隨飼養(yǎng)時(shí)間也有適應(yīng)性變化。飼料中粗蛋白含量對(duì)刺參腸道結(jié)構(gòu)也有一定的影響。

刺參(Apostichopus japonicus); 粗蛋白; 蛋白酶; 淀粉酶

蛋白質(zhì)是水產(chǎn)動(dòng)物重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), 水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)速度與其所攝食飼料的粗蛋白含量有密切關(guān)系, 而對(duì)消化酶活性的研究有助于更準(zhǔn)確地掌握水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的需求量, 并且更有助于探討飼料中粗蛋白含量與消化酶活性的關(guān)系。

對(duì)刺參(Apostichopus japonicus)蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)及消化生理的研究尚處于初步階段。朱偉等[1]通過(guò)飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)確定了刺參稚參飼料中的最適粗蛋白含量為18.21%～24.18%, 粗脂肪的適宜含量為 3%～5%, 為刺參人工配合飼料的研究提供了理論依據(jù)。刺參體內(nèi)存在多種蛋白酶, 不同部位蛋白酶的活性也有所差異, 且隨著季節(jié)而變化, 尤其水溫的變化, 刺參的消化道形態(tài)和消化道內(nèi)消化酶的活性有顯著的變化,夏季刺參進(jìn)入“夏眠”之后, 消化道變短、薄而細(xì), 消化酶活性下降[2-3]。不同發(fā)育階段刺參蛋白酶的活性也存在較大差異, 且蛋白酶活性與淀粉酶活性的比值反映出其食性的轉(zhuǎn)換[4]。刺參的食性在發(fā)育過(guò)程中是不斷變化的, 對(duì)刺參蛋白酶和淀粉酶活性隨飼料中營(yíng)養(yǎng)含量變化的研究有助于觀察刺參對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收情況及其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求狀況。作者對(duì)刺參消化道內(nèi)的蛋白酶和淀粉酶活性與飼料中粗蛋白含量及刺參生長(zhǎng)情況的關(guān)系進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

實(shí)驗(yàn)飼料以魚(yú)粉、酪蛋白、酵母粉、馬尾藻粉、麥麩、精煉魚(yú)油、混合礦物質(zhì)與混合維生素等為原料配制。以酪蛋白調(diào)節(jié)飼料中粗蛋白的含量, 共設(shè)計(jì)了6個(gè)粗蛋白水平, 分別為12%、16%、20%、24%、28%、32%, 見(jiàn)表1。將飼料原料混勻后加適量水?dāng)嚢? 經(jīng)擠條機(jī)制成1.5 mm細(xì)條, 在60℃條件下烘干,至水分為 8.92%～9.15%, 然后粉碎成 120目顆粒待用。

1.2 飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)在山東省青島市平度養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)用刺參平均體質(zhì)量 2.5g。海水鹽度為 30‰, 水溫為 16℃±1℃。飼養(yǎng)期間連續(xù)充氣, 水溫控制在17℃±0.5℃, pH 7.8～8.2, 溶解氧不低于 5 mg/L,NH4+的質(zhì)量濃度為0.038～0.070 mg/L。

實(shí)驗(yàn)刺參共分為 6組, 每組投喂不同粗蛋白含量的飼料, 在養(yǎng)殖期間收集糞便, 每 10天隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)海參8頭測(cè)定刺參體內(nèi)蛋白酶、淀粉酶活性。

1.3 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定

增重率(%) = 凈增重/試驗(yàn)初重×100%;

飼料系數(shù) = 攝食量/凈增重;

蛋白質(zhì)效率 = 總增重/(攝食量×飼料蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)%);

蛋白質(zhì)利用率(%) = 飼料中蛋白質(zhì)的量－糞便中蛋白質(zhì)的量/飼料中粗蛋白的量×100%。

表1 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分Tab. 1 The formulation and nutritional composition of experimental diets

1.4 消化酶活性的測(cè)定

刺參取樣前, 停食48 h, 使其排空消化道內(nèi)的食物殘?jiān)? 將其放于冰盤(pán)內(nèi)用剪刀沿刺參腹部剪開(kāi), 取出消化道, 剔除生殖腺及與消化道末端相連的呼吸樹(shù), 用濾紙吸去表面水分, 稱重后加入10倍體積預(yù)冷的去離子水, 在冰浴條件下用高速勻漿機(jī)勻漿 10 min, 然后將勻漿液于高速冷凍離心機(jī)中(4℃, 10 000 r/min)低溫離心30 min, 上清液即為粗酶液。

淀粉酶活性測(cè)定采用淀粉-碘顯色法[5]。向試管中加入0.04%可溶性淀粉5 mL, 于37℃水浴中預(yù)熱5 min, 加入粗酶液1.0 mL, 充分混勻后, 37℃水浴反應(yīng)7.5 min, 再加入0.01 mol/L碘應(yīng)用液5.0 mL終止反應(yīng), 然后稀釋到50 mL立即充分混勻, 660 nm處比色?？瞻字胁患用敢? 其他同測(cè)定管。淀粉酶活力單位定義為：pH為7.0, 在(37 ± 1)℃條件下保溫30 min,100 mL酶液中的淀粉酶完全水解淀粉10 mg為一個(gè)淀粉酶活力單位。

蛋白酶活性采用福林-酚試劑法[6]。向試管中加入0.5%的酪蛋白溶液2.0 mL和pH7.2的磷酸緩沖液4.0 mL, 在40℃下保溫5 min, 然后加入粗酶液1.0 mL, 保溫20min, 立即加入10%三氯乙酸2.0 mL終止反應(yīng)。取出常溫離心(3 000 r/min)10 min后的上清液1 mL, 加入0.4 mol/L的碳酸鈉溶液5.0 mL, 再加入1.0 mol/l的福林試劑1.0 mL, 于40℃恒溫水浴中顯色20 min, 然后在680 nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定, 對(duì)照管在加入粗酶液前加入三氯乙酸使酶失活, 其他同測(cè)定管。蛋白酶活力單位定義：在 pH7.2和 40℃下保溫20 min, 1 g刺參消化道1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸即為1個(gè)蛋白酶活力單位。

1.5 組織切片的制作

將實(shí)驗(yàn)刺參停食 24 h, 使其排空消化道內(nèi)的食物殘?jiān)? 沿腹中線的右側(cè)解剖, 剔除與消化道末端相連的呼吸樹(shù)。將腸道組織固定于Bouin’s液中, 常規(guī)石蠟連續(xù)切片, 切片厚度 5～7μm, H. E染色,Olympus顯微鏡觀察、拍照。

2 結(jié)果

2.1 飼料粗蛋白含量對(duì)刺參生長(zhǎng)及體成分的影響

2.1.1 飼料粗蛋白含量對(duì)刺參增重率及體成分的影響

由表2可見(jiàn), 實(shí)驗(yàn)刺參的增重率隨飼料中粗蛋白含量的變化而變化。在飼料中粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%、20%和 24%時(shí), 增重率為分別為 101.98%,98.99%和 88.53%, 三者之間沒(méi)有明顯差異, 但明顯高于粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的處理(P＜ 0.05), 而當(dāng)飼料中粗蛋白含量繼續(xù)增加時(shí), 實(shí)驗(yàn)刺參的增重率則下降, 當(dāng)飼料粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 28%和 32%時(shí),增重率僅為60.40%和59.62%, 下降的幅度較大。實(shí)驗(yàn)刺參體內(nèi)粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 36.70%～38.39%, 各處理間差異不顯著(P＞ 0.05); 粗灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)在40%～42%之間, 水分在 92%～93%之間, 各處理間差異均不顯著(P＞ 0.05)。說(shuō)明飼料中粗蛋白含量對(duì)刺參體內(nèi)粗蛋白、粗灰分和水分含量沒(méi)有明顯影響。實(shí)驗(yàn)刺參體內(nèi)粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)在 4.7%～6.7%之間,但飼料粗蛋白從 12%到 28%時(shí), 體內(nèi)粗脂肪含量有下降的趨勢(shì), 詳見(jiàn)表3。

表2 粗蛋白含量的飼料對(duì)刺參幼參生長(zhǎng)的影響Tab. 2 Growth performance of Apostichopus japonicas fed the diets containing different protein levels

表3 不同蛋白含量飼料飼養(yǎng)后刺參體成分Tab. 3 Nutritional Compositions of Apostichopus japonicas with different protein level of experimental diets

2.1.2 不同粗蛋白含量飼料飼養(yǎng)下的飼料系數(shù)及蛋白質(zhì)效率

在飼料中粗蛋白含量為16%、20%和24%時(shí), 飼料系數(shù)分別為0.54, 0.55和0.59, 三者之間無(wú)明顯差異, 都明顯低于其余各處理。當(dāng)飼料中粗蛋白含量進(jìn)一步增加時(shí), 飼料系數(shù)隨之上升。蛋白質(zhì)效率隨粗蛋白含量的變化趨勢(shì)非常明顯, 各處理之間的蛋白質(zhì)效率有顯著差異(P＜ 0.05)。12%與16%處理的蛋白質(zhì)效率分別為 12.57%和 11.98%, 無(wú)顯著差異(P＞0.05), 但隨著飼料中粗蛋白含量的增加, 顯著下降(P＜ 0.05)。

2.2 飼料中粗蛋白含量對(duì)刺參腸道蛋白酶和淀粉酶活性的影響

由圖1和圖2可以看出, 實(shí)驗(yàn)刺參消化道內(nèi)蛋白酶和淀粉酶的活性明顯受到飼料中粗蛋白含量的影響。當(dāng)飼料中粗蛋白含量由12%增加到16%時(shí), 實(shí)驗(yàn)刺參消化道蛋白酶活性明顯升高, 由11.64 μg/(g·min)升高到16.02 μg/(g·min)。飼料中粗蛋白含量從16%升高到 24%過(guò)程中, 蛋白酶活性無(wú)明顯變化, 為16.02～18.82 μg/(g·min)。之后, 隨著飼料中粗蛋白含量的提高, 蛋白酶活性明顯上升, 在飼料粗蛋白含量為 28%時(shí)達(dá)到最大值, 為 24.71 μg/(g·min)。這說(shuō)明刺參對(duì)飼料中粗蛋白含量具有明顯的適應(yīng)性。實(shí)驗(yàn)刺參消化道內(nèi)淀粉酶的活性也隨著飼料中粗蛋白含量的升高, 呈明顯上升的趨勢(shì)。當(dāng)飼料中粗蛋白含量為12%時(shí), 淀粉酶活性為138.51 mg/(g·min), 當(dāng)飼料粗蛋白達(dá)到 32%時(shí), 淀粉酶活性達(dá)到最大值, 為218.38 mg/(g·min)。

圖1 粗蛋白含量對(duì)刺參蛋白酶活性的影響Fig.1 Effect of crude protein on protease activity in sea cucumbers

圖2 粗蛋白含量對(duì)刺參淀粉酶活性的影響Fig.2 Effect of crude protein on amylase activity in sea cucumbers

刺參消化道蛋白酶活性隨飼養(yǎng)時(shí)間的變化見(jiàn)圖3。由圖中可見(jiàn), 各個(gè)處理實(shí)驗(yàn)刺參的消化道蛋白酶活性在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的變化基本一致。在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的前10天, 實(shí)驗(yàn)刺參消化道內(nèi)蛋白酶活性都呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì), 之后又逐漸降低, 并在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到 20天時(shí)降到最低, 而后略有回升, 并在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至40天的過(guò)程中保持比較平穩(wěn)的水平。在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 40天至 56天過(guò)程中, 蛋白酶活性略有上升。各處理中, 飼料粗蛋白含量為 16%處理的腸道內(nèi)蛋白酶活性變化幅度最小。由圖4可見(jiàn), 各組實(shí)驗(yàn)刺參之間淀粉酶在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中的變化趨勢(shì)也基本相同。與蛋白酶的變化趨勢(shì)所不同的是, 在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)初期, 實(shí)驗(yàn)刺參消化道內(nèi)淀粉酶活性明顯降低, 并于飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)10天時(shí)達(dá)到淀粉酶活性最低。之后淀粉酶活性顯著升高, 并在之后的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持相對(duì)平穩(wěn)的變化趨勢(shì)。飼料中粗蛋白含量16%的實(shí)驗(yàn)刺參的淀粉酶活性在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中變化幅度最小。

2.3 飼料粗蛋白含量對(duì)刺參消化道組織結(jié)構(gòu)的影響

刺參的消化道管壁分為 4層：由內(nèi)到外依次為黏膜層、黏膜下層、肌肉層和漿膜層(圖5)[7]。從圖5中可以看出, 前腸結(jié)締組織薄, 腸絨毛長(zhǎng), 肌肉層也較薄。粗蛋白含量為 12%和 16%的刺參消化道的組織各層結(jié)構(gòu)清晰, 黏膜細(xì)胞排列整齊, 前中后腸的組織結(jié)構(gòu)在這兩個(gè)處理中沒(méi)有顯著差異。但 32%粗蛋白含量的處理中中腸外層細(xì)胞和黏膜細(xì)胞輪廓不清晰, 說(shuō)明組織結(jié)構(gòu)受到影響(圖5-C2)。

圖3 刺參蛋白酶活性隨養(yǎng)殖時(shí)間的變化Fig. 3 The change of protease activity during feeding

圖4 刺參淀粉酶活性隨養(yǎng)殖時(shí)間的變化Fig. 4 The change of amylase activity during feeding

3 討論

從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果看, 刺參在飼料粗蛋白為 16%時(shí)即達(dá)到最大的生長(zhǎng)速度, 而一直到粗蛋白含量為 24%時(shí), 實(shí)驗(yàn)刺參的增重率都維持在最高水平(P＜0.05),從飼料效率來(lái)看, 飼料粗蛋白在 16%～24%時(shí), 其飼料系數(shù)最低, 飼料蛋白質(zhì)效率最高, 說(shuō)明飼料粗蛋白的適宜含量為 16%～24%。朱偉等[1]的研究認(rèn)為, 刺參飼料的粗蛋白的適宜含量為18.21%～ 24.18%, 與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本一致。當(dāng)飼料中粗蛋白含量高于24%時(shí), 隨著飼料中粗蛋白含量的上升, 刺參增重率逐漸下降,表明過(guò)高的粗蛋白不利于刺參的生長(zhǎng)。在其他動(dòng)物如羅非魚(yú)[8]和凡納濱對(duì)蝦[9]中也有相同現(xiàn)象。

從圖1和圖2可以看出刺參攝食不同粗蛋白含量的飼料其消化道蛋白酶活性變化趨勢(shì)。當(dāng)刺參攝食不同粗蛋白含量的飼料后, 能夠通過(guò)體內(nèi)消化酶活性的變化來(lái)適應(yīng), 從而對(duì)飼料中粗蛋白進(jìn)行更充分的消化和吸收, 因此可以認(rèn)為刺參消化道內(nèi)蛋白酶活性對(duì)飼料中粗蛋白含量有適應(yīng)性變化, 即當(dāng)飼料中粗蛋白含量高時(shí), 刺參的消化道內(nèi)的蛋白酶活性會(huì)隨之增大。而且, 這種適應(yīng)性不僅存在于低于刺參飼料粗蛋白最適含量(16%～24%)時(shí), 而當(dāng)飼料中粗蛋白含量高于 24%時(shí), 也有此變化, 但此時(shí)雖然刺參腸道蛋白酶活性提高, 而增重率卻沒(méi)有相應(yīng)地增加。羅氏沼蝦消化酶活性對(duì)飼料蛋白質(zhì)含量有適應(yīng)性反應(yīng), 飼料蛋白含量的增加, 可顯著影響羅氏沼蝦稚蝦類(lèi)胰蛋白酶和胃蛋白酶的活性, 但不影響淀粉酶的活性[10]。這與羅氏沼蝦蛋白酶活性與飼料蛋白含量關(guān)系的研究所得結(jié)論相一致,可能的原因是隨著飼料中粗蛋白含量的提高使蛋白酶活性升高, 吸收到體內(nèi)的蛋白質(zhì)隨之增加, 但過(guò)多的蛋白質(zhì)不能用來(lái)合成自身組織而是被自身代謝而被消耗。當(dāng)飼料中粗蛋白含量超過(guò) 28%時(shí), 刺參腸道內(nèi)蛋白酶活性隨飼料中粗蛋白含量的提高而有所下降。在對(duì)寶石鱸、南方鲇中的研究中也發(fā)現(xiàn)了同樣的現(xiàn)象[11-12], 這可能與消化道內(nèi)蛋白酶活性的產(chǎn)物抑制作用有關(guān), 還有待進(jìn)一步研究。因此, 在配合飼料的研制過(guò)程中應(yīng)考慮使飼料的粗蛋白含量與刺參自身的消化酶活性相適應(yīng), 以降低養(yǎng)殖成本, 提高飼料中蛋白質(zhì)利用率。

刺參腸道內(nèi)淀粉酶活性隨飼料中粗蛋白含量的增加(碳水化合物含量減少)而逐漸升高。當(dāng)飼料中粗蛋白含量為 32%時(shí)淀粉酶活性達(dá)到最大值。說(shuō)明刺參淀粉酶活性對(duì)飼料中淀粉含量的適應(yīng)程度較低。這一結(jié)果與羅氏沼蝦, 中國(guó)對(duì)蝦淀粉酶與飼料粗蛋白含量關(guān)系的研究中所得的結(jié)果相似[13]。

圖5 實(shí)驗(yàn)刺參腸道橫切Fig. 5 Transverse sections of sea cucumbers

在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中, 刺參腸道內(nèi)消化酶活性的變化分為兩個(gè)階段。在第一個(gè)階段(前 20d), 刺參蛋白酶活性呈現(xiàn)顯著的先上升后下降的趨勢(shì), 淀粉酶活性呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。兩種消化酶活性都出現(xiàn)了較大幅度的變化, 但變化趨勢(shì)截然相反, 這種現(xiàn)象可能與刺參對(duì)實(shí)驗(yàn)飼料的適應(yīng)性有關(guān)。這與對(duì)中國(guó)對(duì)蝦的研究得到的結(jié)論一致, 中國(guó)對(duì)蝦體內(nèi)消化酶活性的急劇變化與飼料改變后導(dǎo)致消化系統(tǒng)活動(dòng)的應(yīng)激作用有關(guān)。隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 機(jī)體內(nèi)消化酶的分泌量受其神經(jīng)內(nèi)分泌因素的調(diào)控, 與機(jī)體的新陳代謝水平逐漸相適應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明, 消化酶分泌量多少與活性的大小不僅與消化系統(tǒng)自身有關(guān), 還與機(jī)體的整體代謝的調(diào)控水平相適應(yīng)。在第二階段(20 d后), 刺參對(duì)攝食的飼料逐漸適應(yīng), 消化酶活性變化趨于平穩(wěn)。在該階段, 蛋白酶活性在經(jīng)歷一個(gè)相對(duì)平穩(wěn)期之后逐漸升高。飼料中粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù) 16%處理的實(shí)驗(yàn)刺參消化道內(nèi)蛋白酶、淀粉酶活性在飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的變化最為平穩(wěn), 說(shuō)明適宜的飼料粗蛋白含量引起的刺參體內(nèi)的生理變化也最小。

作者選取了 12%、16%和 32%粗蛋白處理的刺參的橫切面圖進(jìn)行了比較, 發(fā)現(xiàn)粗蛋白含量的變化引起的刺參腸道的組織結(jié)構(gòu)的變化不大。尤其是在12%和16%中處理中前腸、中腸和后腸的組織結(jié)構(gòu)均沒(méi)有顯著變化, 只是在 32%粗蛋白的處理中實(shí)驗(yàn)刺參中腸的外層細(xì)胞和黏膜細(xì)胞的輪廓模糊, 說(shuō)明其結(jié)構(gòu)收到了影響, 但其中的原因還有待進(jìn)一步分析,也不能排除替代粗蛋白的飼料原料增加而造成的。有研究表明, 刺參消化管的長(zhǎng)度和質(zhì)量的季節(jié)變化與刺參消化道中蛋白酶、淀粉酶等主要消化酶活性的周年變化是一致的, 既當(dāng)刺參攝食旺盛, 消化酶活性高時(shí), 其消化管較長(zhǎng)、較重; 反之, 在攝食和生長(zhǎng)緩慢的時(shí)期, 消化道內(nèi)各種酶活性低, 消化管較短、較輕[3]。由此推測(cè), 飼料的營(yíng)養(yǎng)成分和原料組成都會(huì)影響消化道的結(jié)構(gòu)。

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The effect of dietary protein on the enzymes and intestinal structure ofApostichopus japonicus

WU Yong-heng, WANG Qiu-yue, FENG Zheng-fu, LI Bin-bin, ZHU Wei
(Life Science College, Qingdao Agriculture University, Qingdao 266109, China)

Feb., 26, 2011

sea cucumber (Apostichopus japonicus); crude protein; protease; amylase

To investigate the effect of dietary crude protein levels on the growth, protease or amylase activity, and the intestinal structure ofApostichopus japonicus, a feeding experiment was conducted with six semi-purified diets with protein content of 12%, 16%, 20%, 24%, 28%, and 32%. The results showed that growth performance, protease or amylase activity and the intestinal structure of sea cucumbers were significantly affected by dietary protein content. Intestinal protease or amylase activity could not only adapt for the diet crude protein, but also changed as feeding time. The histology observation showed that the mid-intestinal structure was affected by dietary content of crude protein.

S963.16; S986.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1000-3096(2012)01-0036-06

2011-02-26;

2011-05-12

青島市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(05-1-HY-79)

吳永恒(1985-), 男, 山東青州人, 碩士研究生, 研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理; 朱偉, 通信作者, 教授, 研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料, 電話：0532-86080640, E-mail：zhuw001@163.com

梁德海)