廖 婉,黃金珠,王繼森,徐曉秋,游 宇,傅超美

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地

中藥材標(biāo)準化教育部重點實驗室,四川成都 611137;2.成都市食品藥品檢測中心,四川成都 610045)

0 引 言

青果為橄欖科植物橄欖(Canarium albumRaeusch)的干燥成熟果實,具有清熱解毒、利咽、生津等功效,可用于治療咽喉腫痛、咳嗽痰黏、煩熱口渴、魚蟹中毒等癥[1].青果主產(chǎn)于四川、福建、廣東等地,但全國各地品種繁多,劃分標(biāo)準不明確,容易混淆.青果在我國南方各地民間用量很大,它既為可食鮮果,又為藥膳、飲品、中藥的常用資源[2].隨著科研人員對青果食用與藥用研究的深入,青果的應(yīng)用開發(fā)呈現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摿?目前,1963年版～2005年版《藥典》均無青果指標(biāo)性化學(xué)組分的定性和定量分析方法,而2010年版《藥典》也只增加了鑒別(理化鑒定)、檢查和浸出物3項,其含量測定尚為空缺,質(zhì)量評價體系不完善,難以科學(xué)控制青果內(nèi)在質(zhì)量,其資源的開發(fā)與利用受到很大限制.研究發(fā)現(xiàn),青果中沒食子酸是其主要有效成分[3],據(jù)此,本研究采用高效液相色譜法對26批不同產(chǎn)地青果中沒食子酸的含量進行比較研究,以期為青果的質(zhì)量控制和合理開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù).

1 儀器與材料

1.1 儀 器

實驗所用儀器包括:Waters 2695-2487高效液相色譜儀,Waters2487檢測器,Empower Pro色譜工作站,色譜柱為 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm);Mettler AE240電子分析天平(Mettler Inc.);FA1104電子分析天平(上海天平儀器廠); K Q-500E型醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司);數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司).

1.2 材 料

表1 青果藥材來源

實驗所用材料包括:青果分別購于四川、福建、廣東、云南、安徽等地藥材市場或飲片公司,經(jīng)鑒定為橄欖科植物橄欖的干燥成熟果實(見表1);沒食子酸對照品(批號0831-9501,中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純(Fisher Inc.),水為超純水,其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品與供試品溶液制備

精密稱取沒食子酸對照品適量,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成0.104 mg/mL的對照品溶液.

精密稱取青果藥材粉末5 g,置錐形瓶中,精密加入80%甲醇溶液50 mL,稱定重量,超聲提取20 min,放冷,再稱定重量,用80%甲醇溶液補足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液5 mL至10 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,得供試品溶液.

2.2 色譜條件

實驗的色譜條件為:色譜柱為 Thermo Hypersil BDS C18柱(250×4.6 mm,5μm),流動相為甲醇—0.1%磷酸(5∶95),流速1.0 mL/min,柱溫30℃.檢測波長254 nm,理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計應(yīng)不低于2 000.在上述色譜條件下,樣品溶液色譜圖中未見其他組分和輔料對測定組分沒食子酸的干擾(見圖1).

圖1 HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取沒食子酸對照品溶液2、5、10、15、20μL注入高效液相色譜儀中,在上述色譜條件下測定,重復(fù)進樣2次,記錄色譜圖,測定峰面積值.以峰面積平均值(y)對進樣量(x)進行線性回歸,繪制標(biāo)準曲線,計算得到回歸方程為,

數(shù)據(jù)表明,沒食子酸在0.0208～0.208 mg·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系.

2.4 精密度實驗

精密吸取沒食子酸對照品液,連續(xù)進樣6次,其RSD%為0.24%.結(jié)果表明,實驗所用儀器精密度良好.

2.5 穩(wěn)定性實驗

精密吸取供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、18 h進樣10μL,測定峰面積,其RSD為0.27%.結(jié)果表明,樣品在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.6 重復(fù)性實驗

平行精密稱取同一批樣品5份,按“2.1”項供試品溶液制備項下操作,分別進樣10μL,計算求得平均含量為1.695 mg·g-1,其RSD為1.75%.結(jié)果表明,實驗方法重復(fù)性良好.

2.7 加樣回收實驗

精密稱取已知含量的樣品(1.702 mg·g-1)6份,各約2.5 g,分別精密加入沒食子酸對照品溶液(1.064 mg·mL-1)4 mL,按供試品項下操作并按含量測定方法進行測定,結(jié)果如表2所示.計算平均加樣回收率為100.5%,其RSD為2.75%,表明樣品回收率符合要求.

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品測定

取26批不同產(chǎn)地青果制備的供試品溶液,按“2.2”項色譜分離條件,進樣10μL,測定峰面積,計算含量,結(jié)果如表3所示.

3 結(jié)論與討論

由表3數(shù)據(jù)可看出:26批青果中沒食子酸的平均含量為1.752%,其中,沒食子酸含量最高的是產(chǎn)自四川瀘州合江甘雨村種植基地的青果,其沒食子酸含量為2.293 mg·g-1,福建產(chǎn)的青果沒食子酸含量次之,其他產(chǎn)地青果沒食子酸含量也均超過了1.0 mg·g-1;產(chǎn)于四川和福建的青果,沒食子酸含量普遍較其他產(chǎn)地高;產(chǎn)于四川的二白圓、自來圓、檀香和大梭子,云南的二白圓,安徽的檀香和大梭子,福建的自來圓、檀香和大梭子沒食子酸含量較高,均高于2.0 mg·g-1.表3數(shù)據(jù)也顯示:不同產(chǎn)地的青果中沒食子酸的含量存在明顯差異;同一產(chǎn)地,由于品種和采收期的不同,青果中沒食子酸的含量也存在一定差異.

表3 沒食子酸含量測定結(jié)果(n=3)

沒食子酸是青果中含量較多的化學(xué)成分之一,研究人員通常以沒食子酸作為指標(biāo)成分對青果進行質(zhì)量控制研究[4-5].本研究利用高效液相色譜法,對產(chǎn)于四川、福建、廣東、云南、安徽等地所產(chǎn)青果測定了其沒食子酸含量.實驗結(jié)果表明,樣品中各組分的色譜峰基本達到基線分離.該測定方法穩(wěn)定、快速、重現(xiàn)性好、靈敏度高,實驗數(shù)據(jù)可靠,可為《藥典》下一步修訂青果項下質(zhì)量標(biāo)準提供科學(xué)參考依據(jù).

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010.

[2]廖婉,游宇,張臻,等.中藥青果在現(xiàn)代美容領(lǐng)域的研究進展[J].中藥與臨床,2012,3(2):60-62.

[3]王恒,宋良科,湯昊.不同種質(zhì)青果清熱利咽化學(xué)組分的研究[J].中國中藥雜志,2010,35(6):669-672.

[4]諶立巍,陳思敏,吳小唯,等.兩種青果中沒食子酸和總鞣質(zhì)的含量測定[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2008,27(5):51-52.

[5]何志勇,夏文水.中藥青果化學(xué)成分及藥理研究進展[J].中成藥,2006,28(7):1024-1026.