周 瑋 魏海云 牛佳木

目前研究發(fā)現COX-2在多種腫瘤組織及細胞中存在過度表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關，已成為腫瘤診斷及治療的1個新靶點[1]。有關胃癌COX-2表達與CD4、CD8相關性研究尚未見報道。本研究檢測胃腺癌、癌旁異型增生及正常胃黏膜組織中的COX-2、CD4及CD8表達及其與臨床病理特征的關系，探討COX-2促進腫瘤發(fā)生的新的分子機制。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集江西省腫瘤醫(yī)院2008年1月至2008年12月間胃癌手術切除并經病理診斷證實的胃腺癌標本62例。其中男性39例，女性23例，年齡30～79歲，中位年齡54歲；高分化腺癌5例，中分化腺癌14例，低分化腺癌27例，印戒細胞癌11例，黏液腺癌5例。臨床分期依據1997年國際抗癌聯盟(UICC)TNM分期標準，Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ 39例；淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移35例。所有患者術前均未接受化療、放療及其他治療。同時在標本中取胃腺上皮不典型增生22例，正常胃組織20例。

1.2 方法

所有標本均經過10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4 μm厚的切片，采用免疫組化SP法進行COX-2、CD4及CD8染色。兔抗人COX-2多克隆抗體、MAB-0021鼠抗人CD8單克隆抗體、Rev 021602 鼠抗人CD4單克隆抗體，封閉用正常山羊血清工作液、生物素標記二抗工作液、過氧化物酶標記鏈霉素卵白素工作液。抗體均為美國Santa Cruz公司產品，購自北京中杉京橋生物技術有限公司。免疫組化染色按SP試劑盒操作說明進行，工作液濃度均為1∶150。

1.3 結果判定

COX-2、CD4、CD8均以細胞質出現棕黃色細胞顆粒為陽性細胞。按陽性細胞比例，組織蛋白表達強度分級：0個細胞著色為(-)；陽性細胞數<25%為(+)；陽性細胞數25%～50%為(++)；陽性細胞數>50%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 胃不同病變組織COX-2 、CD4、CD8蛋白的表達

腺癌組織與腺上皮異型增生組織的COX-2表達高于正常胃上皮組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。胃腺上皮異型增生組織中COX-2表達隨分化程度加重逐漸升高，而高分化、中分化腺癌的COX-2表達顯著高于低分化腺癌(P<0.05)；腺癌組與非典型增生組間COX-2表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。腺癌組織與腺上皮異性增生組織的CD4、CD8表達低于正常胃上皮組織，差異具有顯著意義(P<0.05)，見表1。

表1 COX-2、CD4及CD8在不同胃組織中的陽性表達

2.2 胃癌中COX-2，CD4及CD8表達與臨床病理特征的關系

有淋巴結轉移者較無淋巴結轉移者COX-2表達低(P<0.05)。COX-2的表達隨著浸潤深度的增加而逐漸降低，但組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。不同臨床病理特征的胃癌組織中CD4、CD8表達的差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

2.3 胃癌中COX-2，CD4及CD8表達的相關性分析

在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者之間呈負相關，其相關性有統(tǒng)計學意義(γ=0.73，P<0.05)。

表2 COX-2，CD4及CD8表達與胃癌臨床病理特征的關系

3 討論

環(huán)氧化酶(cyclooxgenease，COX)，是前列腺素(PGs)合成過程中的1個主要限速酶，可將花生四烯酸(AA)代謝成各種前列腺素產物，從而參與機體多種病理生理過程，如炎癥、發(fā)熱、凝血機制等。近年來國內外研究發(fā)現，許多癌前病變和惡性腫瘤中COX-2高表達，如胃腸上皮化生、胃癌、結腸癌、乳腺癌、食管癌和肺癌等，與正常組織相比有顯著性差異。

有關胃不同病變組織中COX-2表達的臨床生物學意義研究結果不一。Sung等[2]的研究結果表明胃癌中的COX-2表達與臨床病理特征無關。Zaridze等[3]研究則認為COX-2高表達者組織學分化差且更具有侵襲性。此外，Akre等[4]的研究提示分化型胃癌的COX-2表達高于低分化者。COX-2高表達在不典型增生階段即已存在，且與正常組織相比，其表達差異有統(tǒng)計學意義，因此，COX-2高表達可能是胃癌發(fā)生的早期標志。本研究采用免疫組化SP法對胃不同病變組織中COX-2的表達進行檢測，結果顯示，COX-2在胃腺癌和腺上皮不典型增生中的表達顯著高于胃正常黏膜上皮，提示COX-2可能在胃腺癌發(fā)生中起作用，COX-2表達增高有可能是胃癌變的早期標志物。我們研究發(fā)現，高分化及中分化腺癌的COX-2表達顯著高于低分化腺癌，淋巴結轉移陰性組的COX-2表達顯著高于淋巴結轉移陽性組，提示在胃腺癌中，COX-2表達越低，其生物學行為越差，與Akre等的研究結果一致，這可能是由于分化差的腺癌細胞部分已去分化，導致COX-2抗議的表達降低。因此，COX-2表達增高可能是胃黏膜上皮癌變的早期事件。

機體主要通過細胞免疫機制在發(fā)揮抗腫瘤免疫效應。細胞毒T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)是機體細胞免疫中重要的效應細胞，參與機體的抗瘤效應。CTL主要是CD8T淋巴細胞，其主要功能是特異性殺傷靶細胞，細胞毒T淋巴細胞TCR特異性識別腫瘤細胞表面的抗原肽-MHC-I類分子復合物，被激活后增殖分化為具有特異性殺傷活性的CTL，介導腫瘤細胞壞死或凋亡。另外，CD4T淋巴細胞有著較強的分泌細胞因子的功能，能分泌IL-2、IL-3、IFNγ、TNF-α、 GM-CSI 等，參與對機體免疫反應的調節(jié)及一些免疫病理過程，其中TNF-α等可直接殺傷靶細胞；而其他一些細胞因子可通過促進CD4T細胞增殖、分化和激活而間接地影響其靶細胞的殺傷[5～7]。我們的研究發(fā)現胃腺癌組織與腺上皮異型增生組織的CD4、CD8表達低于正常胃上皮組織，差異具有顯著意義(P<0.05)。在胃癌中COX-2，CD4及CD8表達的相關性分析證實在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者之間呈負相關，其相關性有統(tǒng)計學意義。通過以上研究結果，在胃黏膜上皮癌變過程中，COX-2表達逐漸增高，而CD4、CD8表達逐漸降低，兩者表達呈負相關，可以認為COX-2是通過抑制CD4T、CD8T細胞的細胞毒反應來抑制機體的免疫反應。亦可以認為抑制機體的免疫反應是COX-2促進腫瘤發(fā)生的又一分子機制。

綜上所述，COX-2高表達可能是胃癌變過程中的早期事件。COX-2與CD4及CD8的表達呈負相關，COX-2抑制機體CD4及CD8表達的具體機制有待于進一步研究。

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[4]Akre k,Ekstrom A M,Signorello L B,et al.Aspirin and risk for gastric cancer :a population-based case-control study in Sweden〔J〕.Br J Cancer,2001,84(7):965.

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