張麗萍,陳健剛,蒲紅偉，付志敏，楊 昊

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，烏魯木齊 830054；2.新疆醫(yī)科大學(xué)高職學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830054；3.新疆公安廳物證鑒定中心，烏魯木齊 830006)

人類Y染色體屬于性染色體,除小部分?jǐn)M常染色體區(qū)外,其余大部分為非重組的特異區(qū)域,具有男性伴性遺傳的特點(diǎn),其基因座的多態(tài)性分布因種族、民族、地域的不同具有明顯差異,在法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別、親緣關(guān)系分析、群體遺傳學(xué)分析和人類起源、進(jìn)化等方面具有重要意義[1-2]。新疆昌吉地區(qū)位于天山北麓、準(zhǔn)噶爾盆地東南部，其境內(nèi)維吾爾族人口的絕大多數(shù)居住在吉木薩爾、奇臺(tái)一帶[3-4]。筆者采用AmpFlSTR YfilerTM擴(kuò)增試劑盒,調(diào)查分析了昌吉地區(qū)維吾爾族17個(gè)Y-STR基因座 (DYS456、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS458、DYS19、DYS385、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、GATA_H4、DYS437、DYS438和DYS448)的遺傳多態(tài)性,以期為該民族群體Y-STR資料的完善、人類學(xué)和法醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)知情同意原則，對(duì)居住在昌吉地區(qū)的吉木薩爾、奇臺(tái)3代以上的維吾爾族群體追溯其家族史,隨機(jī)采集無(wú)可查親緣關(guān)系的健康男子末梢血并制成血卡，共計(jì)154份。

1.2方法

1.2.1DNA提取及擴(kuò)增 采用Chelex法[5]提取DNA，使用AmpFlSTR YfilerTMPCR Amplification試劑盒,按照擴(kuò)增總體系12.5 μL：PCR反應(yīng)液4.6 μL，引物溶液2.5 μL，金牌Taq酶0.4 μL，模板DNA溶液5.0 μL，在ABI9700型擴(kuò)增儀(美國(guó)，ABI公司)上進(jìn)行，PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序(見試劑盒說(shuō)明)。擴(kuò)增過(guò)程中設(shè)置9947A(女性模板DNA標(biāo)準(zhǔn)品)為陰性對(duì)照，007(男性模板DNA標(biāo)準(zhǔn)品)為陽(yáng)性對(duì)照，

1.2.2擴(kuò)增產(chǎn)物電泳及檢測(cè) 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)甲酰胺變性后，在ABI3130XL型遺傳分析儀(美國(guó)，ABI公司)上進(jìn)行電泳，電泳總體系為10 μL(甲酰胺為9.25 μL；Liz500為0.25 μL；擴(kuò)增產(chǎn)物為0.5 μL)。使用Data Collection 2.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集，GeneMapper ID v3.3軟件進(jìn)行分析,得到Y(jié)-STR的分型結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各基因座的等位基因頻率與單倍型檢出頻率用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算,基因多樣性(GD)及單倍型多樣性(HD)按公式h=n(1-ΣPi2)/(n-1)(n為樣本例數(shù),Pi為等位基因頻率)計(jì)算[6]。

2 結(jié) 果

新疆昌吉地區(qū)維吾爾族154名無(wú)關(guān)男性個(gè)體17個(gè)Y-STR基因座相關(guān)基礎(chǔ)遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。17個(gè)Y-STR基因座中共檢出151個(gè)單倍型，其中，148種單倍型只觀察到1次,3種單倍型觀察到2次。在DYS456、DYS389Ⅰ、DYS390、DYS389Ⅱ、DYS458、DYS19、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、Y-GATA-H4、DYS437、DYS438和DYS448基因座分別檢出6、4、7、6、7、6、4、6、5、8、8、4、5、5和6個(gè)等位基因；各基因座多樣性GD值分別為0.529 7、0.604 3、0.732 8、0.742 4、0.811 8、0.749 0、0.618 7、0.548 1、0.721 1、0.827 2、0.691 1、0.660 0、0.547 3、0.633 1和0.736 2。在DYS385a/b基因座共檢出45種單倍型,其基因多樣性GD值為0.959 9(見表1、2)。

表1 昌吉維吾爾族男性15個(gè)Y-STR基因座頻率分布(n=154)

GD:gene diversity。-:無(wú)數(shù)據(jù)。

表2 昌吉維吾爾族男性DYS385a/b基因座單倍型頻率分布(n=154)

續(xù)表2 昌吉維吾爾族男性DYS385a/b基因座單倍型頻率分布(n=154)

GD=0.959 9。

3 討 論

本研究采用五色熒光復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，所檢測(cè)的17個(gè)Y-STR基因座未見GD值在0.5以下的基因座，除DYS456、DYS391、DYS437外，其余基因座的GD值都大于0.6；154個(gè)樣本共檢出151種不同的單倍型,單倍型多樣性(HD)為0.999 7，表明該17個(gè)Y-STR基因座基因頻率在新疆昌吉維吾爾族男性個(gè)體中有較好分布,具有很高的個(gè)體和家族多樣性,是個(gè)體及家族識(shí)別的理想遺傳標(biāo)記；并初步提示這些基因座在新疆維吾爾族人群中具有較高的識(shí)別力。本次調(diào)查中在一些基因座未觀察到相應(yīng)的等位基因；同時(shí)也未發(fā)現(xiàn)檢測(cè)出的等位基因超出了標(biāo)準(zhǔn)等位基因階梯范圍的現(xiàn)象，與漢族群體的研究報(bào)道結(jié)果明顯不同[7-9]，進(jìn)一步表明Y-STR基因座基因頻率分布具有明顯的地域和種族差異。

Y染色體STR基因座多態(tài)性研究可為法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定提供新的手段，在諸如父系家族的親權(quán)鑒定、混合斑男性成分的檢測(cè)、不同男性個(gè)體混合物的分析、無(wú)名男尸的身份確定、追溯父系遷移歷史及重構(gòu)同一父系家族等方向都具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值[10-11]。維吾爾族是新疆的主要民族，研究該少數(shù)民族男性Y-STR的多態(tài)信息，可以對(duì)其起源、遷徙、交流、民族基因特點(diǎn)等法醫(yī)學(xué)和遺傳學(xué)方面的信息有一定的掌握。本調(diào)查結(jié)果初步獲得了新疆昌吉維吾爾族男性群體17個(gè)Y-STR基因座的基因頻率及基因變異度值，以及各基因座在該群體中個(gè)體識(shí)別率的差異，可為新疆維吾爾族群體17個(gè)Y-STR的單倍型頻率與累積個(gè)體識(shí)別率提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料[12]。目前研究顯示，不同地域與不同人群之間 Y-STR 單倍型分布的變異度較大[13-15]。因此，建立新疆地區(qū)維吾爾族人群的Y-STR等位基因頻率、單倍型數(shù)據(jù)資料必不可少，可為進(jìn)一步開展法醫(yī)學(xué)親子鑒定和個(gè)體識(shí)別、人類起源和進(jìn)化研究與應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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