羅 儀，王 輝，巫貴成，劉書宏，譚建國(guó)

(重慶三峽中心醫(yī)院 1.輸血科，2.肝病中心，重慶 404100)

肝硬化是一種常見(jiàn)的慢性肝臟疾病，是由一種或多種誘因長(zhǎng)期或反復(fù)作用引起的肝臟彌漫性損害［1］。近年來(lái)，有研究發(fā)現(xiàn)胚胎干細(xì)胞可在體外成功分化為肝細(xì)胞，但是干細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后，能否成功轉(zhuǎn)化為正常肝細(xì)胞參與機(jī)體代謝發(fā)生生化功能及其療效穩(wěn)定性等目前仍不清楚［2］。本研究旨在通過(guò)分析58例肝硬化病例的術(shù)前后情況，探究自體骨髓源性干細(xì)胞移植術(shù)在各型肝硬化治療中的應(yīng)用價(jià)值，從而為以后的治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2008年6月-2010年12月，我院經(jīng)肝組織病理學(xué)檢查確診的肝硬化患者58例，隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各29例，其中男性38例，女性20例，年齡分布為21～54歲，平均年齡43.5歲，Child分級(jí)均為C級(jí)，乙肝后肝硬化34例，酒精性肝硬化13例，藥物中毒后肝硬化3例，隱源型肝硬化8例。兩組觀察對(duì)象的年齡、性別、誘因、腹水量、肝功能等基線信息經(jīng)調(diào)整后，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。病例排除標(biāo)準(zhǔn)［3］:(1)年齡低于18歲，或高于56歲;(2)有手術(shù)禁忌癥(如:高血壓、心臟病、癲癇等);(3)不愿配合進(jìn)行干細(xì)胞移植治療者;(4)具有其他不可行移植術(shù)因素(如:妊娠、哺乳等)。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 所有觀察對(duì)象在住院期間，行常規(guī)保肝治療并臥床休息。在此基礎(chǔ)上，治療組采用經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓源性干細(xì)胞移植治療，對(duì)照組采用同樣途徑注入同等體積的生理鹽水。

在無(wú)菌條件下，選擇髂后上棘做為骨髓液采集點(diǎn)，進(jìn)行多點(diǎn)穿刺采集，抽取肝素抗凝的骨髓液約200 mL，4℃保存，用于骨髓干細(xì)胞的分離。骨髓有核細(xì)胞分離方法按照骨髓臍帶血有核細(xì)胞體外分離試劑盒(寧夏中聯(lián)達(dá)生物有限公司)說(shuō)明進(jìn)行，淋巴細(xì)胞分離液法則按照密度梯度離心法進(jìn)行有核細(xì)胞分離。調(diào)整細(xì)胞濃度后送本院介入室，4℃保存?zhèn)溆?。并?.5～1 h進(jìn)行經(jīng)肝動(dòng)脈骨髓干細(xì)胞移植術(shù)［4］。在電子血管減影造影(DSA)下行肝動(dòng)脈造影，經(jīng)肝動(dòng)脈將骨髓干細(xì)胞注入體內(nèi)［5］。術(shù)后根據(jù)具體情況，給予預(yù)防性抗感染3～7 d，及肝動(dòng)脈插管術(shù)后常規(guī)護(hù)理。術(shù)后觀察兩組肝功能指標(biāo)及凝血指標(biāo)、腹水等客觀指標(biāo)及食欲、體力、腹脹等主觀指標(biāo)，并對(duì)其進(jìn)行比較。

1.2.2 觀察指標(biāo) 檢測(cè)治療前后丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、血漿白蛋白(ALB)、凝血酶原時(shí)間(PT)、腹水、食欲、體力、腹脹等，患者腹水量采用B超檢測(cè)。

1.2.3 療效判斷［6］顯效:主觀指標(biāo)與客觀指標(biāo)有兩項(xiàng)以上明顯改善;有效:主觀指標(biāo)與客觀指標(biāo)有一項(xiàng)以上顯著改善;無(wú)效:主觀指標(biāo)或客觀指標(biāo)僅有一項(xiàng)改善或改善不明顯，甚至加重?？傆行?(顯效+有效)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)量資料以 (±s)表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用率表示，進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，術(shù)后兩組療效比較采用秩和檢驗(yàn)，以雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

見(jiàn)表1。經(jīng)檢驗(yàn)，兩組一般資料均衡可比(P＞0.05)。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組術(shù)后客觀指標(biāo)比較

見(jiàn)表2。術(shù)后治療組ALB、TBIL以及PT與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，治療組ALT、AST顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)。治療組腹水量顯著少于對(duì)照組(P＜0.01)。

表2 兩組術(shù)后肝功能及凝血指標(biāo)比較(n=29，±s)

表2 兩組術(shù)后肝功能及凝血指標(biāo)比較(n=29，±s)

與對(duì)照組比較:1P＜0.05，2P＜0.01

組 別 ALB/(g/L) ALT/(u/L) AST/(u/L) TBIL/(μmol/L) PT/s 腹水量/mL對(duì)照組21±4 73±11 67±15 41±15 17±4 16.4±4.7治療組 42±61 36±72 23±52 16±41 6±31 8.3±2.12

2.3 兩組術(shù)后主觀指標(biāo)比較

見(jiàn)表3。術(shù)后治療組腹脹改善、食欲改善、體力改善等情況均優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05)。

2.4 兩組術(shù)后療效比較

見(jiàn)表4。治療組顯效9例，有效16例，無(wú)效4例，總有效率為86.2%;對(duì)照組顯效2例，有效12例，無(wú)效15例，總有效率為48.3%。治療組總有效率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表3 兩組術(shù)后主觀指標(biāo)比較

表4 比較兩組術(shù)后療效

3 討論

肝硬化發(fā)病誘因多樣化，可由酒精性、肝炎、藥物中毒、血吸蟲、膽汁淤積、腸道感染等因素引起［6］。且發(fā)病早期，由于肝臟具有較強(qiáng)的代償功能，可呈現(xiàn)隱匿性，難以及時(shí)發(fā)現(xiàn)，從而給早期診治與預(yù)后造成嚴(yán)重影響［7］。發(fā)展至疾病后期，超出肝臟代償能力后可出現(xiàn)多器官多系統(tǒng)失代償損傷，常以肝功能損害和門脈高壓為主要的臨床表現(xiàn)，常伴有下消化道出血，肝性腦病，肝癌等嚴(yán)重疾病。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，骨髓內(nèi)干細(xì)胞為初級(jí)分化狀態(tài)，可進(jìn)行“橫向分化”，通過(guò)不同條件誘導(dǎo)增殖分化為軟骨、脂肪、肌肉、肝、神經(jīng)、心肌細(xì)胞等多系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)［8-9］。國(guó)內(nèi)外關(guān)于人骨髓干細(xì)胞在體內(nèi)、體外誘導(dǎo)增殖為肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)性研究已趨于成熟。近年來(lái)，經(jīng)肝動(dòng)脈進(jìn)行自體骨髓間充質(zhì)或臍間充質(zhì)干細(xì)胞移植術(shù)治療各型肝硬化已發(fā)展為臨床治療肝硬化的重要手段［10-11］。但其安全性及療效穩(wěn)定性尚無(wú)定論，有待進(jìn)一步研究。

本研究資料分析表明，術(shù)后治療組ALB顯著高于對(duì)照組，而TBIL、PT、ALT與AST顯著低于對(duì)照組。主觀感受的改變方面，治療組術(shù)后腹脹改善、食欲改善、體力改善等情況均優(yōu)于對(duì)照組。且治療組總有效率顯著高于對(duì)照組。四種肝硬化療效比較中發(fā)現(xiàn)，以乙型肝炎后肝硬化療效最差，以酒精性肝硬化療效最為顯著。

綜上所述，采用自體骨髓源性干細(xì)胞移植術(shù)治療肝硬化可對(duì)患者肝功能、主觀感受有一定程度改善作用。且四種肝硬化療效中，以酒精性肝硬化療效最為顯著。

［1］ 鄧小耿，宋爾衛(wèi)，閔 軍，等.胚胎干細(xì)胞源性肝干細(xì)胞肝內(nèi)移植對(duì)宿主肝功能的影響及安全性評(píng)估［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12(8):1591-1593.

［2］ 董 毅，朱太崗，張飛虎，等.自體外周血干細(xì)胞治療肝硬化35例療效分析［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2011，9(1):29-31.

［3］ Tanaka M，Itoh T，Tanimizu N，et al.Liver stem/progenitor cells:their characteristics and regulatory mechanisms［J］.J Biochem，2011，149(3):231-239.

［4］ 傅 念，陽(yáng)學(xué)風(fēng)，吳 清，等.經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療不同病因肝硬化12例［J］.世界華人消化雜志，2010，18(21):2274-2278.

［5］ Bianca G，Regina C，Lea M B，et al.Bone marrow mononuclear cell therapy for patients with cirrhosis:a Phase 1 study［J］.Liver Int，2011，31(3):391-400.

［6］ Hentrich M，Schiel X，Oduncu F，et al.Mobilization of peripheral blood stem cells and autologous stem cell transplantation in HIV-related malignancies［J］.Bone Marrow Transplant，2011，46(1):873.

［7］ 林 滬，陳黎明，施 明，等.間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝臟疾病的研究進(jìn)展［J］.實(shí)用肝臟病雜志，2010，13(6):460-463.

［8］ Jaime，Juan G，Annalisa，et al.The clinical use of HVPG measurements in chronic liver disease［J］.Nat Rev Gastroenterol Hepatol，2009，9(3):1023-1026.

［9］ Diarmaid D H，Philip N N.Clinical trails of marrow stem cells in treating liver disease［J］.Chin Cell Stem Cell Transplant，2010，1(3):310-320.

［10］ Christ B，Dollinger，Matthias M.The generation of hepatocytes from mesenchymal stem cells and engraftment into the liver［J］.Curr Opin Organ Transplant，2011，16(1):69-75.

［11］田玉玲.自體骨髓干細(xì)胞移植治療因肝硬化研究進(jìn)展［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2011，32(6):499-502.