林小鳳 ，張 慧，隋 臻，羅格蓮，許瑞安

(1.華僑大學分子藥物學研究所，福建 泉州 362021;2.分子藥物教育部工程研究中心，福建 泉州 362021;3.新疆醫(yī)科大學 藥學院 新疆 烏魯木齊 830011;4.福建生物工程職業(yè)技術學院，福建 福州 350002)

七葉蓮(Schefflera arboricola Hayata)，五加科鵝掌柴屬植物七葉蓮，別名小葉鴨腳木、漢桃葉、七葉爛、七葉藤、七加皮、狗腳蹄、沒骨消等，產(chǎn)于福建、臺灣、廣東等地，全年可采，以根、莖、葉入藥［1］。本品性苦味甘，祛風除濕，活血止痛，對三叉神經(jīng)痛、偏頭痛、各種癌癥及手術后的疼痛等均有良好的療效?！吨袊幍洹?一部)1977年版對七葉蓮有收載。近年來，一些學者對其藥理作用，植物化學成分開展了大量研究［2-4］。為了明確七葉蓮抗炎鎮(zhèn)痛的活性部分，進一步開發(fā)利用福建地道藥材七葉蓮以及控制七葉蓮的質(zhì)量，本文對其用不同溶劑提取的提取物的作用分別進行了研究。

1 材料

七葉蓮，采自福建省泉州市清源山，經(jīng)本研究所劉建福副教授鑒定為Schefflera arboricola Hayata;七葉蓮莖水提浸膏(“中僑水提浸膏”)由泉州中僑(集團)股份有限公司藥業(yè)公司饋贈。

二甲苯(批號:20100126，沈陽市新化試劑廠生產(chǎn));角叉菜膠(批號:G1013-05G，Sigma公司產(chǎn)品);吲哚美辛(批號:840643，上海第十七制藥廠);醋酸地塞米松(批號:091105，浙江仙琚制藥股份有限公司);其余試劑均為分析純。

小鼠足趾測定裝置，根據(jù)毛細管放大法，用導管、活塞和移液管等自制而成。

清潔級昆明種小鼠，雌雄兼用，體重20～22 g，購自福州市吳氏實驗動物中心，合格證號:2007000516322。喂食鼠顆粒飼料和自來水，給藥前禁食12 h。

2 方法與結果

2.1 不同提取工藝七葉蓮的抗炎鎮(zhèn)痛作用比較

2.1.1 七葉蓮葉揮發(fā)油提取與分離 取新鮮七葉蓮葉15 kg，水蒸汽蒸餾取餾出液，用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液，減壓蒸餾回收乙醚，用無水硫酸鈉干燥24 h后，過濾，得到具有特殊氣味的無色揮發(fā)油5.97 g(即“揮發(fā)油”組)。

2.1.2 七葉蓮不同提取工藝浸膏 分別用95%乙醇回流提取、50%乙醇超聲波提取、50%乙醇微波提取3次，每次1 h，合并濾液減壓濃縮成浸膏“95%乙醇”組、“50%乙醇超聲”組和“50%乙醇微波”組，真空冷凍干燥備用。

2.1.3 七葉蓮莖水提浸膏不同提取部分 稱取七葉蓮莖水提浸膏真空凍干后粉末500 g，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇索氏提取兩次，合并兩次濾液，得到石油醚部分(7.20 g)、氯仿部分(13.83 g)、乙酸乙酯部分(18.34 g)、正丁醇部分(49.04 g)及剩余部分(311.6 g)。各提取部分用2%吐溫80定容至50 mL，稀釋10倍為高劑量組:石油醚部分(14.4 mg/kg)、氯仿部分(27.6 mg/kg)、乙酸乙酯部分(36.6 mg/kg)、正丁醇部分(98 mg/kg)及剩余部分(623.2 mg/kg);高劑量組再稀釋1倍為低劑量組:石油醚部分(7.2 mg/kg)、氯仿部分(13.8 mg/kg)、乙酸乙酯部分(18.3 mg/kg)、正丁醇部分(49.0 mg/kg)及剩余部分(311.6 mg/kg)。

2.1.4 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗 小鼠130只，雌雄各半，隨機分成13組。陰性對照組給予2%吐溫80溶液10 mL/kg，連續(xù)灌胃5 d;陽性對照組給予吲哚美辛溶液0.4 mg/kg，第4天開始灌胃給藥;樣品組給予相應藥物，連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL，用相機錄像(常規(guī)方法上改進，保證記錄時間的平行性)，觀察并記錄小鼠15 min的扭體反應次數(shù)，并計算扭體抑制率。結果見表1。結果表明，與陰性對照比較，中僑水提浸膏200和100 mg/kg組，揮發(fā)油16 mg/kg組均可明顯減少小鼠的扭體次數(shù)(P＜0.01)。

表1 不同提取工藝七葉蓮對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)Tab.1 Effects of S.arboricola extracts of different extraction processes on mouse twisting induced by acetic acid(n=10，±s)

表1 不同提取工藝七葉蓮對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)Tab.1 Effects of S.arboricola extracts of different extraction processes on mouse twisting induced by acetic acid(n=10，±s)

與陰性對照比較:1P＜0.01Compared with negative control:1P＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)扭體次數(shù)/次抑制率/%陰性對照- 55.6±2.2 0陽性對照 0.4 28.3±4.81 49.1中僑水提浸膏 200 29.9±4.41 46.2中僑水提浸膏 100 38.8±3.11 30.2揮發(fā)油 16 27.0±4.21 51.4揮發(fā)油 8 40.1±3.5 27.9揮發(fā)油 4 42.8±3.7 23.0 95%乙醇 200 47.2±4，6 15.1 95%乙醇 100 47.9±5.8 13.8 50%乙醇超聲 200 43.3±4.3 22.1 50%乙醇超聲 100 52.9±5.8 4.9 50%乙醇微波 200 44.2±5.3 20.5 50%乙醇微波100 47.8±3.0 14.0

2.1.5 對二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹的影響 雄性小鼠130只，隨機分13組。陰性對照組給予2%吐溫80溶液10 mL/kg，連續(xù)灌胃給藥5 d;陽性對照組給予地塞米松溶液0.4 mg/kg，第4天開始灌胃給藥;樣品組連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，小鼠左耳正反面各注射二甲苯于10 μL致炎，15 min后脫臼致死，用直徑為8 mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圓耳片，稱重，左右耳的重量差作為腫脹度，比較組間差異顯著性。腫脹抑制率(%)=(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100%。結果見表2。與陰性對照比較，中僑水提浸膏200和100 mg/kg組，揮發(fā)油16，8和4 mg/kg組對二甲苯所致的急性炎癥均有明顯的抑制作用(P＜0.01)，且優(yōu)于陽性對照組。

表2 不同提取工藝七葉蓮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10，±s)Tab.2 Effects of S.arboricola extracts of different extraction processes on mouse swollen auricle induced by xylene(n=10，±s)

表2 不同提取工藝七葉蓮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10，±s)Tab.2 Effects of S.arboricola extracts of different extraction processes on mouse swollen auricle induced by xylene(n=10，±s)

與陰性對照比較:1P＜0.01Compared with negative control:1P＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)腫脹度/mg抑制率/%陰性對照- 13.4±0.7 0陽性對照 0.4 5.9±1.11 56.0中僑水提浸膏 200 4.9±1.11 63.4中僑水提浸膏 100 5.6±0.91 58.2揮發(fā)油 16 4.3±0.81 67.9揮發(fā)油 8 4.4±1.21 67.2揮發(fā)油 4 4.7±1.11 64.9 95%乙醇 200 9.7±0.8 27.6 95%乙醇 100 9.8±0.9 26.9 50%乙醇超聲 200 10.0±0.9 25.4 50%乙醇超聲 100 11.7±1.2 12.7 50%乙醇微波 200 12.7±1.2 5.2 50%乙醇微波100 12.9±1.1 3.7

2.2 七葉蓮莖有效部分的抗炎鎮(zhèn)痛作用

通過2.1項下七葉蓮不同提取工藝藥理作用初步篩選后，本研究取抗炎鎮(zhèn)痛活性最顯著、提取產(chǎn)率較高的七葉蓮莖水提浸膏進一步提取石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和剩余部分，進行研究。

2.2.1 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗 除了小鼠為120只，雌雄各半，分12組外，其余給藥步驟同2.1.4項。結果見表3。與陰性對照比較，氯仿部分27.66和13.83 mg/kg組，正丁醇部分98和49 mg/kg組，乙酸乙酯部分36.6 mg/kg組均可明顯減少小鼠的扭體次數(shù)(P＜0.01)，即有明顯的鎮(zhèn)痛效果。

2.2.2 對二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹的影響 除了雄性小鼠為120只，分12組，其余給藥步驟同2.1.5項，結果見表4。與陰性對照比較，氯仿部分27.66和13.83 mg/kg組，正丁醇部分98和49 mg/kg組，乙酸乙酯部分36.6和18.3 mg/kg組對二甲苯所致的急性炎癥均有明顯的抑制作用(P＜0.01)。

2.2.3 角叉菜膠誘發(fā)小鼠足腫脹的影響 雄性小鼠120只，隨機分12組。陰性對照組給予2%吐溫80溶液10mL/kg，連續(xù)灌胃給藥5 d;陽性對照組給予地塞米松溶液0.4 mg/kg，第4天開始灌胃給藥，樣品組連續(xù)灌胃給藥5 d。各組末次給藥1 h后，將1%角叉菜膠混懸液0.1 mL注入小鼠右后足跖腱膜下致炎，測量致炎后2 h小鼠右足趾體積。其值與致炎前右足趾體積差值為腫脹度。結果見表5。與陰性對照比較，氯仿部分27.66和13.83 mg/kg組，正丁醇部分98和49 mg/kg組，乙酸乙酯部分3 6.6和18.3 mg/kg組均對角叉菜膠的急性炎癥有顯著的抑制作用(P＜0.01)，其中氯仿部分27.66 mg/kg組和正丁醇部分49 mg/kg組效果最好。

表3 七葉蓮浸膏各部分對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)Tab.3 Effects of S.arboricola extracts on mouse twisting induced by acetic acid(n=10，±s)

表3 七葉蓮浸膏各部分對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(n=10，±s)Tab.3 Effects of S.arboricola extracts on mouse twisting induced by acetic acid(n=10，±s)

與陰性對照比較:1P＜0.01Compared with negative control:1P＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)扭體次數(shù)/次抑制率/%陰性對照- 54.3±3.2 0陽性對照 0.4 29.8±2.11 45.1石油醚部分 14.4 45.3±2.9 16.6石油醚部分 7.2 49.4±3.4 9.0氯仿部分 27.6 30.1±2.91 44.6氯仿部分 13.8 33.6±3.31 38.1乙酸乙酯部分 36.6 27.8±3.11 48.8乙酸乙酯部分 18.3 39.6±2.8 27.1正丁醇部分 98.0 27.2±3.21 49.9正丁醇部分 49.0 24.6±3.61 54.7剩余部分 623.2 37.2±2.5 31.5剩余部分311.6 36.9±2.8 32.0

表4 七葉蓮浸膏各部分對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10，±s)Tab.4 Effects of S.arboricola extracts on mouse swollen auricle induced by xylene(n=10，±s)

表4 七葉蓮浸膏各部分對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10，±s)Tab.4 Effects of S.arboricola extracts on mouse swollen auricle induced by xylene(n=10，±s)

與陰性對照比較:1P＜0.01Compared with negative control:1P＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)腫脹度/mg抑制率/%陰性對照 等容積12.7±1.0 0陽性對照 0.4 4.9±0.81 61.4石油醚部分 14.4 7.9±1.1 37.8石油醚部分 7.2 8.6±1.0 32.3氯仿部分 27.6 3.8±0.91 70.1氯仿部分 13.8 4.2±1.11 66.9乙酸乙酯部分 36.6 4.3±1.11 66.1乙酸乙酯部分 18.3 5.3±0.91 58.3正丁醇部分 98.0 5.1±1.21 59.8正丁醇部分 49.0 3.9±1.3 69.3剩余部分 623.2 10.6±1.1 16.5剩余部分311.6 9.6±0.9 24.4

表5 七葉蓮浸膏各部分對角叉菜膠誘發(fā)小鼠足腫脹的影響(n=10，±s)Tab.5 Effects of S.arboricola extracts on mouse swollen toes induced by carrageenan(n=10，±s)

表5 七葉蓮浸膏各部分對角叉菜膠誘發(fā)小鼠足腫脹的影響(n=10，±s)Tab.5 Effects of S.arboricola extracts on mouse swollen toes induced by carrageenan(n=10，±s)

與陰性對照比較:1P＜0.01Compared with negative control:1P＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)足腫脹度/μL抑制率/%陰性對照- 59.5±2.2 0陽性對照 0.4 24.4±3.01 59.0石油醚部分 14.4 41.3±3.8 30.6石油醚部分 7.2 44.7±2.9 24.9氯仿部分 27.6 14.5±3.51 75.6氯仿部分 13.8 36.0±2.11 39.5乙酸乙酯部分 36.6 25.9±2.81 56.5乙酸乙酯部分 18.3 28.4±3.31 52.3正丁醇部分 98.0 28.8±2.51 51.6正丁醇部分 49.0 20.1±2.81 66.2剩余部分 623.2 39.7±2.0 33.3剩余部分311.6 40.2±2.7 32.4

3 討論

七葉蓮抗炎鎮(zhèn)痛作用發(fā)揮療效的活性部分及活性成分未明確是制約七葉蓮成為抗炎鎮(zhèn)痛一線藥物的瓶頸。本研究首次通過不同提取工藝抗炎鎮(zhèn)痛作用對比，初步篩選出莖水提浸膏具有較高的抗炎鎮(zhèn)痛作用和比較理想的提取工藝后，隨后從不同極性部分進一步篩選出氯仿部分、正丁醇部分是其抗炎鎮(zhèn)痛的有效部分，其發(fā)揮作用的單體或者混合物仍需進一步探索，從本質(zhì)上講，七葉蓮抗炎鎮(zhèn)痛作用的顯著療效是否有特殊的作用機理［5］或者巧妙的靶點在起作用，值得進一步探索，這也將成為抗炎鎮(zhèn)痛領域最有意義的研究方向之一。

［1］ 南京藥學院《中草藥學》編寫組.中草藥學(中冊)［M］.南京:江蘇人民出版社，1976:742.

［2］ Zhao Zhimin，Matsunami K，Otsuka H，et al.Schefflerins A-G，New triterpene glucosides from the leaves of Schefflera arboricola Hayata［J］.Chem Pharm Bull，2010，58(10):1343-1348.

［3］ Meleka F R，Miyaseb T，Abdel Khalikc S M，et al.Triterpenoid saponins from Schefflera arboricola［J］.Phytochemistry，2003(63):401-407.

［4］ 王立業(yè)，賈 強，閻璽慶，等.紫外分光光度法測定七葉蓮中總皂苷的含量［J］.中國藥房，2008，19(15):1175.

［5］ 靳有才，魏立新，林蓉香，等.印度獐牙菜化學成分和藥理作用研究進展［J］.中國生化藥物雜志，2010，31(6):431-434.