郭春林 魏金嬰 王春艷 (吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院干部病房，吉林 長春 130021)

目前酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver，AFL)的治療方法主要有戒酒、營養(yǎng)支持、藥物、抗纖維化及肝移植等，其中中草藥治療除可改善肝酶之外，還具有抗纖維化等獨特治療作用。本課題的前期工作已經(jīng)證實，郁芝膠囊(YZCS)可以明顯降低AFL大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)水平，升高血清超氧化物歧化酶(SOD)活性〔1〕。本實驗觀察YZCS對大鼠一般狀況、肝重比和肝組織形態(tài)的影響，為其開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級雄性Wistar大鼠，體重 (200±20)g，購自吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，動物許可證編號SCXK2007-0003。動物基礎(chǔ)飼料由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。YZCS為自行研制，臨用前以蒸餾水按所需濃度配制成水溶液，冰箱保存，用時37℃水浴溫育，搖勻，備用;硫普羅辛片，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司。甲醛、乙醇為國產(chǎn)分析純試劑，購自北京化學(xué)試劑公司。儀器：電子天平，沈陽龍騰電子有限公司。光學(xué)顯微鏡，奧林巴斯工業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 模型建立〔2〕、動物分組及給藥 60只大鼠隨機分為6組，每組10只，即對照組組、模型組、陽性藥硫普羅寧組、YZCS低、中、高組。各組適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，對照組大鼠每日灌食生理鹽水0.5 ml/100 g，其余各組大鼠15%、30%酒精誘導(dǎo)模型建立各3 d，之后均每天給予45%酒精、0.5 ml/100 g灌胃。各組大鼠喂食基礎(chǔ)飼料，自由飲水。造模8 w后，第9周開始繼續(xù)造模同時按如下方法給藥：模型組給予等體積生理鹽水;硫普羅寧組灌胃給予硫普羅寧40 mg/kg;YZCS低中、高劑量組分別灌胃給予 YZCS 100、200、400 mg/kg，持續(xù)給藥 4 w。

1.2.2 檢測方法

1.2.2.1 動物一般狀況 在實驗過程中，每天觀察并記錄各組大鼠的飲食、活動、毛色、體重和死亡情況。

1.2.2.2 肝重比 第12周末處死大鼠，處死前禁食12 h，以20%烏拉坦溶液0.5 ml/100 g體重腹腔注射，麻醉后處死，迅速取出肝臟，磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液洗凈稱重，計算肝重比(肝重比=肝濕重/體重×100%)。

1.2.2.3 形態(tài)學(xué)觀察 稱重后的肝臟，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成厚度為5 μm的切片，行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠肝組織變性情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 動物一般狀況 對照組大鼠活躍，毛色光滑有光澤，模型組大鼠活動性差，毛色暗淡，YZCS低、中、高劑量組與模型組大鼠相比在活動性和毛色方面均有改善作用。

2.2 郁芝膠囊對大鼠肝重比的影響 模型組與對照組相比，肝重比顯著升高(P＜0.01)。YZCS低、中、高劑量組與模型相比，肝重比均有顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 郁芝膠囊對各組大鼠肝重比的影響(n=10，±s)

表1 郁芝膠囊對各組大鼠肝重比的影響(n=10，±s)

與對照組相比：1)P ＜0.01;與模型組相比：2)P ＜0.05，3)P ＜0.01

對照組467.1±2.5 10.66±0.21 2.28±0.05模型組 508.8±4.41) 16.68±0.231) 3.28±0.041)硫普羅寧組 515.3±4.42) 14.99±0.352) 2.91±0.072)郁芝膠囊組100 mg/kg 511.1±4.72) 15.68±0.492) 3.07±0.082)200 mg/kg 512.0±5.82) 14.41±0.342) 2.81±0.062)400 mg/kg 509.7±5.23) 12.68±0.343) 2.49±0.063)

2.3 大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察 見圖1。對照組HE標本可見肝細胞正常，以中央靜脈為中心呈放射狀排列，未見脂滴及炎性浸潤;模型組大鼠肝組織HE染色標本可見肝細胞病變以中重度脂肪變性為主，壞死少見，伴有大量的炎性浸潤，但未見明顯的膠原纖維;硫普羅寧組及YZCS低、中、高劑量組大鼠肝組織切片與模型組相比脂滴明顯減少，僅伴有少量炎細胞浸潤，細胞輪廓清晰，排列較模型組規(guī)則。

圖1 肝臟組織切片形態(tài)學(xué)觀察(×400)

3 討論

脂肪性肝病(FLD)是指各種原因引起的肝細胞內(nèi)過多的脂肪堆積。臨床上FLD根據(jù)是否飲酒及飲酒量分為酒精性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)。AFLD是由于長期大量飲酒所致的肝臟疾病，初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進而可發(fā)展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化，嚴重酗酒時可誘發(fā)廣泛肝細胞壞死甚或肝衰竭〔3〕。

正常人肝臟重量1 200～1 500 g，長期、持續(xù)大量飲酒時，脂肪代謝紊亂，如脂肪酸的氧化率下降、TG的合成增加、脂肪的輸出減少以及肝外的脂肪動員增加等，導(dǎo)致AFL發(fā)生，引起肝臟重量增加〔4〕。脂肪變性是AFL最常見的肝臟病變，肉眼觀，肝大而軟，黃色，肝細胞內(nèi)含有脂滴，多者可將胞核推向一側(cè)，肝細胞腫大變圓;小葉中央?yún)^(qū)受累明顯，有時伴有不同程度的肝細胞水樣變性。單純的脂肪肝常無癥狀。如病變未發(fā)展到纖維化，戒酒可使脂肪肝恢復(fù)〔5〕。

本實驗中YZCS能夠有效防治脂肪肝。從ALFD的發(fā)病機制上看，AFL的高TG血癥來源于乙醇及其氧化產(chǎn)物與肝內(nèi)脂質(zhì)代謝的相互作用，乙醇以及活性氧在線粒體損傷中起主要作用。乙醇毒性的早期靶器官首先為線粒體，其次為微粒體，從而影響脂肪酸的β氧化，阻礙蓄積脂肪酸的清除，最終形成脂肪肝〔6〕。此外，近年來有人提出以氧應(yīng)激為中心的“二次打擊”假說〔5〕，國內(nèi)外學(xué)者普遍認為 AFL中細胞色素 P450ⅡE1(CYP2E1)在酒精代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基是造成AFL損傷的重要環(huán)節(jié)〔6〕。

實驗中YZCS是將云芝多糖和郁金以一定比例混合而成，組方中的云芝多糖可以抑制脂肪酶的活性，減弱機體對脂肪的消化能力，從而減少脂肪在體內(nèi)的蓄積，有效防止因攝取過多脂肪而導(dǎo)致的疾病〔7，8〕。郁金化學(xué)成分為揮發(fā)油、姜黃素、姜黃酮等，其藥理作用為保護肝細胞膜、促進肝細胞再生、去脂、抗自由基、抗炎、抑制肝細胞纖維化和抑制肝細胞凋亡〔9〕。本實驗的前期工作已經(jīng)證實YZCS能降低血清轉(zhuǎn)氨酶，改善肝功能，對抗肝臟毒性病變〔1〕。本實驗將YZCS以一定劑量治療AFL大鼠后，不僅使實驗大鼠的肝臟組織結(jié)構(gòu)得到了明顯改善，在一般狀況及肝重比方面也取得了良好的治療效果。由此可見，YZCS可從發(fā)病機制上防治AFL，且療效顯著，為YZCS的進一步開發(fā)和利用奠定了基礎(chǔ)。

1 李 丹，郭春林，王春艷.郁芝膠囊對大鼠酒精性脂肪肝的治療作用〔J〕. 中國老年學(xué)雜志，2012;22(6)：1200-2.

2 張勁松，吳 鐵，鄒麗宜.小鼠酒精性脂肪肝模型的建立〔J〕.中外健康文摘，2011;8(30)：96-8.

3 田麗艷，陸倫根.2010年美國肝病學(xué)會酒精性肝病指南解讀〔CD〕.中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版)，2011;3(1)：14-6.

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5 Savas MC，Koruk M，Pirim I，et al.Serum ubiquitin levels in patients with nonalcoholic steatohepatitis〔J〕.Hepatogastroenterology，2003;50(51)：738-41.

6 孟祥偉，遲寶榮，高沿航，等.細胞色素P450Ⅱ E1-基因多態(tài)性在酒精性肝病發(fā)病中的意義〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版，2003;29(4)：451-3.

7 孫設(shè)宗，唐 微，張紅梅，等.云芝多糖對小鼠實驗性肝損傷保護作用的研究〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008;18(9)：1217-20.

8 莫永炎，姜 勇，陳 瑗，等.云芝多糖對腦、肝組織的抗氧化作用研究〔J〕. 中國藥理學(xué)通報，2001;17(6)：628-31.

9 趙 昱，劉蜻蜻，徐 艷，等.天然藥物防治非酒精性和酒精性脂肪肝的研究進展〔J〕.國際藥學(xué)研究雜志，2010;37(6)：408-25.