史 鵬 安東善 (吉林省人民醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

許多非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者在術(shù)后積極進(jìn)行了化療，但仍很快出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。造成這種現(xiàn)象的主要原因是多藥耐藥(MDR)的產(chǎn)生，其形成是多因素的〔1〕，不同類(lèi)型肺癌的耐藥表型亦不同。本實(shí)驗(yàn)探討MDR因子的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院病理科2010年10月至2011年10月肺癌組織石蠟包埋標(biāo)本 (均為未接受過(guò)抗腫瘤治療的NSCLC患者)，通過(guò)纖維支氣管鏡活檢獲取，均經(jīng)病理診斷為肺癌，共56例，其中男36例，女20例，中位年齡56歲。病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：分型按WHO(1981年)標(biāo)準(zhǔn)，分期按照國(guó)際肺癌研討會(huì)第7版肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中鱗癌31例、腺癌25例;Ⅰ期10例，Ⅱ期16例，Ⅲ期24例，Ⅳ期6例;低分化26例，中高分化30例。

1.2 方法 即用型鼠抗人 P-糖蛋白(P-gp)、肺耐藥蛋白(LRP)單克隆抗體及即用型第二代免疫組化Elivision TM plus廣譜試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。以既往陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。

1.3 結(jié)果判定 P-gp細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜呈棕黃色著色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，LRP細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核呈棕黃色著色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為陰性，＞10%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPLM中文統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC耐藥因子表達(dá)與肺癌病理類(lèi)型的關(guān)系 耐藥因子LRP陽(yáng)性表達(dá)在腺癌〔22例(88.0%)〕中明顯高于鱗癌〔16例(51.6%)〕(P＜0.05);P-gp陽(yáng)性表達(dá)在腺癌〔18例(72.0%)〕中也明顯高于鱗癌〔15例(48.4%)〕。

2.2 耐藥因子表達(dá)與TNM分期的關(guān)系 各耐藥因子P-gp、LRP陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期無(wú)明顯相關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 耐藥因子表達(dá)與NSCLC的TNM分期的關(guān)系〔n(%)〕

2.3 耐藥因子表達(dá)與分化程度的關(guān)系 P-gp在低分化中的表達(dá)〔14例(53.8%)〕低于高分化〔23例(76.7%)〕;LRP在低分化中的表達(dá)〔18例(69.2%)〕也低于高分化〔26例(86.7%)〕。可見(jiàn)各耐藥因子表達(dá)與分化程度有明顯相關(guān)性(P＜0.05)。

2.4 MDR因子共表達(dá)情況 P-gp與LRP共陽(yáng)性表達(dá)〔23例(41.1%)〕僅 P-gp陽(yáng)性〔29例(51.7%)〕，僅 LFP陽(yáng)性〔34例(60.7%)〕，P-gp與 LRP具有相關(guān)性(P＜0.01)。

3 討論

目前研究發(fā)現(xiàn)，藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的改變(外排增加)導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降是MDR發(fā)生的關(guān)鍵因素之一。已發(fā)現(xiàn)與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的膜糖蛋白主要有MDR相關(guān)蛋白1(MRPl)、LRP和P-gP等多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。

P-gp是mdr1基因的蛋白產(chǎn)物，屬于ABC(ATP-binding cassette)超家族成員，能通過(guò)ATP水解釋放能量將藥物運(yùn)至細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，從而產(chǎn)生耐藥〔2〕。本實(shí)驗(yàn)提示MRP1/P-gp介導(dǎo)的耐藥在肺癌的MDR中起一定的作用。而近來(lái)還有實(shí)驗(yàn)證明MRP1/P-gp的陽(yáng)性高表達(dá)率與藥敏檢測(cè)化療藥物抑癌率結(jié)果無(wú)明顯相關(guān)性，提示MRP1/P-gp的表達(dá)可能與肺癌的其他機(jī)制有關(guān)〔3〕。

LRP廣泛分布在人體體腔上皮、分泌器官等正常組織中〔4〕，其作用機(jī)制是阻止以細(xì)胞核為靶點(diǎn)的藥物通過(guò)核孔進(jìn)入細(xì)胞核，并將藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)的囊泡中，以胞吐的方式排到細(xì)胞外;其過(guò)表達(dá)明顯影響藥物的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和分布，致靶點(diǎn)藥物有效濃度下降而耐藥〔5〕。Rubarova等〔6〕發(fā)現(xiàn)肺癌組織中廣泛表達(dá)LRP基因及其蛋白，而且LRP蛋白表達(dá)陽(yáng)性的肺癌細(xì)胞耐藥譜廣，LRP能介導(dǎo)與MDR相關(guān)的藥物耐藥。本研究提示LRP在NSCLC的固有化療耐藥機(jī)制中起著一定的作用。因此，化療前對(duì)NSCLC患者檢測(cè)LRP表達(dá)，對(duì)于預(yù)測(cè)NSCLC對(duì)上述藥物的耐藥有著積極的指導(dǎo)意義。

肺癌耐藥為一多途徑多基因參與的過(guò)程，聯(lián)合檢測(cè)肺癌組織中耐藥相關(guān)基因的表達(dá)有助于判斷化療療效。P-gp，LRP的表達(dá)與NSCLC的耐藥性呈明顯的相關(guān)性，并與表達(dá)程度正相關(guān)，P-gp、LRP表達(dá)及其共表達(dá)可作為檢測(cè)肺癌細(xì)胞原發(fā)性耐藥的指標(biāo)。

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