劉東芳 張寶琴 張振宇 陳 暉 趙亞婷 張成俠 陳乃耀 王大力 馮志剛 劉艷芬 訾建杰

(唐山市人民醫(yī)院血液科，河北 唐山 063000)

腦梗死后腦內(nèi)供血障礙使腦組織缺血、缺氧，腦組織發(fā)生壞死或軟化，形成腦梗死灶。相關(guān)研究表明，炎癥反應(yīng)的激活是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定的主要因素之一〔1〕。白細(xì)胞介素-6(IL-6)作為一種細(xì)胞炎癥因子在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮非常重要的作用。本文擬探討IL-6基因－572C/G、－174C/G多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集唐山地區(qū)2008年2月至2012年2月腦梗死患者202例，其中男168例，女34例;年齡39～68歲，平均(47.6±4.5)歲。根據(jù)全國(guó)第四屆腦血管病會(huì)議診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過(guò)顱CT或MRI掃描后確診。排除心源性心臟病、動(dòng)脈炎、血液病、藥敏、腦血管畸形、動(dòng)脈瘤、惡性腫瘤及嚴(yán)重外傷等引起的腦梗死。另外選取唐山地區(qū)經(jīng)過(guò)體檢正常人群185例為對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比研究，男144例，女41例，年齡38～69歲，平均(46.1±4.2)歲。

1.2 方法

1.2.1 IL-6水平檢測(cè) 受試者于清晨空腹取靜脈血5 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定血清內(nèi)IL-6含量，使用SEAC免疫測(cè)定儀、美國(guó)Genzyme產(chǎn)試劑盒。所有入選樣本分別進(jìn)行3次測(cè)定后取平均值。

1.2.2 PCR-RFLP法 清晨空腹取靜脈血4 ml，EDTA-K2抗凝，提取白細(xì)胞基因組DNA。完成后置入－80℃冰箱凍存待測(cè)。參考相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物〔2〕。提取DNA，IL-6 RCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為25 μl，10 倍 PCR 緩沖液 2.5 μl，2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μl，上下游引物分別為 20 μmol/L，模板 DNA 5.0 μl，Taq DNA聚合酶 1.25 μl，滅菌雙蒸水補(bǔ)足至 25 μl。94℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s，57℃退火1 min;72℃延伸1 min，35次循環(huán);72℃延伸5 min。取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μl，8 U Bbi I酶切IL-6基因－572位點(diǎn)，6 U Bsrb I酶切IL-6基因－174位點(diǎn)。37℃孵育3 h，終止反應(yīng)。置消化片段于3%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后以DL2000 DNA片段長(zhǎng)度作為標(biāo)準(zhǔn)物，紫外燈下判斷結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，通過(guò)比數(shù)比(OR)和95%可信區(qū)間(CI)表示患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)度;計(jì)量資料用±s表示，組間比較行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IL-6表達(dá)水平 腦梗死患者血清內(nèi)IL-6表達(dá)水平〔(27.15±5.78)ng/L〕顯著高于對(duì)照組〔(6.14±2.55)ng/L〕(t=23.1451，P=0.000)。

2.2 IL-6基因多態(tài)性比較 IL-6基因－572C/G在腦梗死患者及對(duì)照組中分布具有顯著性差異(χ2=7.981 5，P=0.009 1);比較基因頻率后發(fā)現(xiàn)兩組患者比較也有顯著性差異(χ2=7.124 2，P=0.010 4)，見(jiàn)表1。IL-6 基因 －174 C/G 多態(tài)性分布在兩組中無(wú)顯著差異，見(jiàn)表2。

表1 IL-6－572C/G基因及等位基因分布與腦梗死風(fēng)險(xiǎn)性分析

表2 IL-6－174C/G基因及等位基因分布與腦梗死風(fēng)險(xiǎn)性分析

3 討論

腦梗死為多種因素共同作用的結(jié)果，遺傳基因在腦梗死發(fā)病中起到至關(guān)重要的作用〔3〕。IL-6是神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞合成的炎癥反應(yīng)的中樞性調(diào)節(jié)因子，參與諸多細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化過(guò)程，且與細(xì)胞調(diào)節(jié)功能有關(guān)〔4〕。IL-6在炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成過(guò)程中也起到重要的作用，局部病變腦組織細(xì)胞IL-6 RNA表達(dá)水平高于正常腦組織，從而表明IL-6參與了疾病的生理、病理變化并具有重要作用〔5〕。IL-6基因位于3號(hào)染色體，含有4個(gè)內(nèi)含子、5個(gè)外顯子，基因啟動(dòng)子572C/G呈現(xiàn)多態(tài)性可影響IL-6的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)而對(duì)IL-6相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展造成影響〔6〕。IL-6基因－572C/G多態(tài)性與腦梗死存在密切相關(guān)，而患者攜帶的G基因型在整個(gè)過(guò)程中具有一定促進(jìn)作用，而IL-6基因－174C/G檢測(cè)未呈現(xiàn)多態(tài)性。

1 陳懿建，張立群，陳方平.腦梗死患者PA I-1基因啟動(dòng)子區(qū)域4G/5G多態(tài)性與血漿活性關(guān)系的研究〔J〕.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2008;11(2A)：213-27.

2 Elkind MS，Coates K，Tai W.Levels of acute phase proteins remain stable after ischemic stroke〔J〕.BMC Neurol，2006;16(6)：37.

3 包祖曉，劉素芝，張 麗.急性腦梗塞與血清IL-6的關(guān)系及抗血栓合劑2號(hào)顆粒的干預(yù)作用〔J〕.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007;25(12)：2558-60.

4 孫 澐，武春意，鄧紅梅，等.深圳市漢族人ICAM-1基因469E/K、IL-6基因啟動(dòng)子-174G/C多態(tài)性在腦梗死中的協(xié)同作用〔J〕.臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2009;18(8)：584-6.

5 邢 昂，宋玉強(qiáng)，李洪軍，等.細(xì)胞間黏附分子-1基因469E/K、白細(xì)胞介素-6基因啟動(dòng)子－174G/C多態(tài)性在腦梗死中的協(xié)同作用〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2006;39(12)：848-50.

6 劉素芝，包祖曉，張銳利.缺血性中風(fēng)氣虛血瘀病機(jī)學(xué)說(shuō)的理論探討〔J〕. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007;25(1)：97-8.