申紅春

(恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物工程系，湖北 恩施 445000)

中草藥制劑具有促進(jìn)畜禽生長和動(dòng)物保健的作用，且在生產(chǎn)應(yīng)用上具有毒性低、殘留低、無耐用性、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等獨(dú)特特點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn).

中草藥絞股藍(lán)不僅具有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)(如氨基酸、不飽和脂肪酸、微量元素、維生素等)，還具有激素樣作用、抗生素樣作用，可顯著提高機(jī)體免疫力；并能改善飼料適口性、增加食欲、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[1].目前，中草藥約有5 000種可用于添加劑.

絞股藍(lán)〔Gyrtostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino〕為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生攀緣草質(zhì)藤本植物，又名七葉膽、公羅鍋底.絞股藍(lán)以全草供藥食兼用，味苦、性寒，具有清熱解毒、補(bǔ)氣、止咳、祛痰之功效[2].有研究報(bào)道，絞股藍(lán)具有多種生物活性，如能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，抗腫瘤，降低血脂，心血管保護(hù)等；研究表明，絞股藍(lán)可刺激和調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)人體抵抗力.其不僅能直接清除自由基，并可降低自由基對細(xì)胞膜上脂質(zhì)過氧化作用，因而具有抗衰老的功效.絞股藍(lán)作為飼料添加劑，能使動(dòng)物得到所需的微量元素的同時(shí)，促進(jìn)食欲，提高動(dòng)物機(jī)體本身的免疫力[3-5].本文將進(jìn)行研究日糧中添加不同劑量的絞股藍(lán)，探討絞股藍(lán)對斷奶仔豬免疫功能的影響，為今后開發(fā)絞股藍(lán)在豬飼料添加劑中的廣泛應(yīng)用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用240頭21 d斷奶的雜交仔豬，根據(jù)體重相近，公母各半的原則隨機(jī)進(jìn)行分組，分別為對照組和試驗(yàn)I組、Ⅱ組、Ⅲ組.對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)I組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組在基礎(chǔ)日糧上分別添加不同劑量的絞股藍(lán)，即0.5%、1.0% 、2.0%，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)平行20頭豬.適應(yīng)期7 d，試驗(yàn)周期為28 d.

1.2 絞股藍(lán)

試驗(yàn)所用絞股藍(lán)購買于恩施醫(yī)藥有限公司,經(jīng)鑒定為正品.于65℃烘干、粉碎備用.

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧配方和營養(yǎng)成分(風(fēng)干樣)

注：1.豆粕粗蛋白含量為43；魚粉為國產(chǎn)魚粉；CaHP04含2個(gè)結(jié)晶水2.預(yù)混料為每千克飼料含VA 12 000IU；VD32 500IU；VE 50IU ；VK32.5 mg；VB12.5 mg；VB27.5 mg；VB63.5 mg；VB120.025 mg；煙酸30.00 mg；生物素0.125 mg.Fe 119 mg；Cu 21 mg；Mn 56 mg；Zn 110 mg；碘 0.8 mg；Se 0.30 mg.

1.3 飼養(yǎng)管理

受試動(dòng)物飼養(yǎng)在密閉 的半漏縫地板上，并且設(shè)置電熱板供仔豬取暖，試驗(yàn)期間豬舍相對濕度維持在55%～70%.采食方式為自由采食，采食量以食后料略有剩余為標(biāo)準(zhǔn).飲水方式為通過乳頭式飲水器自由飲水.在每天8:00，11:30，14:00，18:30進(jìn)行飼喂，試驗(yàn)期間隨時(shí)觀察仔豬采食和健康狀況，每天最后一次飼喂后收集飼料殘留量，記錄動(dòng)物的發(fā)病情況.每日定時(shí)打掃圏舍，定期消毒，按常規(guī)程序進(jìn)行驅(qū)蟲和免疫.

1.4 飼料配方及營養(yǎng)水平

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧的配方及營養(yǎng)水平參照《豬營養(yǎng)需要》[6]與中國《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn))(NY/T 65—2004)[7]進(jìn)行設(shè)計(jì).基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1.

1.5 血樣的采集和處理

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對受試動(dòng)物進(jìn)行稱重并采集血樣.采集樣品的具體方法為每個(gè)組選取體重接近的健康仔豬1頭，使用無菌注射器經(jīng)前腔靜脈采集血液約5 mL，立刻于室溫下靜置1 h，經(jīng)3 000 r/min離心15～20 min，吸取上層的血清，并立即放入-20℃冰箱中保存，待測.

1.6 免疫功能指標(biāo)的測定方法

測定血清的生化指標(biāo)采用全自動(dòng)生化分析儀(日立7180型).測定補(bǔ)體C3、C4及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA則是采用免疫透射比濁法，購自南京建成生物工程研究所的試劑盒用于測定本試驗(yàn)中的酶活性，免疫球蛋白測定試劑盒購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司.

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(SAS 8.0軟件)，若經(jīng)F檢驗(yàn)差異顯著者再用LSD法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果均以平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示.

2 結(jié)果與分析

絞股藍(lán)對斷奶仔豬免疫功能的影響試驗(yàn)結(jié)果如表2中顯示.從表2中可以看出，飼料中添加一定比例的絞股藍(lán)能夠提高斷奶仔豬體內(nèi)的血清免疫球蛋白含量.其中，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組IgM、IgG含量高于對照組和試驗(yàn)Ⅲ組，并且具有顯著性差異(P<0.05)，而對照組和試驗(yàn)Ⅲ組得結(jié)果差異不顯著(P>0.05).此外，通過飼料中添加絞股藍(lán)的方式還能夠提高斷奶仔豬體內(nèi)血清補(bǔ)體的含量，其中試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組C3、C4含量明顯高于對照組和試驗(yàn)Ⅲ組，并且具有顯著性差異(P<0.05)，但是對照組和試驗(yàn)Ⅲ組差異不顯著(P>0.05).從表3可以看出，與對照組相比，日糧中添加絞股藍(lán)增加了仔豬血清中過氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、堿性磷酸酶(AKP)與酸性磷酸酶(ACP)的活力(P<0.05)，顯著降低了血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05)，在30日齡和55日齡時(shí)，與對照組相比，II、Ⅲ組SOD分別提高了11.83%、15.11%和30.19%、42.81%，GSH-PX分別提高了11.83%、40.07%和22.39%、28.14%，AKP分別提高了13.30%、32.46%和7.36%、12.43%，ACP分別提高了4.65%、6.93%和24.09%、34.94%，而MDA分別降低了32.01%、42.43%和48.68%、56.48%.Ⅱ組血清中SOD、GSH-PX、AKP與ACP的活力均高于Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05).添加l%的絞股藍(lán)可以提高血清SOD、GSH-PX、AKP與ACP的活力.以上結(jié)果表明，日糧中添加絞股藍(lán)增加了肉仔雞抗氧化能力，降低了血清中脂質(zhì)過氧化物的生成.

表2 絞股藍(lán)對斷奶仔豬的免疫功能的影響(Mean±SD)

注:同行列間標(biāo)有相同字母(a和b)者為差異不顯著(P<0.05),下同.

表3 絞股藍(lán)斷奶仔豬的酶活性的影響(Mean±SD)

3 討論

體液免疫是動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力，是動(dòng)物抵抗疾病的重要防御機(jī)制，這種免疫力取決于免疫球蛋白的種類和數(shù)量.IgA，IgM和IgG是血液中主要的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)過程中占重要地位.仔豬血清中免疫球蛋白水平反映了其抵抗外界病原菌和病毒侵襲的能力.這些免疫因子在提供仔豬局部保護(hù)、預(yù)防腸道疾病發(fā)生方面發(fā)揮重要作用[8].IgG是動(dòng)物自然感染和人工主動(dòng)免疫后機(jī)體產(chǎn)生的主要抗體，能抵抗多種細(xì)菌與毒素的侵襲，能夠有效地保護(hù)機(jī)體免受感染.IgM在機(jī)體受病原感染后與補(bǔ)體進(jìn)行結(jié)合，致使病原體被溶解.IgA除發(fā)揮抗菌、抗病毒作用外，對動(dòng)物機(jī)體的呼吸道、消化道等局部黏膜免疫也起著重要的“屏障”作用.C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中的核心成分，是補(bǔ)體系統(tǒng)發(fā)揮效應(yīng)功能的關(guān)鍵成分，C4能夠保證補(bǔ)體活化穩(wěn)定而有效地發(fā)生于抗體結(jié)合的細(xì)胞表面[9-10].

據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，許多中藥或其活性成分對機(jī)體呈現(xiàn)小劑量或者低濃度促進(jìn)機(jī)體免疫功能的現(xiàn)象，但是大劑量或者高濃度會(huì)抑制機(jī)體免疫功能.有文獻(xiàn)報(bào)道，絞股藍(lán)也具有這種雙向免疫調(diào)節(jié)作用.錢新華等[11]發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)多糖能提高小鼠血清中溶血素的含量，說明對體液免疫具有促進(jìn)作用，但是在高劑量(100 mg/kg)下作用不明顯.廖瑞芳等[12]發(fā)現(xiàn)，小劑量(2.5～20 mg/L)的絞股藍(lán)總皂甙能催進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，并能提高DNA聚合酶Ⅱ的活性，促進(jìn)淋巴細(xì)胞DNA的合成，而大劑量(40 mg/L)則呈現(xiàn)相反的作用.本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和補(bǔ)體C3、C4顯著高于對照組.試驗(yàn)Ⅲ組中結(jié)果表明高劑量的絞股藍(lán)對斷奶仔豬的免疫功能影響較小，基本與文獻(xiàn)報(bào)道中的試驗(yàn)結(jié)果相符.有研究報(bào)道，增加仔豬體內(nèi)IgG水平有提高仔豬的抗感染能力、降低其腹瀉的發(fā)病率與死亡率的作用[13]，試驗(yàn)組IgG水平的提高和降低腹瀉率的的試驗(yàn)結(jié)果與此一致.

綜上所述，日糧中添加1%絞股藍(lán)能夠顯著提高免疫球蛋白IgA、IgG、IgA以及補(bǔ)體C3、C4含量，因此，飼料中添加1%絞股藍(lán)可以作為飼料添加劑的最佳劑量.

[1] 齊剛，張莉.絞股藍(lán)的藥理作用研究進(jìn)展[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，12(3)：239-241.

[2] 農(nóng)業(yè)部獸藥典委員會(huì).中華人民共和國獸藥典(2010年第二部)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：34-36.

[3] 張崇泉，楊曉慧，徐琳本，等.絞股藍(lán)總皂甙免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1990，12(2)：96.

[4] 易洪斌.絞股藍(lán)對產(chǎn)蛋雞夏季產(chǎn)蛋性能的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2003，(2)：25-26.

[5] Naber E C.Nutrient and drug efleets on cholesterol metabolism in the Laying hen[J].Federation Proc,1983，42：2486-2493.

[6] National Research Council.Nutrient requirements of swine[M].10th. Washington D C:National Academy Press,1998:25-130.

[7] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.NY/T 65-2004中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[8] 周貞會(huì)，楊慧芳，李玉，等.絞股藍(lán)添加劑對肉雞的飼養(yǎng)試驗(yàn)[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，38(4)：465-467.

[9] 胡松華，杜愛芳.復(fù)方黃芪、絞股藍(lán)對雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2000(2)：1-3.

[10] Grundy S D.Muitifactoria etiologyofhyper cholesterol emia[J].Arterioscler Thromb，1991，11：1619-1635.

[11] 錢新華，唐曉玲.絞股藍(lán)多糖對免疫功能的影響[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，30(1)：51-53.

[12] 廖瑞芳，鹿寧，雷林生，等.絞股藍(lán)總皂甙對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及DNA多聚酶Ⅱ活性的影響[J].中國藥理學(xué)報(bào)，1995，16(4)：322-324.

[13] 劉艷芬.免疫球蛋白防治仔豬腹瀉的試驗(yàn)研究[J].中國獸醫(yī)科技，2000，30(12)：31-32.