劉雅琴，劉雪萍，李鳳麗

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193)

HPLC法測定黃地散顆粒的中阿魏酸含量*

劉雅琴，劉雪萍，李鳳麗

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193)

目的:建立HPLC法測定黃地散顆粒中阿魏酸的含量。方法:采用HPLC法，色譜柱為大連依利特C18柱(250 mm×4.6 mm，10 μm)，流動(dòng)相為乙腈 －0.1% 磷酸(22∶78)，檢測波長 324 nm，流速 1 ml/min。結(jié)果: 阿魏酸在0.016 64 ～0.665 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=1.000 0)，平均回收率為101.76%(r=6)，RSD 為1.3%。結(jié)論:本法操作簡便，分離效果理想。

黃地散顆粒，HPLC，阿魏酸

黃地散顆粒為我院以中藥傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)方為基礎(chǔ)研發(fā)的中藥制劑。由當(dāng)歸、黃精、地黃、佩蘭等組成，用于治療血管性癡呆、老年性癡呆，改善患者定向力、回憶力、計(jì)算力、注意力、精神行為等癥狀，效果很好。當(dāng)歸中阿魏酸可增加腦微循環(huán)，故采用高效液相色譜法［1］測定當(dāng)歸中阿魏酸含量，取得滿意效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－10AT vp高效液相色譜儀，色譜柱為 Irregular－H C18柱(250 mm ×4.6 mm，10 μm);JA2003電子分析天平(上海精科天平廠，十萬分之一);DK98－1電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司);TCQ－250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。

1.2 試藥 阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110773—200611)，黃地散顆粒(津藥制字Z20100942，本院制劑室制備，批號090426，090428，090429)。乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:乙腈 －0.1% 磷酸(22∶78);流速:0.8 ml/min;柱溫:室溫;檢測波長為324 nm;理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算不低于1 500。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇溶液制成每1 ml含8 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取“裝量差異”項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇50 ml，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，置80℃水浴蒸至近干，殘?jiān)?0%甲醇適量溶解，移至5 ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［2］。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方制備不含當(dāng)歸的陰性樣品，取陰性樣品約4 g，精密稱定，照供試品溶液的制備項(xiàng)同法操作，即得。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考查 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 ml含0.208 mg的溶液作為儲備液，再分別精密量取儲備液 0.2、1、2、4、6 和 8 ml，置25 ml量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述6種濃度的對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測定各自峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，阿魏酸對照品的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算回歸方程為:Y=3.09×10－5X(r=1.000 0)，表明阿魏酸在 0.016 64 ～0.665 6 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，按照上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μl測定峰面積積分值，阿魏酸峰面積值的RSD為1.1%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱定同一批號樣品6份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定其峰面積積分值，阿魏酸峰面積值的RSD為1.3%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μl，分別在0、4、6、8、12、18 和24 h，測定，阿魏酸峰面積積分值的RSD為1.4%，結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 減半量稱取已知含量的同批樣品6份，分別加入阿魏酸對照品溶液(0.050 mg/ml)各1 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，計(jì)算回收率，見表1。結(jié)果阿魏酸平均回收率為101.76%，RSD為1.3%。

表1 阿魏酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的含量測定 取3個(gè)批號的黃地散顆粒，按照供試品溶液制備方法處理，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定樣品中阿魏酸含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

試驗(yàn)中考查了不同提取方法 (回流、超聲)［3］、提取溶劑(70%甲醇、50%甲醇、70%乙醇和50%乙醇)、提取時(shí)間(15、30和45 min)和提取溶劑不同用量對阿魏酸含量測定的影響。結(jié)果表明，70%甲醇50 ml，加熱回流提取30 min效果最佳。對四個(gè)不同系統(tǒng)的流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸、乙腈－1%冰乙酸、甲醇－0.1%磷酸、甲醇－1%冰乙酸進(jìn)行測定，同時(shí)考查了各系統(tǒng)不同組成比例的流動(dòng)相測定。結(jié)果，流動(dòng)相乙腈－0.1%磷酸(22∶78)阿魏酸出峰時(shí)間適中，約為14 min，分離度好，確定為最終的流動(dòng)相。

1 中國藥典.一部.2005:附錄6，130

2 蘭作平，覃樹勇.高效液相色譜法測定婦月康膠囊中阿魏酸含量.中國藥業(yè)，2008，17(15):40

3 賈永艷，張淑玲.血康膠囊提取工藝研究.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22(6):23

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0019-02

2012-03-29