徐道情，閆曉楠，劉稚菲，耿 彤

(天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，天津 300193)

HPLC法測(cè)定通脈養(yǎng)心丸中五味子醇甲的含量*

徐道情，閆曉楠，劉稚菲，耿 彤

(天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，天津 300193)

目的建立HPLC法測(cè)定通脈養(yǎng)心丸中五味子醇甲含量的方法。方法色譜柱:Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61);檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;流速:1.0 ml/min。結(jié)果:線性范圍為 0.01 654 ～2.068 μg(r=0.999 9)，平均回收率為99.64%，RSD為0.81%。結(jié)論:方法穩(wěn)定、可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

通脈養(yǎng)心丸，五味子醇甲，HPLC

通脈養(yǎng)心丸收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，由地黃、雞血藤、麥冬、甘草、五味子、桂枝等11味藥組成，具有養(yǎng)心補(bǔ)血，通脈止痛的作用，用于治療胸痹心痛，心悸怔仲，心絞痛，心律不齊。其中五味子滋養(yǎng)陰血、益氣養(yǎng)陰，是處方中主要藥味。五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實(shí)，其中含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等多種化學(xué)成分［1?。近代研究證明五味子中木脂素成分有加強(qiáng)和調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞和心臟、腎小動(dòng)脈的能量代謝、改善心肌營(yíng)養(yǎng)和功能等作用，是五味子中最主要的藥理活性成分［2?。五味子醇甲是五味子中木脂素類的主要成分，同時(shí)也是《中國(guó)藥典》2010年版一部“五味子”含量測(cè)定項(xiàng)下的指標(biāo)成分。本研究建立HPLC法測(cè)定通脈養(yǎng)心丸中五味子醇甲含量，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，快速簡(jiǎn)便，可作為通脈養(yǎng)心丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司生產(chǎn))。METTLE MS－105型電子天平(德國(guó)梅特勒公司生產(chǎn))。五味子醇甲對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)857－200102);通脈養(yǎng)心丸(為中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司樂仁堂制藥廠提供，濃縮丸，規(guī)格為每 10 丸重 1 g，批號(hào) C107413、C107414、C107418);乙腈、甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，水為純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61);檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量:10 μl;理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于12 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取五味子醇甲對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含16 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約2.5 g，精密稱定，精密加入甲醇 25 ml，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方和工藝制備不含五味子的樣品，按供試品溶液制備方法制備。

2.3 空白試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定無干擾，見圖1。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取五味子醇甲對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇配制成 0.001 654、0.004 136、0.008 272、0.016 54、0.041 36 和 0.206 8 mg/ml的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述6種濃度的溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下中色譜條件測(cè)定五味子醇甲峰面積，以對(duì)照品系列濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y=1 939.8 X+2.035 4(r=0.999 9)，結(jié)果顯示五味子醇甲對(duì)照品在0.016 54～2.068 μg的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 儀器精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按以上色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果 RSD為1.16%(n=6)。

2.6 樣品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，按以上色譜條件在 0、2、4、6、8、10、12 h 分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積，供試品溶液峰面積RSD為0.69%。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本無變化，穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)樣品6份，制備供試品溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算五味子醇甲含量，結(jié)果五味子醇甲平均含量為0.1687 mg/g，RSD為1.12%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品6份，每份約0.5 g，精密加入五味子醇甲對(duì)照品適量，制備加樣回收溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果表明平均回收率為99.64%，RSD 為0.81%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取三批供試品，按“2.2.2”項(xiàng)下操作。精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品的含量。測(cè)得3批供試品中五味子醇甲的平均含量分別為 0.168 7、0.178 2 和0.177 3 mg/g。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，采用乙腈－0.1%甲酸溶液(39∶61)、乙腈 －0.05% 磷酸(40∶60)、甲醇－水(35∶65)等不同流動(dòng)相組成與配比實(shí)驗(yàn)［3－5?，結(jié)果乙腈 －0.1%甲酸溶液(39∶61)的分離效果最佳，保留時(shí)間適中，故選用為流動(dòng)相。

3.2 色譜柱的選擇 使用不同的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱進(jìn)行測(cè)定，如Agilent SB－Aq C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)、Phenomenex Luna C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)色譜柱，其色譜峰峰型和分離度良好，測(cè)定結(jié)果均不受影響，證明本方法耐用性良好。

通過方法學(xué)考察建立了高效液相色譜法測(cè)定通脈養(yǎng)心丸中五味子醇甲含量的方法。本方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為通脈養(yǎng)心丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量方法。

1 官艷麗，曹沛，郁開北，等.北五味子化學(xué)成分的研究.中草藥，2010，37(2):185

2 杜國(guó)成.五味子化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展.中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2011，1(20):32

3 廖彩霞，戴德雄，諸葛周.HPLC法測(cè)定參芪五味子分散片中五味子醇甲.中草藥，2012，43(3):505

4 秦建平，吳建雄，畢宇安，等.HPLC同時(shí)測(cè)定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮Ⅱ－A的含量.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(2):77

5 張廣春，陳明明.高效液相色譜法測(cè)定安神養(yǎng)心丸中五味子醇甲的含量.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(7):1783

HPLC determination of schizandrol A in Tongmai Yangxin Pill

Xu Daoqing，Yan Xiaonan，Liu Yafei，Geng Tong
(Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Corporation Ltd，Tianjin 300193)

Objective:To establish an HPLC method to determine Schizandrol A in Tongmai Yangxin Pill.Methods:schizandrol A was assayed on an Agilent XDB(250 mm ×4.6 mm，5 μm)column;the mobile phase composed of acetonitrile －0.1%formic acid solution(39∶61)at a flow rate of 1.0 ml/min;the determination wavelength was 250 nm.Results:The calibration curves were linear in the range of 0.016 54 ～2.068 μg(r=0.999 9)for schizandrol A.The average recoveries(n=6)of schizandrol A was 99.65%(RSD was 1.56%).Conclusion:The method is proved to be simple and reliable，accurate，repeatable and can be used for quality control of Tongmai Yangxin Pill.

Tongmai Yangxin Pill，schizandrol A，HPLC

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0006-03

2012-05-28