周立 陶錚 盛蓉 蒲志強(qiáng)

鼻炎通竅噴霧劑是我院開發(fā)的新制劑,該方由麻黃、黃芩、白芷、辛夷等中藥組成,具有通利鼻竅的功效,臨床用于急慢性鼻炎、鼻竇炎、癥見鼻塞、流膿涕。為有效控制該制劑質(zhì)量,參考藥典[1]及相關(guān)文獻(xiàn)[2-10],建立了麻黃、黃芩、白芷的薄層色譜鑒別,對(duì)方中君藥麻黃制定了高效液相色譜測(cè)定鹽酸麻黃堿含量的方法[11-14],所用方法簡(jiǎn)便,專屬性強(qiáng),重現(xiàn)性好,可用于鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

HP-1100型高效液相色譜儀(美國惠普),四元泵,DAD檢測(cè)器,HP化學(xué)工作站;AS10200超聲波清洗器(220V,280W),電子分析天平BP211D(德國Sartorius)。

對(duì)照品:鹽酸麻黃堿(171241-200506)、黃芩苷(110715-200514)、黃芩素(111595-200402)、漢黃芩素(1514-200202)、歐前胡素(110826-200712)、異歐前胡素(110827-200407 );對(duì)照藥材:麻黃(121051-200704)、黃芩(120955-200607)、白芷(120945-200707),均由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈、甲醇均為色譜純,水為重蒸餾水,其余試劑均為分析純,硅膠G、硅膠H(青島海洋化工廠);鼻炎通竅噴霧劑3批(100601、100602、100603)及陰性樣品均由本院制劑室提供。

2 薄層色譜鑒別

2.1麻黃

取本品10ml,加濃氨試液1ml,用乙醚振搖提取2次,每次10ml,合并乙醚液,加鹽酸乙醇溶液(1→20)1ml于乙醚液中,搖勻,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。另取麻黃對(duì)照藥材1g,加濃氨試液數(shù)滴,再加三氯甲烷10ml,加熱回流1小時(shí),濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml充分振搖,濾過,取濾液作為對(duì)照藥材溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。取缺麻黃陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備,作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20:5:0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以茚三酮試液,加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性均無干擾,薄層色譜見圖1。

2.2黃芩

取本品10ml,加鹽酸調(diào)節(jié)PH至3,用乙酸乙酯振搖提取2次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材1g,加乙酸乙酯-甲醇(3:1)的混合溶液30ml,加熱回流30分鐘,放冷,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,取上清液作為對(duì)照藥材溶液。另取黃芩苷對(duì)照品、黃芩素對(duì)照品、漢黃芩素對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的對(duì)照品溶液。取缺黃芩陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備,作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各2μl,分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:3:1:2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同的暗斑,陰性均無干擾,薄層色譜見圖1。

2.3白芷

取本品10ml,加乙醚振搖提取2次,每次10ml,合并乙醚液,揮干,殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解,作為供試品溶液。另取白芷對(duì)照藥材0.5g,加乙醚10ml,浸泡1小時(shí),時(shí)時(shí)振搖,濾過,濾液揮干,殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品,加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。取缺白芷陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備,作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以石油醚(30～60℃)-乙醚(3:2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色熒光斑點(diǎn),陰性均無干擾,薄層色譜見圖1。

圖1 麻黃、黃芩、白芷薄層鑒別

3 鹽酸麻黃堿含量測(cè)定

3.1色譜條件

色譜柱:迪馬柱Diamonsil-C18(250×4.6mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈:0.1%磷酸(含0.1%的三乙胺)(3:97);流速:1ml/min;檢測(cè)波長210nm;柱溫30℃。

3.2溶液制備

3.2.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品7.98mg,加甲醇制成每1ml含鹽酸麻黃堿159.6 μg的溶液,搖勻,作為對(duì)照品溶液。

3.2.2供試品溶液制備

精密量取樣品液2ml,置25ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。

3.2.3陰性樣品溶液的制備

取缺麻黃陰性樣品2ml,按“供試品溶液制備”方法制備樣品,作為陰性樣品溶液。

3.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對(duì)照品、陰性樣品和供試品溶液,照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件注入液相色譜儀,記錄色譜圖,見圖2。從圖中可以看出陰性無干擾,待測(cè)峰與其他峰分離度良好。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于3000,分離度大于1.5。

3.4方法學(xué)考察

3.4.1線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣0.5 μl、1 μl、3 μl、5 μl、7 μl,記錄色譜圖,以鹽酸麻黃堿的進(jìn)樣量( μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),得回歸方程為:Y=1992.10165X-1.62788;R=0.9999,結(jié)果表明鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.0798 μg～1.1172 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4.2精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次5 μl,測(cè)定,結(jié)果峰面積的RSD為1.87%(n=6),表明儀器精密度良好。

3.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液,分別在0、1、 2、4、8 h依次進(jìn)樣,鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為1.83%(n=5),表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4.4重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(批號(hào)100601)6份,每份2ml,按供試品溶液制備方法制備樣品,測(cè)定,結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均含量為 1.011mg/ml,RSD值為1.94%(n=6)。

3.4.5加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的樣品(批號(hào)100601)6份,每份1mL,至25mL量瓶中,分別精密加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液(0.1596mg/mL)5mL,用甲醇定容至刻度,搖勻,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均回收率為97.29%,RSD值為2.35%(n=6),見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)

3.4.6樣品測(cè)定

取3批鼻炎通竅噴霧劑樣品,按供試品溶液制備方法制備樣品,在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定(n=2)

4 討論

4.1在后期初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),樣品放置一段時(shí)間后,白芷薄層色譜圖中歐前胡素斑點(diǎn)極不明顯,而異歐前胡素較穩(wěn)定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[15],有研究表明,白芷中歐前胡素的含量隨溫度及放置時(shí)間的延長有明顯降低,故該制劑在擬訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí),未將白芷的薄層鑒別列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.2麻黃含量測(cè)定中,在制備供試品溶液時(shí),對(duì)提取溶媒進(jìn)行了考察,分別用水、甲醇、50%甲醇、0.1%鹽酸甲醇、流動(dòng)相作為樣品提取溶媒,結(jié)果表明用甲醇作為提取溶媒,鹽酸麻黃堿含量較高,故選用甲醇作為提取溶媒。

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