李 鑫，周春潔，武軍梅，劉鳳霞（重慶市江津區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科 402260）

由于日益增加的標(biāo)本檢測(cè)量，科室目前生化分析儀的測(cè)試速度難以滿(mǎn)足大批量臨床樣本檢測(cè)的需要，本科室引進(jìn)1臺(tái)Beckman AU680全自動(dòng)生化分析儀。該生化分析儀在帶來(lái)快速、高效的同時(shí)，儀器的測(cè)定誤差難免，對(duì)儀器性能評(píng)價(jià)是必要的，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠［1］。本文遵照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）部分文件的要求，對(duì)Beckman AU680生化分析儀及其原裝試劑、校準(zhǔn)品組成封閉檢測(cè)系統(tǒng)的堿性磷酸酶（ALP）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，采用速率法）、血清總膽紅素（TBil，采用終點(diǎn)法）、非原裝試劑血肌酐（Cr，采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法）共4個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的精密度、準(zhǔn)確度、線(xiàn)性及攜帶污染進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)鉀（K＋）、鈉（Na＋）、氯（Cl－）離子選擇電極法與Olympus AU2700進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Beckman AU680生化分析儀、Olympus AU2700生化分析儀。

1.1.2 試劑、標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品 ALP、AST、TBil的試劑均由Beckman公司提供：ALP批號(hào)為1906，AST批號(hào)為1565，TBil批號(hào)為1566。Beckman公司提供的校準(zhǔn)品，批號(hào)為66300，能溯源到Beckman Coulter Master Calibrator；兩個(gè)水平質(zhì)控血清批號(hào)分別為0029 H和0030F。Cr的試劑由利德曼公司提供，批號(hào)為111183K。其校準(zhǔn)品由上海長(zhǎng)征公司提供，批號(hào)為663 UN，能溯源到NIST SRM 909B；質(zhì)控血清批號(hào)為678UN－2。電解質(zhì)試劑全為配套試劑，其能溯源到 NIST SRM 2201／2202。

1.1.3 精密度分析穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)樣品 采用本院患者新鮮血清，混合后分裝冷凍保存。

1.2 方法

1.2.1 分析方法 ALP、AST、TBil、Cr檢測(cè)方法及參數(shù)見(jiàn)各自批號(hào)的相應(yīng)試劑說(shuō)明書(shū)，K＋、Na＋、Cl－采用離子選擇電極法。評(píng)價(jià)前分析者已經(jīng)熟悉分析方法、儀器使用和評(píng)價(jià)方案，對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)以保證儀器處于良好狀態(tài)。使用相應(yīng)校準(zhǔn)品對(duì)各檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)，每天進(jìn)行試劑空白測(cè)定和電解質(zhì)校準(zhǔn)，并按經(jīng)典的Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行Beckman兩水平質(zhì)控品及長(zhǎng)征質(zhì)控品分析，質(zhì)控在控才進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密度依照 CLSI的 EP5－A2［2］文件要求，收集本院患者新鮮血清混合，因?yàn)榛旌蠘颖痉€(wěn)定較困難，所以精密度實(shí)驗(yàn)采用5個(gè)工作日完成。每天做兩批實(shí)驗(yàn)（上午一批，下午一批，時(shí)間間隔大于2 h），每個(gè)批次測(cè)8個(gè)樣本。每樣本做雙份重復(fù)測(cè)試，隨機(jī)插入常規(guī)標(biāo)本中。獲取80個(gè)數(shù)據(jù)。從所有80個(gè)結(jié)果計(jì)算出總精密度。以批內(nèi)精密度的CV或SD＜1／4CLIA′88，總精密度的CV 或SD＜1／3CLIA′88為可接受的精密度最低水平［3］。

1.2.3 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確度分兩個(gè)方案：（1）ALP、AST、TBil、Cr測(cè)定采用測(cè)定相應(yīng)配套質(zhì)控品，與質(zhì)控品結(jié)果進(jìn)行對(duì)照。每個(gè)水平進(jìn)行5次（或天）測(cè)定，計(jì)算其平均值是否在質(zhì)控范圍內(nèi)。（2）K＋、Na＋、Cl－測(cè)定采用《患者樣本方法比較和偏倚估計(jì)》。依照CLSI的EP9－A2［4］文件的要求，由于Olympus AU2700生化分析儀性能和準(zhǔn)確度已證實(shí)，且長(zhǎng)期參加室間質(zhì)評(píng)結(jié)果優(yōu)秀，以其測(cè)定結(jié)果為X值，新購(gòu)置Beckman 680生化分析儀測(cè)定結(jié)果為Y，進(jìn)行線(xiàn)性回歸統(tǒng)計(jì)＾Y＝b X＋a，b和a分別表示兩種儀器間的比例誤差和恒定誤差。r表示兩儀器的相關(guān)系數(shù)，當(dāng)r≥0.975或r2≥0.95，認(rèn)為X范圍是合適的。以CLIA′88規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許誤差范圍的1／2為標(biāo)準(zhǔn)［5］，在不同醫(yī)學(xué)決定水平分別判斷儀器的偏倚臨床是否可以接受性。

1.2.4 線(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)依照CLSI的EP6－A［6］文件的要求，按不同項(xiàng)目收集近20 d來(lái)患者血清最高值（H）和正常值或低值（L），但高值樣本較少。對(duì)收集的高值樣本和低值樣本，采用不同比例進(jìn)行混合，形成9管系列樣品，分別用AU680生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，每樣品測(cè)兩次取均值作為實(shí)測(cè)值X，以Y表示各樣品的預(yù)期值，進(jìn)行回歸分析，得到Y(jié)＝b X＋a，若b在0.95范圍內(nèi)，a近于0（統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異），則可判斷線(xiàn)性范圍驗(yàn)證成功［7］。

1.2.5 攜帶污染率 在Beckman AU680生化分析儀上，選取高濃度定值血清樣本連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度定值血清樣本連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3。按公式計(jì)算攜帶污染率［8］。攜帶污染率＝（L1－L3）／（H3－L3）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用Excel 2007軟件，對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理及相關(guān)線(xiàn)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ALP、AST、TBil、Cr、K＋、Na＋、Cl－的批內(nèi)精密度的CV或SD均小于1／4CLIA′88，總精密度的CV或SD均小于1／3CLIA′88，在質(zhì)量目標(biāo)的可接受范圍內(nèi)，見(jiàn)表1。

2.2 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （1）ALP、AST、TB、CR 4個(gè)項(xiàng)目的質(zhì)控品測(cè)試均在質(zhì)控范圍內(nèi)，Beckman AU680生化分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目不同醫(yī)學(xué)決定水平上的相對(duì)偏倚除AST外均小于或等于1／2CLIA′88，達(dá)到了本研究預(yù)期的質(zhì)量目標(biāo)（表2），但AST在控結(jié)果尚可，在日后的工作中注意查找原因。（2）K＋、Na＋、Cl－：Cl－在Beckman AU680生化分析儀檢測(cè)結(jié)果均與Olympus AU2700生化分析儀檢測(cè)結(jié)果呈明顯相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r≥0.95，表明X范圍是較合適的，其分布范圍較寬，結(jié)果在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，則說(shuō)不同檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果可比；但Na＋的結(jié)果相關(guān)系數(shù)r＜0.95，則說(shuō)明不同檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性差，無(wú)法保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，可以通過(guò)相關(guān)回歸來(lái)擬合兩者的線(xiàn)性方程，見(jiàn)表3。

表1 ALP等項(xiàng)目的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 ALP等項(xiàng)目的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 高低值樣本收集后，混合方案見(jiàn)表4。Beckman AU680生化分析儀ALP、AST、TBil、Cr的線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)中，r2＞0.95、0.95＜b＜1.05均在可接受范圍內(nèi)，各檢測(cè)項(xiàng)目在該實(shí)驗(yàn)涉及濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)形，見(jiàn)表5。

2.4 攜帶污染率 ALP、AST、TB、CR 4項(xiàng)目的攜帶污染率較小，均小于2%，相比較而言，Cr的攜帶污染最大，為1.65%，見(jiàn)表6。

表3 K＋等項(xiàng)目的相關(guān)性及線(xiàn)性回歸結(jié)果

表4 ALP等項(xiàng)目的線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)高低值混合方案

表5 ALP等項(xiàng)目的線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表6 ALP等項(xiàng)目的攜帶污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室－質(zhì)量和能力的專(zhuān)用要求ISO15189［9］設(shè)備（在安裝時(shí)及常規(guī)使用中）應(yīng)顯示出能夠達(dá)到規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合相關(guān)檢驗(yàn)所要求的規(guī)格。CLIA強(qiáng)調(diào)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部門(mén)必須對(duì)于檢測(cè)系統(tǒng)的性能參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，至少包括精密度、準(zhǔn)確度、可報(bào)告范圍和臨床參考區(qū)間。

本文依照CLSI的EP5－A2、EP9－A2和EP6－A 文件的要求，以不同方法、不同波長(zhǎng)、不同檢測(cè)單元、試劑配套與否等原則，本科室選取了 ALP、AST、TBil、Cr、K＋、Na＋、Cl－共7個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的精密度、準(zhǔn)確度、線(xiàn)性對(duì)Beckman AU680檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。儀器試劑生產(chǎn)廠商常采用不同濃度范圍的新鮮患者血清與參考實(shí)驗(yàn)室的參考方法進(jìn)行比對(duì)來(lái)實(shí)現(xiàn)其檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果的溯源性［10］。為了將其檢測(cè)結(jié)果的溯源性繼續(xù)向用戶(hù)傳遞，廠商提供了針對(duì)該檢測(cè)系統(tǒng)配套的校準(zhǔn)品，并對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行了極其嚴(yán)密的定值。因而準(zhǔn)確度確認(rèn)較為簡(jiǎn)便的方法可使用不同批號(hào)的校準(zhǔn)品或直接使用“正確度驗(yàn)證品”進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證。但遺憾的是試劑廠商只有在上一個(gè)批號(hào)的校準(zhǔn)品即將過(guò)期時(shí)才會(huì)有新批號(hào)的校準(zhǔn)品上市，因而實(shí)際工作中很難做到用一個(gè)批號(hào)的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)而用另一個(gè)批號(hào)的校準(zhǔn)品進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)；同時(shí)基質(zhì)效應(yīng)極小的“正確度驗(yàn)證品”由于項(xiàng)目局限和昂貴的價(jià)格并未在國(guó)內(nèi)廣泛使用。本實(shí)驗(yàn)室ALP、AST、TBil、Cr 4項(xiàng)目測(cè)定質(zhì)控品，可完成相應(yīng)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度測(cè)定，還能檢測(cè)本科室的室內(nèi)質(zhì)量控制。根據(jù)CLSI的EP9－A2文件的要求，將Beckman AU680的ISE 3個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目分別與分析性能和準(zhǔn)確度已在本實(shí)驗(yàn)室得到確證的Olympus AU2700檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)，同時(shí)完成了準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)和同一檢測(cè)項(xiàng)目在不同設(shè)備間的比對(duì)工作。線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵為在日常工作中留取高值和低值的標(biāo)本。在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中如果b＜0.95或b＞1.05，有可能b與1之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為做出正確判斷，可對(duì)所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果作分析：試著舍去某組數(shù)據(jù)，另進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)。若縮小分析范圍后，回歸方程明顯改善，b近于1，a趨于0（差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），則縮小的分析范圍是真實(shí)的線(xiàn)性范圍。由于K＋、Na＋、Cl－生理波動(dòng)范圍明顯窄于電解質(zhì)線(xiàn)性寬度，加之高低值標(biāo)本不易收集，本研究對(duì)K＋、Na＋、Cl－線(xiàn)性范圍未行評(píng)價(jià)。而ALP、AST、TBil在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中線(xiàn)性未超出廠商的聲明，或在試劑廠商表示的線(xiàn)性上下限的10%以?xún)?nèi)，但實(shí)際工作中仍以廠商聲明的線(xiàn)性為準(zhǔn)，因?yàn)樵趯?shí)際工作中很少遇到超出所做的線(xiàn)性，若對(duì)于超過(guò)廠商聲明的線(xiàn)性樣品，本實(shí)驗(yàn)室仍建議稀釋后重測(cè)。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Beckman AU680生化分析儀達(dá)到本實(shí)驗(yàn)室性能要求，能夠在本實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確快速的應(yīng)用。對(duì)于大型生化分析儀，特別是多模塊多檢測(cè)系統(tǒng)的組合式高速生化分析儀，在不同的運(yùn)行環(huán)境、操作情況下性能指標(biāo)可能會(huì)存在一定的差異，必須在使用前進(jìn)行常規(guī)性能評(píng)價(jià)或驗(yàn)證，在確保在同一儀器內(nèi)多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果一致性的前提下，才能進(jìn)一步保證同一實(shí)驗(yàn)室中不同儀器結(jié)果的一致性，為實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量保證奠定基礎(chǔ)。

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