高 陽，潘 志，解朝霞，邸 平，楊獻玲

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長春 130117；2.長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130021；3.白城市中醫(yī)院，吉林 白城 137000；4.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130021）

榮骨膠囊是以鹿茸為原料加工而成的膠囊制劑。鹿茸為雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，是我國傳統(tǒng)名貴中藥，具有壯腎陽，益精血，強筋骨，調(diào)沖任，托瘡毒等作用。已有的研究［1-3］表明，鹿茸中含有蛋白質(zhì)、多肽、黏多糖、多胺、磷脂等類成分，其中的膠原蛋白具有治療骨質(zhì)疏松的作用［4-8］。榮骨膠囊主要成分為膠原蛋白，膠原蛋白是以黏多糖作為側(cè)鏈的蛋白質(zhì)之總稱。而作為側(cè)鏈的黏多糖含有大量的氨基己糖。因此，筆者選用苯酚硫酸法［9］測定總糖含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

1 實驗材料

752紫外光柵分光光度計；對照品葡萄糖（批號50-99-7）購自Sigma公司，對照品純度均為99％。所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品28.5mg，置250mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL中含葡萄糖114μg）。

2.2 標(biāo)準曲線的制備 精密吸取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置具塞試管中，各加水至1.0mL，再加5％苯酚水溶液1.0mL，搖勻，快速加入硫酸5.0mL，搖勻，放至室溫，以0管為空白，照分光光度法（《中國藥典》2005版附錄VA），在490nm波長處測定吸收度，以葡萄糖μg數(shù)對應(yīng)的吸收度，計算回歸方程。

2.3 測定方法 精密稱取供試品0.3g，置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密吸取供試品溶液0.4、0.8mL加水至1mL，照標(biāo)準曲線制備項下自“再加5％苯酚溶液1.0mL”起，依法操作，測定吸收度，由回歸方程計算糖含量。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 按照含量測定的方法制訂了標(biāo)準曲線，葡萄糖濃度114μg/mL，見表1，圖1。

圖1 葡萄糖標(biāo)準曲線

表1 葡萄糖標(biāo)準曲線數(shù)據(jù)

結(jié)果可知，標(biāo)準曲線線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.996 1，線性范圍為22.8～114μg。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗 取樣品按正文含量測定方法顯色后，每隔30min測其吸收度，吸收度在顯色后2.5h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.4.3 精密度試驗 取樣品定容后，連續(xù)測定5次，計算其RSD值，結(jié)果見表3。

表3 精密度考察結(jié)果

結(jié)果表明，所用儀器具良好精密性。

2.4.4 重現(xiàn)性試驗 取樣品5分，按含量測定項下方法進行測定，結(jié)果見表4。

表4 重現(xiàn)性考察結(jié)果

結(jié)果表明，本法重現(xiàn)性良好。

2.4.5 回收率試驗 精密稱取已知總糖含量為4.72％樣品，配成0.1mg/mL，精密吸取5份，每份0.5mL，分別加入對照品溶液（濃度：100μg/mL）0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，按含量測定項下方法操作，以測得的含量減去樣品中總糖含量，除以已知的對照品加入量，得回收率，結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗結(jié)果 μg

結(jié)果表明，本法平均回收率為98.82％，RSD=1.75％，回收率良好，準確度較高。

3 結(jié)果與討論

3.1 結(jié)果 依照含量測定方法對4批樣品進行含量測定，結(jié)果見表6。

表6 4批樣品總糖含量測定結(jié)果

3.2 討論 鹿茸中的多糖類成分是鹿茸中比較大量和特殊的成分，它們做為組織和細胞的重要組成成分和細胞間信息傳遞的物質(zhì)，已經(jīng)顯示了多方面的藥理作用。筆者曾對這些成分進行過研究，發(fā)現(xiàn)它們在治療老年癡呆（動物模型）、貧血和骨質(zhì)疏松等方面都具有一定的活性。這與鹿茸的強筋健骨、補益氣血的傳統(tǒng)作用相一致。此含量測定方法對榮骨膠囊制劑含量可控，操作簡便，適合作為其生產(chǎn)的質(zhì)量標(biāo)準。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：226.

［2］楊秀偉，白云鵬.馬鹿茸化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，1994，25（5）：229-231.

［3］鄢德俊，劉霞，呂淑琴.鹿茸的化學(xué)成分與藥理作用研究進展［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2004，38（3）：63.

［4］李和平.中國茸鹿品種（品系）的鹿茸化學(xué)成分［J］.東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003，31（4）：26.

［5］周秋麗，王麗娟，郭穎杰，等.鹿茸多肽對實驗性骨折的治療作用及機理研究［J］.白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999，25（5）：586.

［6］王豐，梅子青，周秋麗，等.鹿茸多肽的分離純化及藥理活性［J］.吉林大學(xué)學(xué)報：理學(xué)版，2003，41（1）111-114.

［7］Juha Risteli，Jukka Melkko，Seija Niemi et al.Use of a marker of collagen formation in osteoporosis studiesp［J］.Calcified Tissue International，Volume 49，Supplement 1，S24-S25.

［8］Yinqing Li，Yu Zhao，Renneng Tang，et al.Preventive and therapeutic effects of antler collagen on osteoporosis in ovariectomized rats［J］.African Journal of Biotechnology，20 September，2010，38（9）.

［9］HoonH.Sunwoo，Takuo Nakano，Robert J.et al.Chemical composition of antlers from wapiti（Cervus elaphus）［J］.Agric.Food Chem，1995，43（11）：2846-2849.

［10］張惟杰.糖復(fù)合物生化研究技術(shù)［M］.2版.杭州：浙江大學(xué)出版社，2003：78.