摘 要：目的：觀察三七總皂苷對肺纖維化大鼠smad 2/3表達的影響，探討其作用機制。方法：56 只 SD 大鼠隨機分為模型組、對照組、三七總皂苷組、地塞米松組。采用博萊霉素制備肺纖維化大鼠模型，24 h 后給予干預藥物，分別于 14 d、28 d處死動物后觀察其病理變化、肺系數(shù)及Smad 2/3的表達。結(jié)果：與模型組比較，三七總皂苷組的肺泡炎和肺纖維化明顯減輕，肺組織Smad 2/3表達降低。結(jié)論：三七總皂苷抑制博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化的機制與其抑制Smad 2/3蛋白有關(guān)。
　　關(guān)鍵詞：三七總皂苷；Smad 2/3蛋白；博萊霉素；肺纖維化
　　中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）05-0065-02
　　
　　肺纖維化（Pulmonary fibrosis，PF）疾病是各種不同病因肺部疾病的共同結(jié)局，包括特發(fā)性肺纖維化、結(jié)節(jié)病、塵肺、過敏性肺炎、藥物和放射線導致的纖維化，與膠原血管病有關(guān)的致纖維化肺泡炎等，病因各異，疾病譜廣泛。目前有研究顯示三七總皂苷對肝纖維化有一定干預作用^［1］。本研究采用博萊霉素制備肺纖維化大鼠模型，以Smad2/3為靶點，觀察其肺纖維化組織中的表達，有助于揭示肺纖維化的發(fā)病機制以及指導臨床防治。
　　1 材料與方法
　　1.1 動物來源 健康雄性SD大鼠56只，體重 200 ±20 g，購于昆明醫(yī)學院實驗動物中心 ，合格證號：0010295。
　　1.2 藥物與試劑 博萊霉素：15mg/支，日本化藥株式會社生產(chǎn)；三七總皂苷（絡(luò)泰注射用血塞通）由昆明制藥集團有限公司提供；Smad 2/3試劑盒購自武漢博士德生物有限公司；DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。
　　1.3 動物模型的建立及分組 將大鼠隨機分為模型組（MG）、對照組（CG）、三七總皂苷組（PG）、地塞米松組（DG），每組 14 只。除對照組外，其他3組大鼠均按照文獻報道的方法，經(jīng)氣管一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg體重）復制肺纖維化大鼠模型。對照組以生理鹽水代替博萊霉素。術(shù)后置動物于干燥、溫暖條件下喂養(yǎng)，定期消毒喂養(yǎng)場所。模型建立24 h 后腹腔內(nèi)注射干預藥物，每日1次，PG為三七總皂苷100mg/ kg?d，DG為地塞米松1 mg/ kg?d，MG則為0.9%氯化鈉注射液0.4 mL/d。
　　1.4 標本的采集 各組大鼠分別于手術(shù)后第14 d和28 d各處死7只。大鼠稱重后麻醉，剖胸取肺并稱重，取左下肺葉固定于10%的福爾馬林溶液中，供HE染色和免疫組化檢測用。
　　1.5 檢測指標 （1）一般情況觀察。（2）病理組織學檢查：HE染色。（3）smad 2/3蛋白測定：普通光鏡下觀察，每張切片隨機選取5個低倍視野，胞漿呈清晰棕色為陽性。按染色結(jié)果分為：0級陰性（-），1級灶狀陽性（+），2級彌漫性弱陽性（++），3級彌漫性中等陽性（+++），4級彌漫性強陽性（++++）。
　　1.6 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行分析，采用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異。
　　2 結(jié)果
　　2.1 一般狀況觀察 大鼠在術(shù)后第1 d，精神萎靡，活動減少，飲食差，第2 d恢復。CG、PG精神、飲食好，毛色潤澤，反應(yīng)靈敏，體重進行性增加，無死亡。DG造模7 d后死亡3只，均于夜間死亡，死亡原因為互相嘶咬，7 d后大鼠精神、飲食、活動明顯較以上2組差，體重呈下降趨勢。MG 14 d后一般情況變差，體重無明顯增長，其間死亡1只。
　　2.2 病理學觀察 MG第14 d肺泡炎癥，成纖維細胞增生，有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變；第28 d炎癥細胞減少，病變范圍彌散，大量肺泡結(jié)構(gòu)萎陷、破壞，大量膠原沉積在新生的毛細血管周圍，肺泡間隔以及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據(jù)（見圖1）。PG、DG 14 d肺泡炎癥較好轉(zhuǎn)，少量淋巴細胞浸潤，成纖維細胞少量增生；第28 d肺泡炎癥消退，少量肺泡結(jié)構(gòu)萎陷，肺泡間隔少量膠原沉積（見圖2）。
　　2.3 smad 2/3蛋白測定 CG大鼠肺組織僅見smad 2/3少量表達。MG可見smad 2/3廣泛表達于肺組織細胞胞漿和胞核（見圖3）。14 d和28 d均強陽性表達，有顯著性差異（P<0.05）。 PG、DG smad 2/3蛋白表達趨勢同MG（見圖4），但低于MG，高于CG，差異有顯著性意義（P<0.05）（見表1）。
　　注：與CG比較，*P<0.05；與MG比較，#P<0.05
　　3 討論
　　PF的發(fā)病機制極為復雜，細胞因子在其發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，它們構(gòu)成一個復雜的細胞外信號傳導分子的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)和鏈式反應(yīng)系統(tǒng)，導致以炎細胞浸潤、纖維母細胞增生和間質(zhì)結(jié)締組織沉積為特征的免疫介導的慢性炎癥^［2］。Smad家族蛋白是細胞因子受體的胞內(nèi)激酶底物，介導了TGF-β1對基因表達的調(diào)控^［3］。三七總皂苷具有抗脂質(zhì)過氧化作用，改善肺部微循環(huán)；抑制炎性細胞的滲出與趨化，減少細胞因子的產(chǎn)生和釋放；抑制肺成纖維細胞增殖，減少膠原的合成；增強膠原酶活性，促進已合成的膠原的降解，從而達到抑制肺纖維化的作用^［4］。本實驗結(jié)果顯示，經(jīng)氣管注入博萊霉素造模后，MG一般情況變差，病理呈肺纖維化改變，smad 2/3廣泛表達于肺組織細胞胞漿和胞核，14 d和28 d均強陽性表達。PG、DG大鼠肺組織炎癥及肺纖維化程度均好于MG，但低于CG。而smad 2/3蛋白表達趨勢同MG，但低于MG，高于CG。說明三七總皂苷和地塞米松對肺纖維化有一定干預作用，能延緩肺纖維化發(fā)生，但不能治愈。但DG，死亡率高，副作用大，不宜于長期使用。
　　綜上所述，三七總皂苷可在一定程度上干預肺纖維化進程，其干預博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化機制與抑制Smad 2/3蛋白表達有關(guān)。Smad 2/3是肺纖維化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性因子。因此，Smad 2/3及其家族作為抗纖維化機制中的重要靶點，可進一步研究。
　　
　　參考文獻：
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