譚 平姚茂君辛益妹馬美湖

（1.湖南機電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410151；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢 430070；3.中國人民解放軍空軍航空醫(yī)學(xué)研究所，北京 100036）

莓茶乙醇提取物的急性毒性研究

譚 平1姚茂君2辛益妹3馬美湖2

（1.湖南機電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410151；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢 430070；3.中國人民解放軍空軍航空醫(yī)學(xué)研究所，北京 100036）

對莓茶乙醇提取物的急性毒性進(jìn)行研究。取Wistar大鼠40只，清潔級，隨機分為2組，每組20只，雌雄各半，以最大耐受量法灌胃給予受試樣品組大鼠最大使用濃度和最大灌胃容量的莓茶乙醇提取物，1天2次（相隔4h），連續(xù)觀察14d。結(jié)果表明，受試樣品組大鼠毛色，皮膚，粘膜，眼睛，呼吸，循環(huán)，自主活動及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、行為表現(xiàn)等均與陰性對照組大鼠無明顯差別，整個試驗期內(nèi)無大鼠死亡，莓茶乙醇提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量為10.0g/kg大鼠體重；對所有試驗大鼠進(jìn)行大體解剖，組織器官未見有顏色、體積、質(zhì)地等改變，說明莓茶乙醇提取物的毒性很小，具有較好的食用安全性。

莓茶；顯齒蛇葡萄；二氫楊梅素；急性毒性

莓茶是一種野生木質(zhì)藤本植物，又名甘露茶、藤茶、白茶、龍須茶等，學(xué)名顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），主要分布于湖南、湖北、貴州、云南、江西、廣東、福建等省區(qū)［1］。莓茶性涼，味甘淡，具有清熱解毒、降暑生津、消炎利尿、抗氧化、鎮(zhèn)痛等功效，是一種具有獨特保健功效和飲用價值的野生天然類茶植物。霉茶在武陵山區(qū)有廣泛的分布和悠久的飲用歷史，千百年來，人們將其幼嫩莖葉加工成保健茶，用于治療咽喉腫痛、感冒發(fā)熱、黃疸型肝炎、濕疹、皮炎等癥［2，3］。莓茶水提取物主要活性成分為黃酮類化合物3，5，7，3′，4′，5′–六羥基–2，3雙氫黃酮醇（二氫楊梅素，dihydromyricetin，DMY），具有抑菌、消炎、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰、抗高血壓、保肝護(hù)肝及解酒、消脂、降糖、抗氧化和增強免疫力等多種藥理活性［4－10］。目前，對莓茶乙醇提取物的毒理研究未見報道，本試驗對其急性毒性進(jìn)行了研究，以期為莓茶的研究和進(jìn)一步開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

小型粉碎機：LH－08B，浙江新昌紅利數(shù)控制造廠；

恒溫水浴鍋：B－220，上海亞榮生化儀器廠；

電子天平：EB－340HW型，日本Shimadzu公司；

超聲波清洗器：8200－J4型，日本Yamato公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：RE－52A，上海亞榮生化儀器廠；

上皿式電子天平：TMP－2型，湘儀天平儀器設(shè)備有限公司；

噴霧干燥機：GB－22，日本Yamato公司。

1.1.2 材料

清潔級Wistar大鼠：40只，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部提供（合格證號為SCXKL［京］2002－0001，動物使用許可證為SYXK［軍］2002010），雌雄各半，體重160～180g。

試驗大鼠飼養(yǎng)條件：相對濕度50% （±5%），溫度22℃（±2℃），光照12h明、12h暗，全屏障清潔級動物實驗室內(nèi)；喂飼全價營養(yǎng)顆粒飼料（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部提供），紫外滅菌后自由攝食；飲水為城市自來水，過濾后裝入消毒過的飲水瓶內(nèi)，自由飲用。

莓茶（按綠茶加工工藝制成）：湖南省保靖縣秦簡茶科技開發(fā)有限公司。

生理鹽水注射液（規(guī)格：500mL/瓶，批號：060509112），北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司。

桶裝飲用純凈水：購于北京華玉時尚飲料有限公司。

無水乙醇：化學(xué)純，北京化學(xué)試劑公司。

1.2 莓茶乙醇提取物的制備

將莓茶粉碎、過篩，稱取一定質(zhì)量的莓茶粉，按料液比為1∶18（m∶V）加入65%的乙醇溶液，在60℃下，超聲波提取40min，抽濾；濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，待料液可溶性固形物含量達(dá)到30%左右即可；經(jīng)噴霧干燥得莓茶乙醇提取物，依文獻(xiàn)［4］測其二氫楊梅素含量約為70%。

1.3 急性毒理學(xué)試驗

根據(jù)文獻(xiàn)［11～13］，將試驗用大鼠隨機分為受試樣品組和陰性對照組，每組20只，雌雄各半，陰性對照組給予生理鹽水注射液，受試樣品組給予莓茶乙醇提取物。給予受試樣品途徑：大鼠口服灌胃。給予莓茶乙醇提取物或生理鹽水注射液后實驗室觀察14d，每日記錄大鼠的自主活動、外觀癥狀，大鼠的死亡數(shù)及死亡時間，對死亡鼠進(jìn)行尸體解剖，觀察主要臟器和組織有無肉眼可見的病理學(xué)變化。

2 結(jié)果與分析

因受試莓茶乙醇提取物樣品溶解度限制，試驗中以0.25g/mL比例將受試樣品配制成水混懸液，給予受試樣品劑量為20.0mL/kg（大鼠體重），1d2次（相隔4h），1d累計劑量為10.0g/kg（大鼠體重）。陰性對照組給予生理鹽水注射液20.0mL/kg（大鼠體重），1d2次。

2.1 受試樣品組死亡情況

受試樣品組大鼠口服灌胃給予受試樣品莓茶乙醇提取物，劑量為10.0g/kg大鼠體重；整個試驗期14d內(nèi)無動物死亡發(fā)生，受試樣品組20只大鼠全部存活。

2.2 對受試樣品組體重的影響

第1天受試樣品組雌性大鼠平均體重為（172.48±5.35）g，第7天受試樣品組雌性大鼠平均體重為（181.77±6.06）g，7d內(nèi)受試樣品組雌性大鼠體重增加了9.29g，第14天受試樣品組雌性大鼠平均體重為（190.64±6.23）g，14d內(nèi)受試樣品組雌性大鼠體重增加了18.16g。

第1天受試樣品組雄性大鼠平均體重為（174.05±5.90）g，第7天受試樣品組雄性大鼠平均體重為（184.90±4.76）g，7d內(nèi)受試樣品組雄性大鼠體重增加了10.85g，第14天受試樣品組雄性大鼠平均體重為（194.16±7.86）g，14d內(nèi)受試樣品組雄性大鼠體重增加了20.11g。

受試樣品組雌、雄大鼠體重與陰性對照組無明顯差別，14d內(nèi)動物生長情況良好，表明莓茶乙醇提取物對大鼠體重?zé)o明顯影響。結(jié)果見表1。

表1 莓茶乙醇提取物對動物體重的影響（x±s）Table 1 Effects of ethanol extracts from fusty tea to the body weight of mouse

2.3 對受試樣品組一般體征的影響

受試樣品組大鼠灌胃給予莓茶乙醇提取物（劑量為10.0g/kg大鼠體重）后，連續(xù)觀察14d，所有受試大鼠的毛發(fā)光澤度、大小便、攝食、活動狀態(tài)和自主活動等均未見異常改變。

2.4 對受試樣品組主要臟器的影響

對所有受試大鼠進(jìn)行大體解剖，未見其組織器官出現(xiàn)顏色、體積和質(zhì)地等改變。受試樣品組大鼠皮膚、粘膜、眼睛、呼吸、循環(huán)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、行為表現(xiàn)等反應(yīng)與陰性對照組大鼠無明顯差別。

3 結(jié)論

以受試樣品最大使用濃度、受試動物最大灌胃容量，給予Wistar大鼠口服灌胃莓茶乙醇提取物劑量為10.0g/kg大鼠體重，在觀察期內(nèi)受試樣品組大鼠毛色，皮膚，粘膜，眼睛，呼吸，循環(huán)，自主活動及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、行為表現(xiàn)等均與陰性對照組大鼠無明顯差別，整個試驗期內(nèi)無大鼠死亡發(fā)生，莓茶乙醇提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量為10.0g/kg（大鼠體重）；對所有試驗大鼠進(jìn)行大體解剖，組織器官未見有顏色、體積、質(zhì)地等改變。本試驗結(jié)果表明莓茶乙醇提取物急性毒性很小，具有較好的食用安全性，臨床應(yīng)用安全可靠，具有進(jìn)一步研究開發(fā)價值，為莓茶的后續(xù)研究提供了試驗依據(jù)，但急性毒性實驗僅數(shù)次給藥，觀察時間較短，故還應(yīng)結(jié)合長期毒性試驗的毒性表現(xiàn)及多種檢查結(jié)果綜合分析評價其毒性。

1 中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物圖鑒補編（第2冊）［M］.北京：科學(xué)出版社，1983：349～356.

2 王文采.葡萄科新發(fā)現(xiàn)［J］.植物分類學(xué)報，1979，17（3）：110～112.

3 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編（下冊）［M］.北京：人民出版社，1978：789.

4 何桂霞，裴剛，周天達(dá)，等.顯齒蛇葡萄中總黃酮和二氫楊梅素的含量測定［J］.中國中藥雜志，2000，25（7）：423～425.

5 索朗，齊云，吳彬，等.藤茶抗炎、鎮(zhèn)痛作用研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2002，12（56）：172.

6 鐘正賢，周桂芬，陳學(xué)芬，等.廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的保肝作用實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2002，9（3）：155～156.

7 李翠蘋，曹樹穩(wěn)，余燕影.二氫楊梅素研究進(jìn)展［J］.化學(xué)試劑，2010，32（7），608～612.

8 覃潔萍，鐘正賢，周桂芬，等.雙氫楊梅樹皮素降血糖的實驗研究［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2001，18（5）：351～353.

9 張友勝，寧正祥，楊書珍，等.顯齒蛇葡萄中二氫楊梅樹皮素的抗氧化作用及其機制［J］.藥學(xué)學(xué)報，2003，38（4）：241～244.

10 楊書珍，張友勝，寧正祥，等.二氫楊梅素對幾種食品常見菌的抑制效果［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（1）：40～42.

11 中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（2003版）［S］.北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2003：177～180.

12 國家食品藥品監(jiān)督管理局.GPT 2－1，中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則［Z］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005.

13 李忠海，葉翠層，龐國歌，等.黃皮酸橙果皮提取物對小白鼠胃腸功能的影響［J］.食品與機械，2007，23（6）：52～54.

Study on acute toxicological evaluation of ethanol extracts from fusty tea

TAN Ping1YAO Mao－jun2XIN Yi－mei3MAMei－h(huán)u2

（1.Hunan Mechanical and Technical Polytechnic，Changsha，Hunan410151，China；2.College of Food Science and Technology，Huazhong Agricultural University，Wuhan，Hubei430070，China；3.Institute of Aviation Medicine，Chinese PLA Air Force，Beijing100036，China）

The acute toxicological evaluation was studied of ethanol extracts from fusty tea（Ampelopsis grossedentata）.The rats were given the ethanol extracts from fusty tea with the maximum concentration and capacity by gastric perfusion，twice a day，for 14days.The result showed that compared with Wistar control group，there were no abnormal reactions during the observation period on skin，mucosa，coat color，eyes，breath，circulation，locomotor activity，central nervous system，behavior etc.in Wistar sample group，without rats’death，and the maximum tolerance was 10.0g/kg by gastric perfusion.There were no change in the tissues and organs on volume，color and texture，which showed the extracts were low toxic and are better safe to eat.

fusty tea；ampelopsis grossedentata；dihydromyricetin；acute toxicology

10.3969 /j.issn.1003－5788.2011.06.025

國家星火計劃項目（編號：2006EA770049）；湖南省自然科學(xué)基金資助項目（編號：06JJ5019）；湖南省教育廳高?？蒲许椖浚ň幪枺?1C0475）

譚平（1968－），男，湖南機電職業(yè)技術(shù)學(xué)院副教授，碩士。E－mail：tan＿xiting＠126.com

2011－08－01