陳紹興,劉 杰,徐艷飛,楊 瑤,倪江勇

(紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,云南蒙自661100)

石油原油中微生物的分離及形態(tài)觀察

陳紹興,劉 杰,徐艷飛,楊 瑤,倪江勇

(紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,云南蒙自661100)

本研究從遼河油田(遼寧省凌海市閻家鎮(zhèn)錦州采油廠)采集原油樣品,采用LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基,好氧培養(yǎng).采用稀釋涂布的方法,進(jìn)行菌落分離.根據(jù)各自的菌落形態(tài),從中分離出10株菌落形態(tài)差異較大的菌株.進(jìn)行革蘭氏染色,Olypus CX31生物顯微鏡進(jìn)行形態(tài)觀察,結(jié)果顯示:菌落形態(tài)差異較大的菌株其顯微形態(tài)也不同,并且將這10個(gè)菌株分為1株革蘭氏陽(yáng)性菌和9株革蘭氏陰性菌.

遼河油田;石油原油;石油降解;微生物

1926 年,美國(guó)的Bachman首次提出將細(xì)菌注入地層提高石油采收率[1].近40年來(lái),世界各地進(jìn)行了幾千個(gè)油田試驗(yàn),分離篩選出適合不同地層條件、具有不同功能的菌種,單井處理增產(chǎn)79%～300%,微生物驅(qū)增產(chǎn)12%～600%.原油經(jīng)過(guò)一次采油和二次采油以后,地下剩余原油通常還會(huì)在50%以上,為了提高采收率,人們對(duì)三次采油技術(shù)越來(lái)越重視[2]隨著經(jīng)濟(jì)的高速增長(zhǎng),我國(guó)石油的環(huán)境治理任務(wù)也日益緊迫[3].隨著生物技術(shù)特別是分子生物技術(shù)的快速發(fā)展,人類(lèi)對(duì)微生物的操縱能力正在逐日增強(qiáng),充分利用微生物進(jìn)行原油開(kāi)采的技術(shù)必將為21世紀(jì)石油工業(yè)的發(fā)展、緩解能源危機(jī)開(kāi)辟新的途徑[4].

本研究組從遼寧省凌海市閻家鎮(zhèn)錦州采油廠采集原油樣品,從中分離出10個(gè)微生物菌株對(duì)其微生物的種類(lèi)和形態(tài)進(jìn)行初步研究,采用革蘭氏染色體對(duì)菌落的顯微形態(tài)進(jìn)行觀察.

1 材料與方法

1.1 石油樣品采集

石油的原油樣品采集于遼寧省凌海市閻家鎮(zhèn)錦州采油廠,由陳吉喆提供.

1.2 培養(yǎng)基制作

LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基(g/L),胰蛋白胨10g,酵母抽提物5g,NaCl 5g.如需要固體培養(yǎng)基,加入2%的瓊脂粉.121℃,20min滅菌.

1.3 革蘭氏染色

參照沈萍等主編的《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》第三版[5].

1.4 顯微照相觀察

采用Olypus CX31生物顯微鏡,油鏡觀察,數(shù)碼相機(jī)拍照.

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落形態(tài)觀察

如圖1所示,A至J分別是從遼河油田分離出來(lái)的10株菌,其菌落形態(tài)有較大的差別.A菌落呈黃色,邊緣不光滑,較干燥,菌落大;B菌落呈白色,邊緣不光滑;C菌落較透明,邊緣呈放射狀;D菌落透明,邊緣光滑,比較的濕潤(rùn),菌落較大;E菌落白色,邊緣較光滑;F菌落不透明,邊緣光滑;G菌落較小,邊緣光滑,隆起;H菌落淡黃色,邊緣較光滑;I菌落透明,邊緣光滑;J菌落黃色,濕潤(rùn),隆起.2顯微形態(tài)觀察

圖1 菌落形態(tài)觀察

如圖2所示,從遼河油田分離到的10個(gè)菌株,其中C菌株(如圖2 C)為革蘭氏陽(yáng)性,其余的9個(gè)菌株均為革蘭氏陰性.B菌株(如圖2 B)與G(如圖2G)菌株為球狀;J菌株(如圖2 J)為短桿狀;A菌株、C菌株、D菌株、E菌株、F菌株、I菌株(如圖2 A,C,D,E,F,I)為桿狀;而H菌株(如圖2 H)較為特殊為長(zhǎng)絲狀.

圖2 革蘭氏染色及顯微觀察

3 討論

本研究組從遼河油田分離到10個(gè)菌落形態(tài)各異的菌株,從菌株的菌落形態(tài)上看有圓形,邊緣有整齊的或邊緣不整齊的;有隆起的和不隆起的;顏色上有透明的、不透明白色、淡黃色、黃色;菌落的大小也相差較大,有小菌落和大菌落.革蘭氏染色結(jié)果顯示多為革蘭氏陽(yáng)性菌株,桿狀的居多.以上結(jié)果說(shuō)明了遼河油田的原油樣品中蘊(yùn)涵了豐富的微生物資源,在石油原油這樣特殊的環(huán)境條件下也存在豐富的微生物,為從中篩選出能夠降解石油污染,尋找微生物驅(qū)油的優(yōu)勢(shì)菌株,脫硫菌株等方面的應(yīng)該提供了豐富的菌種資源;為分離高效石油降解菌株提供基礎(chǔ).

[1]李牧,楊紅,劉宏偉等.微生物吞吐開(kāi)采稠油[J].油田化學(xué),1999,16(2):158-162.

[2]Cui Po,Shi Wen-ping.Present situation of production process and market of methyl methacrylate at homeandzbroad[J].Technique and economics of petrochemical engynology,2000,8(6):30-32.

[3]Aries E,Doumenq P,Artaud J,et al.Effects of petroleumhydrocarbons on the phospholipid fatty acid composition of aconsortium composed of marine hydrocarbon-degrading bacteria[J].Organic Geochem,2001,32:891-903.

[4]Sun Le-fang,Zhang Hong-mei.Application of biological technique in petrochemical industry[J].Modern chemical industry,2000,12(20):15-19.

[5]沈萍.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn):第三版[M].北京:高教出版社,2001.

Isolation and Morphology Observation ofM icroorgan ism from Petroleum

CHEN Shao-xing,LIU Jie,XU Yan-fei,YANG Yao,NI Jiang-yong

(College of Life Sciences,Hong he University,Mengzi 661100,China)

Diluted spreading method was used to separate the microorganism from Liao He Oil Field.This study isolated ten different morphology bacteria from Liao He Oil Field.The microscope shape of the strain was observed by Olympus CX31 under the gram staining.All the ten strain was separated into two groups:one strain gram positive,and nine strains gram negative.

Liao He Oil Field;petroleum;degradation;microorganism

Q4

A

1008-9128(2011)02-0027-02

2011-02-08

紅河學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(071010);云南省教育廳科學(xué)研究基金(09Y0413);紅河學(xué)院校級(jí)課題項(xiàng)目(XJ1Y0802);

陳紹興(1979-),男,浙江龍游人,碩士,講師。研究方向:微生物生理生化研究。

[責(zé)任編輯 張燦邦]