石強

(德州學(xué)院藥品研究開發(fā)中心，山東德州 253023)

威靈仙是中醫(yī)臨床常用祛風(fēng)濕藥物，用于治療風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)不利、四肢麻木，并有治療骨鯁病癥之功效［1］。威靈仙在全國應(yīng)用的品種很多，據(jù)調(diào)查有四科十多種［2］。《中華人民共和國藥典》(2005年版)收載威靈仙系毛茛科鐵線蓮屬植物威靈仙(Clematis chinensis Osbeck.)、棉團鐵線蓮(C．hexapetala Pall.)、東北鐵線蓮(C．manshurica Rupr.)的干燥根及根莖。而我國北方諸省長期以百合科植物粘魚須(又名華東菝葜Smilax sieboldii Miq.)的干燥根及根莖作為威靈仙使用［3］。毛茛科鐵線蓮屬植物和粘魚須作為威靈仙入藥均有本草依據(jù)［4］，但科屬不同，藥理作用是否一致，筆者未見報道。筆者研究證實，粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮三藥具有相似的鎮(zhèn)痛、抗炎、抑制T細胞功能，抑制小鼠細胞免疫的作用，對體液免疫無明顯影響［5］。根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的觀點，風(fēng)濕病屬于變態(tài)反應(yīng)性疾病，祛風(fēng)濕與影響機體的免疫功能有關(guān)。因此，筆者從影響非特異性免疫功能方面再對粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮進行比較，為粘魚須能否作為威靈仙入藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材的來源與鑒定 粘魚須(Smilax sieboldi i Miq.)采自青島市嶗山，威靈仙(Clematis chinensis Osbeck.)采自江蘇省江浦縣，棉團鐵線蓮(C．hexapetala Pall.)購自德州市藥材站。以上藥材經(jīng)山東省德州市藥品檢驗所鑒定為正品，陰干備用。

1.2 藥材水煎液的制備 稱取粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮干燥粉末各100 g，用水煎醇沉法制得提取液，濃縮至100 mL得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%水煎液備用。取100%粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮水煎液各50 mL，分別加入純化水50 mL，混勻得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%水煎液備用［6］。

1.3 藥品與儀器 氫化可的松注射液(秦皇島制藥有限公司生產(chǎn)，批號:040615)，地塞米松磷酸鈉注射液(山東瑞陽制藥有限公司生產(chǎn)，批號:050203)。Olympus雙目顯微鏡(日本生產(chǎn))，752型紫外分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))。印度墨汁、雞紅細胞懸液(由濟南市衛(wèi)生防疫站提供)。

1.4 實驗動物 昆明種小鼠，普通級，健康，體質(zhì)量18～22 g，山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.5 實驗方法

1.5.1 小鼠碳粒廓清實驗 參照文獻［7］。取小鼠80只，雌雄兼用，隨機分成8組，每組10只。其中6組灌胃給予受試藥物，陽性對照組灌胃給予氫化可的松溶液，空白對照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液。劑量見表1，qd，連續(xù)7 d(氫化可的松組連續(xù)5 d)。末次給藥后次日，每鼠尾靜脈注射印度墨汁0.05 mL·(10 g)-1。注射后1 min(t1)和5 min(t5)，用吸管分別從眼眶靜脈叢取血20μL，溶于0.1%碳酸鈉溶液2 mL中搖勻，在680 nm波長下比色，測定吸光度(A值)，分別用A1和A5表示1和5 min所取血樣的A值，計算K值。K=lg(A1/A5)/(t5-t1)，然后把小鼠脫臼致死，取肝和脾臟分別稱質(zhì)量，求α值。α=體質(zhì)量/(肝質(zhì)量+脾質(zhì)量)×K。

1.5.2 對腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的實驗 參照文獻［7］。取小鼠80只，雌雄兼用，隨機分成8組，每組10只。其中6組灌胃給予受試藥物，陽性對照組灌胃給予地塞米松，空白對照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液。劑量見表2，qd，連續(xù)7 d(地塞米松組連續(xù)5 d)。給藥第3天，每只鼠腹腔注射0.5%淀粉0.9%氯化鈉溶液(腹腔巨噬細胞誘導(dǎo)劑)0.5 mL。末次給藥的當(dāng)日每鼠腹腔注射2%雞紅細胞懸液1mL，處死小鼠，經(jīng)腹膜注入0.9%氯化鈉溶液2 mL，轉(zhuǎn)動鼠板1 min，吸出腹腔洗液1 mL，滴于載玻片上，37℃溫孵30 min，用0.9%氯化鈉溶液沖去未貼壁細胞，甲醇固定，姬-瑞氏混合液染色。鏡下計數(shù)100個巨噬細胞，按下式計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。吞噬百分率(%)=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/100個巨噬細胞×100%。吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細胞總數(shù)/100個巨噬細胞。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠碳粒廓清的影響 結(jié)果見表1。由表1可知，粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮大劑量組的K值和α值均低于空白對照組，均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);3種藥物的小劑量組與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但也呈現(xiàn)出降低K值和α值的趨勢，提示3種藥物有相似的降低K值和α值的作用。3種藥物相應(yīng)劑量組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的實驗 結(jié)果見表2。由表2可知，粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮2個劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均低于空白對照組，均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.01)，提示三種藥有相似的降低吞噬百分率和吞噬指數(shù)的作用。三種藥相應(yīng)劑量組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮對小鼠單核巨噬細胞吞噬能力的影響Tab．1 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．a(chǎn)nd C．hexapetela Pall on mononuclear macrophage phagocytosis ofm ice ±s

表1 粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮對小鼠單核巨噬細胞吞噬能力的影響Tab．1 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．a(chǎn)nd C．hexapetela Pall on mononuclear macrophage phagocytosis ofm ice ±s

與空白對照組比較，*1 P＜0.05，*2 P＜0.01Compared with the blank control group，*1 P ＜0.05，*2 P ＜0.01

組別 藥物 劑量/(g·kg-1) 小鼠/只 K值 α值粘魚須小劑量組 50%粘魚須水煎液 10 10 0.068±0.020 6.703±0.912大劑量組 100%粘魚須水煎液 20 10 0.060±0.011*1 6.621±0.705*1威靈仙小劑量組 50%威靈仙水煎液 10 10 0.062±0.026 7.426±0.716大劑量組 100%威靈仙水煎液 20 10 0.047±0.013*2 6.422±0.461*2棉團鐵線蓮小劑量組 50%棉團鐵線蓮水煎液 10 10 0.069±0.030 6.997±0.522大劑量組 100%棉團鐵線蓮水煎液 20 10 0.059±0.013*1 6.695±0.539*1陽性對照組 氫化可的松 0.066 10 0.031±0.006*2 5.591±0.834*2空白對照組 0.9%氯化鈉溶液 …10 0.075±0.018 7.434±0.812

表2 粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響Tab．2 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．a(chǎn)nd C．hexapetela Pall on peritonealmacrophage phagocytosis ofm ice ±s

表2 粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響Tab．2 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．a(chǎn)nd C．hexapetela Pall on peritonealmacrophage phagocytosis ofm ice ±s

與空白對照組比較*1 P＜0.01Compared with the blank control group，*1 P ＜0.01

組別 藥物 劑量/(g·kg-1) 小鼠/只 吞噬百分率/%吞噬指數(shù)粘魚須小劑量組 50%粘魚須水煎液 10 10 18.2±8.3*1 0.29±0.14*1大劑量組 100%粘魚須水煎液 20 10 15.4±6.8*1 0.26±0.16*1威靈仙小劑量組 50%威靈仙水煎液 10 10 15.7±4.2*1 0.30±0.14*1大劑量組 100%威靈仙水煎液 20 10 14.5±2.5*1 0.25±0.09*1棉團鐵線蓮小劑量組 50%棉團鐵線蓮水煎液 10 10 22.1±8.6*1 0.33±0.13*1大劑量組 100%棉團鐵線蓮水煎液 20 10 15.1±3.2*1 0.25±0.13*1陽性對照組 地塞米松 0.040 10 11.4±3.3*1 0.11±0.03*1空白對照組 0.9%氯化鈉溶液 …10 32.3±6.5 0.47±0.07

3 討論

巨噬細胞是機體免疫系統(tǒng)中對抗原最先產(chǎn)生反應(yīng)的細胞之一，在對抗原的攝取、處理、傳遞以及免疫的啟動和調(diào)節(jié)控制方面都起重要作用。

把定量的印度墨汁靜脈注入小鼠血液循環(huán)后，迅速被單核巨噬細胞所清除，主要被定居在肝和脾臟的巨噬細胞所吞噬。在一定范圍內(nèi)，顆粒的清除速率與顆粒劑量呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系，即吞噬速度與血中顆粒濃度呈正比，而與已吞噬的顆粒量成反比。如以不同時間測得的血中顆粒濃度之對數(shù)值為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)作圖，則兩者呈直線關(guān)系。此直線斜率即為K，因動物肝、脾重量可影響K值，故再可計算校正的α值。通過K值和α值即可反映出藥物對單核巨噬細胞吞噬功能的影響。

根據(jù)本研究結(jié)果，筆者認為:粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮都能降低碳粒K值和α值，降低腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，并且三種藥相應(yīng)劑量組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示三種藥具有相似的降低小鼠單核巨噬細胞和腹腔巨噬細胞吞噬能力，抑制機體非特異性免疫的作用。

根據(jù)藥效學(xué)研究結(jié)果，筆者認為:粘魚須與威靈仙、棉團鐵線蓮有相似的鎮(zhèn)痛、抗炎、細胞免疫和非特異性免疫抑制作用，故粘魚須可以作為祛風(fēng)濕藥威靈仙使用;至于粘魚須免疫抑制作用的有效成分為何物，以及粘魚須與毛茛科鐵線蓮屬植物威靈仙、棉團鐵線蓮的藥動學(xué)和臨床療效有何差異，則有待于進一步的藥理研究和臨床觀察。

［1］ 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1975:614-615.

［2］ 李家實，肖培根，樓之岑.中藥威靈仙的原植物和生藥學(xué)研究［J］. 藥學(xué)學(xué)報，1980，15(5):288-297.

［3］ 謝宗萬.中藥品種理論研究［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，1991:49-59.

［4］ 謝宗萬.中藥材品種論述(上冊)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1964:95-96.

［5］ 石強.粘魚須、威靈仙、棉團鐵線蓮對細胞免疫與體液免疫的影響比較［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30(2):163-166.

［6］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:68-69.

［7］ 李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:722-724.