袁 琦，徐 玫，趙 輝，楊 浩

（河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南，開封475004）

長(zhǎng)春花為夾竹桃科長(zhǎng)春花屬中一種重要的藥用植物，長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿是長(zhǎng)春花中具有抗腫瘤活性的二聚吲哚類生物堿［1］。長(zhǎng)春新堿通過作用于腫瘤細(xì)胞微管蛋白而干擾腫瘤細(xì)胞代謝，臨床主要用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病，也用于治療乳腺癌、支氣管肺癌、軟組織肉瘤及神經(jīng)母細(xì)胞瘤等［2］。對(duì)硫酸長(zhǎng)春新堿的研究主要是基于其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)毒性和局部刺激性，由此開發(fā)了各種新劑型，如采用與抗體結(jié)合［3－4］、脂質(zhì)體包裹［5］以及控釋膜［6］等，以減輕它的毒副作用。

長(zhǎng)春新堿是一種二聚吲哚類生物堿，見光或遇熱易變質(zhì)。HPLC法雖然具有較強(qiáng)的分離能力，但測(cè)定需要較長(zhǎng)時(shí)間，藥品易隨時(shí)間延長(zhǎng)發(fā)生變化，導(dǎo)致HPLC法的準(zhǔn)確度降低。而硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑中干擾組分較少，可采用分離能力較差的紫外分光光度法測(cè)定含量。我們采用紫外分光光度法測(cè)定硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑中硫酸長(zhǎng)春新堿的含量，顯示該方法簡(jiǎn)單快速，且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，可用于硫酸長(zhǎng)春新堿的含量測(cè)定。

1 儀器與試劑

UV-1600型紫外－可見分光光度計(jì)（北京瑞利）；試劑均為分析純；硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑（廣東嶺南制藥有限公司，批號(hào)090803）；硫酸長(zhǎng)春新堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；稀氨水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取硫酸長(zhǎng)春新堿對(duì)照品0.948mg，加甲醇1mL溶解后轉(zhuǎn)入50mL量瓶，并用甲醇多次洗滌容器，洗液并入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑4.603mg，加甲醇1mL溶解后轉(zhuǎn)入50mL量瓶，并用甲醇多次洗滌容器，洗液并入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，既得。

2.2 測(cè)定方法

取硫酸長(zhǎng)春新堿對(duì)照品溶液，稀釋后以甲醇做對(duì)照液，在190～340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，可知樣品在220、240、297nm波長(zhǎng)處均有吸收峰。HPLC檢測(cè)雜質(zhì)在220nm和240nm處有吸收，故選擇297nm處作為紫外法測(cè)定硫酸長(zhǎng)春新堿含量的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液6份，照“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)得吸光度值分別為0.366、0.365、0.366、0.365、0.365、0.366，RSD 為0.02%。

2.3.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑0.5mg溶于25mL容量瓶中，照“2.2”項(xiàng)下方法，按紫外分光光度法，分別于0.00、2.20、4.50、5.67、6.70h進(jìn)行測(cè)定，其吸光度A分別為0.325、0.312、0.301、0.302、0.299，RSD 為22.08%。由結(jié)果可知，藥品前4h變化較大，后面幾乎無變化。說明硫酸長(zhǎng)春新堿不穩(wěn)定，見光或遇熱易變質(zhì)。

2.3.3 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取9個(gè)10mL的容量瓶，分別精密加入供試品溶液4.0mL，再分別精密加入3.0、4.0、5.0mL對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備低、中、高3種濃度的供試品溶液，每種濃度制備3份樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)得吸光度值，計(jì)算含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法具有良好的回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.3.4 線性范圍 精密量取硫酸長(zhǎng)春新堿對(duì)照品溶液，加甲醇定量溶解，配制成40、20、10、4、1mg／L的溶液，按照“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)得吸光度值。以吸光度A為縱坐標(biāo)，溶液中硫酸長(zhǎng)春新堿的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，（圖1）?；貧w方程為：Y＝0.018 6 X＋0.013 5，r＝0.997 8。

結(jié)果表明，硫酸長(zhǎng)春新堿在1～40mg／L范圍內(nèi)與吸光度A呈良好線性關(guān)系。

2.4 樣品測(cè)定

分別取3個(gè)批號(hào)的硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑各3份，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定含量，計(jì)算出每個(gè)樣品占標(biāo)示量的百分含量。這3個(gè)批號(hào)樣品占標(biāo)示量的平均值分別為100.2%、99.7%和100.1%，含量符合要求。

圖1 紫外分光光度法的線性關(guān)系

3 結(jié)論

應(yīng)用本文建立的測(cè)定方法，可以對(duì)硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑中的硫酸長(zhǎng)春新堿含量進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)研究證明，該方法準(zhǔn)確度和精密度均符合要求，可用于該制劑的質(zhì)量控制，并能確保產(chǎn)品質(zhì)量。

4 討論

在本實(shí)驗(yàn)過程中，曾以C18為固定相，水－甲醇（45∶55，磷酸調(diào)pH至3.0）為流動(dòng)相，柱溫30℃，20μL進(jìn)樣，分別以220、240、297nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在220nm和240nm處檢測(cè)時(shí)，樣品有干擾組分的色譜峰，而在297nm波長(zhǎng)下樣品峰單一，說明雜質(zhì)在220nm和240nm處有吸收，在297nm處無吸收。

HPLC法具有較強(qiáng)的分離能力，但在弱酸性流動(dòng)相及30℃柱溫時(shí)，樣品易受到干擾，且HPLC法測(cè)定需要較長(zhǎng)時(shí)間，藥品隨時(shí)間的延長(zhǎng)也會(huì)發(fā)生變化，最終導(dǎo)致HPLC法的準(zhǔn)確性較差。紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便迅速，測(cè)定條件溫和，具有較高的準(zhǔn)確度、精密度。所以在測(cè)定注射用硫酸長(zhǎng)春新堿粉針劑時(shí)最好選用紫外分光光度法，而對(duì)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或?qū)ζ渌麆┬瓦M(jìn)行分析測(cè)定時(shí)，可以考慮選用分離效能較高的HPLC法。

［1］李浩，李一澎，盧國(guó)杰.長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿提取分離方法研究［J］.應(yīng)用化學(xué)，2008，37（9）：993.

［2］潘岳峰，王慧敏，張玥，等.大孔吸附樹脂分離純化長(zhǎng)春花中長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新堿［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（4）：51.

［3］Rowland G F，Simmonds R G，Gore V A.Drug Localisation and Growth Inhibition Studies of Vindesine-monoclonal Anti-CEA Conjugates in a Human Tumour Xenograft［J］.Cancer Immunol Immunother，1986，21（3）：183.

［4］余竹元，馬瑾瑜.長(zhǎng)春新堿－抗體結(jié)合物的抗肝癌作用［J］.腫瘤，1989，9（4）：154.

［5］Webb M S，Harasym T O，Masin D，et al.Sphingomyelincholesteral Liposomes SiginificantlyEnhance the Pharmacokinetic and Therapeutic Properties of Vincristine in Murine and Human Tumour Models［J］.B J cancer，1995，72（4）：896.

［6］孫勇，周海英.硫酸長(zhǎng)春新堿控釋膜藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)藥房，2000，11（2）：59.