張曉穎， 張 杰， 于海濤， 王小龍

(南京中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 210029)

熱休克蛋白(Hsp90)作為一種癌癥治療的目標(biāo)靶點(diǎn)，影響著其伴侶蛋白分子在人體內(nèi)的折疊、成熟、轉(zhuǎn)運(yùn)、以及構(gòu)象穩(wěn)定。 Hsp90在細(xì)胞的生長(zhǎng)、復(fù)制和存活過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用[1]，在惡性細(xì)胞中的高表達(dá)是癌癥細(xì)胞生存的重要條件。Hsp90作為一種專一靶點(diǎn)通過(guò)影響癌癥的信號(hào)通路從而產(chǎn)生抗癌的作用[2]。

研究表明，吲唑酮結(jié)構(gòu)已經(jīng)成為一種篩選Hsp90抑制劑的結(jié)構(gòu)骨架，該結(jié)構(gòu)的任何一個(gè)位點(diǎn)都可以進(jìn)行變換，以期產(chǎn)生更多的分子庫(kù)，為研究Hsp90抑制劑提供更多的化合物。

本文在文獻(xiàn)[3]方法的基礎(chǔ)上，合成了9個(gè)新型的芳香吲唑酮化合物(3a～3i)，為Hsp90抑制劑的研究提供一條思路[4]。p-取代苯胺(1a～1i)經(jīng)重氮化后再與2-氯乙酰乙酸乙酯反應(yīng)制得中間體(Z)-4-[2-(1-氯-2-乙氧基-2-羰亞甲基)肼基]-取代苯(2a～2i)； 在無(wú)水乙醇中，2a～2i分別與5，5-二甲基-1，3-環(huán)己二酮發(fā)生環(huán)化反應(yīng)合成了3a～3i(Scheme 1),其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和MS表征。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

BUCHI B-54型熔點(diǎn)儀(溫度未校正)；Bruker Avance Ⅲ型核磁共振譜儀(CDCl3或DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；Mariner 5140型電噴霧質(zhì)譜儀和TOF-MS型質(zhì)譜儀。

Scheme1

柱色譜用硅膠(100目～200目， 300目～400目)，青島海洋化工廠；GF254薄層層析硅膠板，煙臺(tái)德信生物科技有限公司；所用試劑均為分析純,其中乙醇經(jīng)鎂和碘經(jīng)無(wú)水處理后使用。

1.2 合成[3]

(1) 2的合成(以2a為例)

在反應(yīng)瓶中依次加入1a2.74 g(20 mmol)，水70 mL，無(wú)水乙醇10 mL及濃鹽酸6 mL，攪拌使其溶解(溶液澄清透明)，置低溫恒溫反應(yīng)浴(0 ℃～5 ℃)中，分批加入亞硝酸鈉1.4 g(20 mmol)，加畢，反應(yīng)30 min。用無(wú)水乙酸鈉調(diào)節(jié)至pH 5，滴加2-氯乙酰乙酸乙酯2.69 g(20 mmol)的乙醇(20 mL)溶液，滴畢，低溫劇烈攪拌反應(yīng)24 h。減壓抽濾，濾餅真空干燥，用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得(Z)-4-[2-(1-氯-2-乙氧基-2-羰亞甲基)肼基]-苯甲酸(2a)。用類似的方法合成2b～2i。

(2) 3的合成(以3a為例)

在反應(yīng)瓶中加入無(wú)水乙醇鈉0.68 g(10 mmol)的無(wú)水乙醇(50 mL)溶液，5，5-二甲基-1，3-環(huán)己二酮1.4 g(10 mmol)，攪拌使其溶解，于室溫反應(yīng)7 h；加入2a2.71 g(7)(10 mmol)，于室溫反應(yīng)1 h;于90 ℃回流反應(yīng)過(guò)夜。用10%鹽酸調(diào)至pH 7,分液，水層用乙酸乙酯萃取至無(wú)色；合并萃取液，濃縮后經(jīng)硅膠柱層析[梯度洗脫劑:V(乙酸乙酯) ∶V(石油醚)=3 ∶1～1 ∶1]分離，用丙酮重結(jié)晶得4-[3-(乙氧?；?-6，6-二甲基-4-氧-4，5，6，7-四氫吲唑-1]-苯甲酸(3a)。用類似的方法合成3b～3i。

2 結(jié)果與討論

2和3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1；1H NMR和MS數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

2．1 合成

在2的合成中，重氮鹽與2-氯乙酰乙酸乙酯的反應(yīng)直接在冰浴中進(jìn)行，不需分離，從而保證了反應(yīng)的安全性。

3的合成需在無(wú)水的環(huán)境中進(jìn)行。對(duì)于類似反應(yīng)，文獻(xiàn)[5，6]采用Et3N/無(wú)水乙醇體系，但產(chǎn)率不高。為此，以合成3a為例，考察了反應(yīng)溶劑對(duì)其收率的影響，結(jié)果表明，在MeCN-H2O/NaOH,丙酮-H2O/LiOH, EtOH/LiOH， DMF/LiOH及DMF-H2O/LiOH體系下，反應(yīng)不能進(jìn)行;在EtOH/NaHCO3，苯/Et3N和EtOH/Et3N體系中，有少量3a生成，但雜質(zhì)多，難以純化；在EtOH/EtONa體系中，只得到未環(huán)合的產(chǎn)物；而在EtOH/EtONa中回流反應(yīng)，則能得到約30%的3a，而且雜質(zhì)較少。由此可見(jiàn)，合成3a的最佳反應(yīng)體系為EtOH/EtONa。

表1 2和3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Experimental results of 2 and 3

表2 2和3的1H NMR和MS數(shù)據(jù)Table 2 1H NMR and MS data of 2 and 3

在3的純化中，只有3a尤其特殊，其易附于硅膠柱上，較難洗脫。

2.2 反應(yīng)活性考察

為了進(jìn)一步了解該反應(yīng)的反應(yīng)活性，我們采用乙酰乙酸乙酯替代5，5-二甲基-1，3-環(huán)己二酮與1反應(yīng)，得到的化合物產(chǎn)率很高(約70%)。并且，該反應(yīng)在未加熱的狀態(tài)下就能得到產(chǎn)物，未發(fā)現(xiàn)副產(chǎn)物的生成。我們推測(cè)可能是由于環(huán)己二酮的環(huán)狀結(jié)構(gòu)造成一定的環(huán)張力，從而影響該反應(yīng)的反應(yīng)性能。

3 結(jié)論

合成了9個(gè)新型的芳香吲唑酮類化合物，可利用其作為新型抗癌單體結(jié)構(gòu)的分子庫(kù)[7]。該方法具有實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)單、操作方便、產(chǎn)率較高的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)研究Hsp90抑制劑類抗癌藥具有一定的意義。

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