吳新安，都模勤

中國(guó)人民解放軍第105醫(yī)院感控科，合肥230031

黃酮碳苷類化合物ESIMS-MS裂解規(guī)律初探

吳新安*，都模勤

中國(guó)人民解放軍第105醫(yī)院感控科，合肥230031

本研究通過ESIMS-MS技術(shù)分析一系列黃酮化合物的裂解情況，探討黃酮碳苷類化合物ESIMS-MS的裂解規(guī)律。結(jié)果表明，六碳黃酮碳苷ESIMS-MS的子離子譜圖中出現(xiàn)［M-H-60］–、［M-H-90］–和［M-H-120］–的離子碎片;五碳黃酮碳苷ESIMS-MS的子離子譜圖中只能產(chǎn)生脫去60和90質(zhì)量單位的碎片峰。該研究表明黃酮碳苷類化合物ESIMS-MS裂解具有一定的規(guī)律性，并有助于發(fā)現(xiàn)微量黃酮碳苷類成分。

黃酮碳苷;ESIMS-MS

隨著分析技術(shù)的發(fā)展，以發(fā)現(xiàn)活性成分為目的的中藥及天然藥物研究已經(jīng)進(jìn)入了較為快速的階段，如何借助先進(jìn)的分析技術(shù)較為快速的發(fā)現(xiàn)和分析中藥及天然產(chǎn)物中活性成分成為天然藥物化學(xué)領(lǐng)域的關(guān)鍵問題之一［1］。黃酮碳苷類化合物近年來研究越來越深入，已經(jīng)形成一個(gè)較大的體系［2-5］。但是有關(guān)該類化合物的波譜學(xué)規(guī)律方面較少見專門的研究報(bào)道，本文利用從短瓣金蓮花中分離得到的一系列黃酮碳苷類化合物作為研究對(duì)象，運(yùn)用ESIMS－MS技術(shù)分析這些黃酮碳苷類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，初步總結(jié)出黃酮碳苷類化合物的ESI-MS/MS裂解規(guī)律;并運(yùn)用這些規(guī)律來進(jìn)一步分析短瓣金蓮花中其他可能存在的微量黃酮碳苷類成分。

1 材料和方法

1.1 藥材與對(duì)照品

短瓣金蓮花采集于大興安嶺，經(jīng)生藥學(xué)鑒定為Trollius ledebouri Reichb;對(duì)照品牡荊苷、葒草苷、2''-O-(3'''，4'''-二甲基苯甲?；?牡荊苷、2''-O-(3'''，4'''-二甲基苯甲?；?葒草苷、2''-O-(2'''-甲基丁酰基)牡荊苷、2''-O-(2'''-甲基丁?；?葒草苷等?；狞S酮碳苷均由作者從短瓣金蓮花中分離得到［3，4］，純度達(dá)到95%以上。

1.2 儀器和試劑

API3000串聯(lián)四級(jí)桿型液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)ABI公司);硅膠薄層層析板(青島海洋化工廠);大孔樹脂HP20(日本三菱公司)。分析用的試劑為色譜純。

1.3 提取與分離

短瓣金蓮花用60%乙醇提取后，醇提取物經(jīng)過簡(jiǎn)單的溶劑處理后，除去脂溶性成分，得到樣品供測(cè)試。

1.4 結(jié)構(gòu)分析方法

對(duì)照品和樣品經(jīng)過Q1掃描得到其分子量信息，然后進(jìn)行子離子掃描得到具有碎片離子信息的二級(jí)質(zhì)譜，結(jié)合已知化合物的離子信息規(guī)律、文獻(xiàn)報(bào)道等方法分析并獲得其可能的結(jié)構(gòu)。

1.5 質(zhì)譜分析條件

電噴霧離子化原(ESI);負(fù)離子檢測(cè);照射電壓(IS)為-4000 V;源溫度(TEM)為50℃;DP電壓為-60 V;霧化氣(NEB)為8;氣簾氣(CUR)為10。

2 結(jié)果與討論

2.1 對(duì)照品的MS－MS分析

對(duì)照品經(jīng)過Q1掃描得到其分子量信息，對(duì)其負(fù)離子進(jìn)行子離子掃描，得到各自的子離子信息(Fig.1)。結(jié)合對(duì)照品的結(jié)構(gòu)分析Fig.1中出現(xiàn)的子離子信息，對(duì)照品1葒草苷(Fig.1b)的負(fù)離子一級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)的m/z447的子離子掃描圖中出現(xiàn)，m/z 387為［M-H-CHO-CH2OH］–(［M-H-60］–)，m/ z 357為［M-H-CHO-CHO-CH2OH］–(［M-H-90］–)，m/z 327為［M-H-CHO-CHO-CHO-CH2OH］–(［MH-120］–);同理對(duì)對(duì)照品2牡荊苷(Fig.1a)的一級(jí)質(zhì)譜負(fù)離子圖譜中出現(xiàn)的準(zhǔn)分子離子峰431進(jìn)行子離子掃描，存在以下子離子出現(xiàn):m/z 371為［M-HCHO-CH2OH］–(［M-H-60］–)，m/z 341為［M-HCHO-CHO-CH2OH］–(［M-H-90］–)，m/z 311為［MH-CHO-CHO-CHO-CH2OH］–(［M-H-120］–);而被?；狞S酮碳苷首先脫去?；鶊F(tuán)，如對(duì)照品3 (2''-O-(2'''-甲基丁?；?牡荊苷，F(xiàn)ig.1c)m/z 427 (M-H-isobutyryl)及對(duì)照品4(2''-O-(2'''-甲基丁?；?葒草苷，F(xiàn)ig.1d)m/z 443(M-H-isobutyryl)，然后也出現(xiàn)上述碎片離子峰信息m/z 367為［427-HCHO-CH2OH］–(［427-H-60］–)，m/z 337為［427-H-CHO-CHO-CH2OH］–(［427-H-90］–)，m/z306為［427-H-CHO-CHO-CHO-CH2OH］–(［427-H-120］–);m/z 383為［443-H-CHO-CH2OH］–(［443-H-60］–)，m/z 353為［443-H-CHO-CHO-CH2OH］–(［443-H-90］–)，m/z 323為［443-H-CHO-CHOCHO-CH2OH］–(［443-H-120］–);對(duì)照品5(2''-O-(3'''，4'''-二甲基苯甲?；?葒草苷)和6(2''-O-(3'''，4'''-二甲基苯甲?；?牡荊苷)同樣也是先脫去苯甲?；鶊F(tuán)，然后出現(xiàn)類似的子離子碎片信息(Fig.1e，f)。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品的ESI-MS色譜圖Fig.1 ESI-MS chromatogram of standard compounds

通過以上對(duì)照品分析，我們發(fā)現(xiàn)在苷類化合物的ESI-MS/MS中，如果不首先出現(xiàn)脫糖基的碎片峰，而是在黃酮碳苷MS-MS的子離子譜圖中存在以下有規(guī)律的離子碎片:［M-H-60］–、［M-H-90］–和［M-H-120］–，基本上可以斷定為六碳黃酮碳苷類化合物，此結(jié)果與喬善義等研究［1］基本一致，但是喬善義等研究表明如果黃酮碳苷類化合物所連接的糖為五碳糖，只能產(chǎn)生脫去60和90質(zhì)量單位的碎片峰，不產(chǎn)生脫120質(zhì)量單位的碎片峰，這也進(jìn)一步在本實(shí)驗(yàn)中得到印證。對(duì)負(fù)離子質(zhì)譜圖中出現(xiàn)準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行子離子掃描，碎片峰由于強(qiáng)度的差異，脫60、90和120質(zhì)量單位的碎片并不都能出現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)中采取局部譜圖放大的方式才能見到強(qiáng)度弱的碎片峰，但是脫120質(zhì)量單位的碎片峰均可見。

2.2 樣品的HPLC-MS-MS分析

樣品經(jīng)過HPLC-MS分析后，發(fā)現(xiàn)一個(gè)分子量為490的化合物(A)，分析該化合物的MS譜圖(Fig.2)，我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)譜圖中沒有直接出現(xiàn)脫糖的離子峰，推測(cè)其為黃酮碳苷。

圖2 化合物A的ESI-MS色譜圖Fig.2 ESI-MS chromatogram of compound A

進(jìn)一步分析MS圖譜，該化合物脫去一個(gè)28(甲?；?及30(甲氧基)質(zhì)量數(shù)后的離子峰出現(xiàn)碳苷的MS碎片規(guī)律，結(jié)合我們前面的已知化合物的碎片規(guī)律和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，認(rèn)為該化合物可能為葡萄糖的2位被甲?；坝屑籽趸〈狞S酮碳苷。譜圖中出現(xiàn)牡荊苷的碎片離子峰，故其母體可能為牡荊苷，可能結(jié)構(gòu)如下［6］:

圖3 化合物A的結(jié)構(gòu)式Fig.3 Stucture of compound A

3 討論

采用常規(guī)植物化學(xué)手段對(duì)所研究的對(duì)象進(jìn)行粗分離，結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研，運(yùn)用HPLC-MS/MS的分析方法快速分離鑒定植物中的化學(xué)成分或活性成分具有快速、簡(jiǎn)單、低成本等優(yōu)點(diǎn)，為天然活性成分研究提供了新方法和思路;但是本實(shí)驗(yàn)僅僅就部分黃酮碳苷的ESI-MS/MS的子離子掃描圖譜進(jìn)行分析總結(jié)，反映黃酮碳苷類化合物在軟電離條件下的裂解規(guī)律，只能為該類化合物的結(jié)構(gòu)解析提供另一個(gè)側(cè)面的證據(jù)支持，尤其對(duì)分析植物已知該類化學(xué)成分中活性成分會(huì)起到事半功倍作用;完全闡明該類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，探討質(zhì)譜上鑒定該類化合物的可能性，還需要從EI裂解、FAB裂解等進(jìn)一步總結(jié)分析。

1 Qiao SY(喬善義)，Guo JF(郭繼芬)，Zhao YM(趙毅民)，et al.Rapid discovery and analysis of C-glycosylflavones from Stellaria media(L.)Cyr.by MS/MS.Chin J Nat Med(中國(guó)天然藥物)，2003，1:120-123.

2 Wu XA(吳新安)，Zhao YM(趙毅民).Advance of study on natral flavone C-glycosides.Pharm J Chin People's Liber Army(解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào))，2005，21:135-138.

3 Wu XN，Zhao YM，Yu NJ.A novel analgesic pyrazine derivative from the leaves of Croton tiglium.J Asian Nat Prod Res，2007，9:437-441.

4Wu XA(吳新安)，Zhao YM(趙毅民)，Zhao G(趙剛).Flavone C-glycosides from Trollius ledebouri.China J Chin Mat Med(中國(guó)中藥雜志)，2007，32:864-865.

5 Xinan Wu，Yimin Zhao，Nengjiang Yu.Flavone C-glycosides from Trollius ledebouri.J Asian Nat Prod Res，2006，8:541-544.

6 Yu DQ，Yang JS.The Handbook of Analysis Chemistry，2nded.Beijing:Chemistry Industry Publishing House，1996.

Rule of ESIMS-MS on C-glycosyflavonnes

WU Xin-an*，DOU Mo-qin
Department of infection control，No.105th Hospital of PLA，Hefei 230031，China

In this research the cracking situation of a series of C-glycosyflavonnes compounds was analyzed by the ESIMS-MS chromgraphy technology.The results showed that the ion peaks of［M-H-60］–，［M-H-90］–and［M-H-120］–were found in C-glycosyflavonnes with hexose and the ion peaks of［M-H-60］–and［M-H-90］–were obtained in the choromgraphy of ESIMS-MS on C-glycosyflavonnes with pentose.Conclusively，C-glycosyflavones had their own craking law by C-glycosyflavonnes chromagraphy method which is helpful in finding some new and trace C-glycosyflavonnes compounds.

C-glycosyflavonnes;ESIMS-MS

1001-6880(2011)06-1085-03

2010-02-25 接受日期:2011-06-18

中國(guó)人民解放軍南京軍區(qū)十一·五項(xiàng)目(06MA54);南京軍區(qū)學(xué)科帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(122工程)

*通訊作者 Tel:86-551-2143632;E-mail:xinanw@21cn.com

R284.1

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