劉小蘭 ，張 軍 ，張 玲，季新成

（1.新疆出入境檢驗檢疫局，新疆烏魯木齊 830063；2.哈密市伊吾縣獸醫(yī)站，新疆哈密 830000）

新孢子蟲病是由犬新孢子蟲（Neospora Caninum）寄生于牛、羊、犬等多種動物體內引起的一種原蟲病。該病可垂直傳播，懷孕母牛可以將新孢子蟲經胎盤傳染給子代乳牛，子代牛隨后的妊娠過程中，反復發(fā)生感染[1-2]。該病除可造成流產和產死胎、弱胎、木乃伊胎等直接的經濟損失外，還會造成產乳量下降和繁殖能力降低等間接的經濟損失[3]，已引起各國學者的廣泛關注。

為進一步了解新疆地區(qū)牛新孢子蟲病的流行情況，本實驗采用瑞典Svanova公司生產的N.Caninum抗體檢測試劑盒對采自新疆6個地區(qū)共327份牛血清進行N.caninum抗體檢測，并且有代表性選擇20頭牛進行了5次連續(xù)采樣檢測，對血清抗體消長情況進行了分析。

1 材料與方法

1.1 被檢血清 被檢血清采自新疆6個不同地區(qū)和不同年齡的牛群，共采集血清327份。并根據檢測結果對伊犁、哈密、昌吉、奇臺4個地區(qū)的33頭牛連續(xù)進行5次血清采集，每次間隔30~40天。所有血清分離后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑及儀器 瑞典Svanova公司生產的N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit，批號為P06137。EXL800酶標儀，eppendorf不同量程加樣器。

1.3 操作方法 按試劑盒說明書進行實驗操作和結果判定。

2 結果

2.1 檢測結果與地區(qū)分布情況

通過對采自新疆6個地區(qū)（牛群）的327頭牛血清進行新孢子蟲抗體檢測，共檢出陽性血清80份，各地區(qū)分布不一，最高感染率達47.2%，最低感染率為6.7%，平均感染率為24.5%，且在流產牛群中陽性率明顯偏高，見表1。

表1 被檢血清分布及檢測結果

2.2 新孢子蟲抗體陽性與牛年齡的關系

對伊犁、哈密、昌吉3個地區(qū)132頭年齡清楚的牛的檢測結果進行統(tǒng)計分析，由檢測結果可以看出，各年齡的牛均可感染牛新孢子蟲，同一地區(qū)不同年齡階段的牛抗體陽性率差異明顯，且在年齡較大的牛群中較高，見表2。

表2 不同地區(qū)不同年齡牛新孢子蟲血清抗體結果

2.3 不同時期新孢子蟲病血清抗體水平消長情況

從2.1檢測結果中有代表性的選出20頭牛，每次間隔30~40天進行了5次連續(xù)采樣檢測，見表3。

表3 同一牛不同時期抗體水平消長情況

從以上結果顯示，編號為 3，4，6，14，15，16，17，18，23，24，25，27，31，32，33 的 15 份血清抗體在檢測的時間段內一直呈陽性。編號為 1，2，5，7，8，10，11，12，20，21，22，30 的 12 份血清抗體第一次或第二次檢測結果為陽性，其余檢測結果均為陰性。編號為13的血清抗體在第三次檢測結果由陰性轉為陽性。編號為29的血清抗體在第五次檢測結果由轉為陰性。9，19，26，28號樣品出現不規(guī)則的抗體轉變，是否由于采樣或實驗操作所致，還有待于分析。跟蹤調查結果顯示，血清抗體陽性至少可以持續(xù)半年以上。

3 討論

新孢子蟲病呈世界性廣泛分布，目前已有70多個國家和地區(qū)有該病的發(fā)生和流行的報道，Sadrebazzaz等[4]采用間接熒光抗體試驗（IFA）對伊朗馬什哈德地區(qū)的810份血清進行了新孢子蟲檢測，結果15.18%的血清為陽性。Osawa[5]等采用ELISA對葡萄牙不同地區(qū)879頭奶牛和肉牛樣品進行了檢測，血清抗體陽性率為29.8%。Koiwai[6]對日本18個地區(qū)的2 420份奶牛血清采用IFA進行了檢測，血清抗體陽性率為5.8%。我國關于該病檢測的報道也很多，于晉海等[7]對來自國內10個省（市、自治區(qū)）的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清進行檢測，結果顯示，乳牛新孢子蟲的抗體陽性率為17.2%。丁德等[8]通過對吉林省4個地區(qū)153份黃牛血清樣本進行了新孢子蟲病的流行病學調查，結果梅河、舒蘭、琿春、雙陽地區(qū)黃牛的新孢子蟲陽性率分別為45.5%，7.14%，10.53%和16.67%。沈莉萍等[9]對上海地區(qū)41個奶牛場1 239份奶牛血清中有63份抗體陽性，陽性率為5.08%，各場陽性率變幅較大（0~44.23%）。Xia[10]等對廣東地區(qū)5個奶牛場的370份血清進行用ELISA法進行了檢測，平均陽性率為18.9%，在流產牛群中的陽性率（22.7%）比非流產牛群陽性率（16.3%）偏高，但差異不顯著。本研究對采自新疆6個地區(qū)（牛群）的327頭牛血清進行新孢子蟲抗體檢測，共檢出陽性血清83份，最高感染率達47.2%，最低感染率為6.7%，平均感染率為24.5%，且在流產牛群中陽性率明顯偏高（38.3%）。各地區(qū)陽性率差異較大。為了解血清抗體在體內消漲情況，對20頭牛每次間隔30~40天進行5次連續(xù)采樣檢測，結果表明，血清抗體陽性持續(xù)時間至少半年以上。

于晉海等[7]對212頭有年齡資料的牛血清檢測，結果表明血清抗體陽性率在不同年齡段的分布不同，乳牛在1歲、3歲和7歲時有3個波峰，7歲以后陽性率下降，其中以7歲乳牛為最多，陽性率為36.4%，各個年齡段乳牛的抗體陽性率差異不顯著。Wouda等[11]的研究結果顯示，大多數牛群各個年齡段的血清陽性率基本相近。Xia[10]等的結果也表明該病的血清抗體陽性率與年齡沒有顯著的聯系。而Jensen[12]則認為，血清抗體陽性率隨著年齡的增加而增加。本研究對有年齡記錄的132份牛血清樣本按不同地區(qū)、年齡分別進行比較統(tǒng)計，結果表明，昌吉地區(qū)12月齡以下牛的血清抗體陽性率為35%，12~24月齡為51.9%，伊犁和哈密地區(qū)12月齡以下，未發(fā)現血清抗體陽性牛，各年齡牛差異顯著，且與該地區(qū)整體陽性率呈正相關。這些12月齡以下牛是因先天感染或母原抗體所致，還是來自后天感染，因我們所采集的樣品數量和具體背景資料有限，尚需進一步研究。

新疆是我國重要的畜牧業(yè)生產基地，養(yǎng)牛業(yè)又是主要支柱產業(yè)，近年來，在新疆地區(qū)的很多奶牛場每年有近20%的妊娠母牛發(fā)生不明原因的流產，經檢測，布氏桿菌等感染性流產疫病的檢測結果均為陰性，這些流產病因很可能是由新孢子蟲病所致，在新疆地區(qū)對該病的防控還有待加強。近年來，有大批量奶?；蜻z傳物質從國外進入中國市場，在改良品種的同時，也進一步增加了疫病的傳入風險，目前，進口奶牛及遺傳物質尚沒有對新孢子蟲病的檢測要求，進一步增加了該病的傳入風險，鑒于該病的危害性，建議口岸加強對該病的檢驗檢疫。

[1]Oliveira V S，Alvarez-Garcia G，Ortega-Mora L M，et al.Abortions in bovines and Neospora caninum transmission in an embryo transfer center[J].Vet Parasitol，2010，173（3/4）：206-210.

[2]Yildiz K，Kul O，Babur C，et al.Seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle ranches with high abortion rate:special emphasis to serologic co-existence with Toxoplasma gondii，Brucella abortus and Listeria monocytogenes [J].Vet Parasitol，2009，164（2/4）：306-310.

[3]Reiterova K，Spilovska S，Antolova，et al.Neospora caninum，potential cause of abortions in dairy cows:the current serological follow-up in Slovakia[J].Vet Parasitol，2009，159（1）：1-6.

[4]Sadrebazzaz A，Haddadzadeh H，Esmailnia K，et a1.Serological prevalence of Neospora caninumin healthy and aborted dairy cattle in Mashhad[J].J.Vet Parasitolol.2004，124（3/4）：201-204．

[5]Osawa T，Wastling J，Acosta L，et a1.Seroprevalence of Neospora caninum in fection in dairy and beef cattle in Paraguay[J].Vet Parasitol，2002，110（1/2）：17-23．

[6]Koiwai M，Hamaoka T，Haritani M，et a1．Nationwide seroprevalence of Neospora caninum among dairy cattle in Japan[J].Vet Parasitol，2006，135（2）：175-179.

[7]于晉海，劉群，夏兆飛.牛新孢子蟲病和弓形蟲病的流行病學調查[J].中國獸醫(yī)科學，2006，36（3）：247-251.

[8]丁德，于龍政，賈立軍.吉林省部分地區(qū)黃牛新孢子蟲病的流行病學調查[J].畜牧與獸醫(yī)，2006，38（11）：34-36.

[9]沈莉萍，劉佩紅，徐鋒，等.上海地區(qū)奶牛犬新孢子蟲病血清學抗體檢測[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病，2006，14（2）：14-16.

[10]Xia H Y，Zhou D H，Jia K，et al.Seroprevalence of Neospora caninum Infection in Dairy Cattle of Southern China[J].J Parasitol，2010，97（1）：172-173.

[11]Wouda W，Bartels CJM，Moen A R，et a1.Characteristics of Neospora caninum-associated abortion storms in dairy herds in the Netherlands（1995 to 1997）[J].Theriogenology，1999，52（2）：233-245.

[12]Jensen A M.Associations of Neospora caninumseropositivity with gestation number and pregnancy outcome in Danish dairy herds[J].Prev Vet Med，1999，40（3/4）：151-163.

[13]何曉杰，蘇娃，王振寶.新疆伊犁部分地區(qū)奶牛新孢子蟲病血清學調查[J].中國動物檢疫，2010，27（11）：44-46.