薛俊龍，王國艷，張偉業(yè)，張國權(quán)，田林君，劉一飛

（山西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原 030032）

雞白痢和雞傷寒是由雞白痢沙門氏菌和傷寒沙門氏菌引起的嚴重危害雛雞和青年雞的一種細菌性傳染病，以經(jīng)卵垂直傳播和消化道感染的水平傳播為主，給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。近年來，國內(nèi)外學者對該病的防制進行了大量的研究和探索[1-3]，我國目前對該病的防制主要是通過檢疫并淘汰陽性雞等措施以凈化種雞場。大多數(shù)商品雞飼養(yǎng)者，還是主要通過抗菌素防治該病，但抗生素使用不當或濫用，往往達不到控制該病的目的，還常常導致藥物殘留和耐藥菌株的出現(xiàn)[4-5]，近年來，該病有擴大流行的趨勢[6]。因此，利用微生態(tài)制劑預防該病[7]，又一次受到人們的重視。本研究使用微生態(tài)制劑，通過競爭排斥方法，建立了符合生產(chǎn)實際的預防模型，旨在探討微生態(tài)制劑臨床應(yīng)用的新方法。

1 材料

1.1 培養(yǎng)基及試劑 SS培養(yǎng)基，購自杭州天河微生物試劑有限公司；亞硒酸鹽胱氨酸增菌培養(yǎng)基（S.C）基礎(chǔ)，購自北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司；其他試劑均為市場購買。

1.2 菌種及標準陽性血清 雞白痢沙門氏菌C79—13以及標準陽性血清，購自中國獸藥監(jiān)察所。

1.3 微生態(tài)制劑 市售的禽用“益生素”（主要益生菌為嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌等），河北某獸藥廠生產(chǎn)。硫酸丁胺卡鈉霉素可溶性粉，購自太原某生物技術(shù)有限公司。

1.4 攻毒菌液 將雞白痢沙門氏菌，接種于SS瓊脂平板，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，而后轉(zhuǎn)菌于營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，用生理鹽水洗下菌苔，平板稀釋培養(yǎng)計數(shù)法計算活菌數(shù)。6日齡攻毒雛雞口服105/只[8]，21日齡時攻毒6億/只個活菌。

1.5 實驗動物 經(jīng)平板凝集反應(yīng)檢測，雞白痢和副傷寒均為陰性健康種雞孵育的1日齡海蘭褐公雛300羽。

2 方法

2.1 分組及處理 試驗共分6組，每組50只1日齡海蘭褐雛雞。

試驗1組：1~3日齡，根據(jù)使用說明（每10 g配水200~400 kg）硫酸丁胺卡鈉霉素可溶性粉飲水，4~8日齡，每只每天灌服活菌制劑0.4 mL（含有效活菌量16×108），6日齡時每只雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒。

試驗2組：1~3日齡，根據(jù)使用說明（每10 g配水200~400 kg）硫酸丁胺卡鈉霉素可溶性粉飲水，4~8日齡，每只每天灌服微生態(tài)制劑0.4 mL（含有效活菌量16×108），6日齡時，每只雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒。15~18日齡，根據(jù)使用說明（每10 g配水200~400 kg）硫酸丁胺卡鈉霉素可溶性粉飲水，19~23日齡，每只每天灌服活菌制劑0.4 mL（含有效活菌量32×108），21日齡雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒。

試驗3組：1~3日齡，根據(jù)使用說明（每10 g配水200~400 kg）硫酸丁胺卡鈉霉素可溶性粉飲水，6日齡時每只雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒。

試驗4組：1~5日齡每只每天灌服活菌制劑0.4 mL（含有效活菌量16×108，6日齡時每只雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒。

攻毒對照組：6日齡時每只雛雞滴服雞白痢沙門氏菌進行攻毒，隔離飼養(yǎng)。

空白對照組：與試驗組飼喂同樣的飼料以及相同的管理措施，隔離飼養(yǎng)。

2.2 以上6組，在4日齡、8日齡、15日齡、21日齡、28日齡（試驗2組）以及30日齡時，各隨機抽取20只，取其泄殖腔棉拭子于S.C增菌液中培養(yǎng)24 h后，無菌條件下接種于SS瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24h。

同時每日觀察試驗雞的健康狀況，記錄發(fā)病和死亡情況；30日齡各組宰殺雛雞10只，觀察臟器病變，并從十二指腸、空腸、盲腸內(nèi)容物以及肝臟組織分離雞白痢沙門氏菌。

2.3 攻毒菌鑒定 對泄殖腔肛拭子、十二指腸、空腸、盲腸內(nèi)容物分離的可疑菌、死亡以及撲殺的雞臟器分離的可疑菌，采用與雞白痢標準陽性血清平板凝集試驗，進行鑒別是否有攻毒菌。

2.4 增重情況 試驗雛雞于1日齡時稱重，計算其每只的平均體重，30日齡時隨即稱重20只，計算其平均體重。

3 結(jié)果和分析

3.1 試驗組臨床癥狀觀察

各試驗組在攻毒前，從精神狀況到采食飲水等均與空白對照組相同，但自6日齡攻毒后的第四天開始，各組均表現(xiàn)不同程度的采食速度減慢，并隨著時間的推移，采食量減少，個別精神萎頓、羽毛松亂、腹瀉甚至死亡，具體如下：試驗1組，采食速度減慢現(xiàn)象持續(xù)了2天后，開始恢復且很快到正常，11~20日齡各死亡3次死亡5只；試驗2組，第一次攻毒后臨床癥狀與試驗1組相同，第二次攻毒后，沒有出現(xiàn)明顯的采食速度減慢和精神不振等臨床癥狀，10~23日齡共死亡8只；試驗3組，攻毒后隨著試驗的進行，采食量明顯減少，部分雞精神不振，羽毛松亂，腹瀉，排出白色糊狀糞便，并且附著于肛門周圍，怕冷，獨居一隅，發(fā)出“吱吱”的叫聲，并陸續(xù)出現(xiàn)死亡，于11~20日齡共死亡38只；試驗4組，臨床表現(xiàn)與試驗1組相同，個別雞精神萎頓，食欲廢絕，最后衰竭而死，從11~23日齡共死亡16只；攻毒對照組，攻毒后隨著試驗的進行，臨床癥狀和試驗3組相似，于11~22日齡共死亡47只；空白對照6組，死亡5只。以上臨床癥狀與死亡情況說明，由微生態(tài)制劑等組成預防模型，死亡少，臨床癥狀較輕。

3.2 臨床死亡情況及細菌分離鑒定

各攻毒試驗組臨床死亡病例，解剖的主要病理變化表現(xiàn)為：肝臟腫大，質(zhì)脆，點狀出血，實質(zhì)中有黃白色壞死灶。3次重復試驗死亡均主要集中于攻毒后的10天內(nèi)（即11~20日齡）具體見表1。

表 1 各組臨床死亡情況及細菌分離鑒定結(jié)果

從上表可知，肛拭增菌物在選擇培養(yǎng)基SS平板上的可疑菌落，通過與雞白痢陽性血清的凝集試驗，結(jié)果皆為陽性反應(yīng)，從而說明各試驗組的白痢攻毒保護率為：試驗1組為96.7%，試驗2組為96%，試驗3組為80%，試驗4組為94%，攻毒對照組為76%。結(jié)果表明：雛雞早期飼喂微生態(tài)制劑對雞白痢病可起到有效地預防作用。

3.3 試驗雞肛拭排菌檢測結(jié)果通過對各模型試驗組，三次重復的60只試驗雞攻毒前與攻毒后不同時間，雞白痢沙門氏菌肛拭排菌檢測，結(jié)果SC增菌液皆表現(xiàn)渾濁，SS培養(yǎng)基37℃ 24h培養(yǎng)結(jié)果見表2。

表 2 各組SS培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果

從表2結(jié)果可知，試驗雞在攻毒前和攻毒后，雞沙門氏菌病選擇培養(yǎng)基SS平板菌落的顏色為“乳白”和“紅色”兩種，一些“乳白”色菌落中心呈黑色即有H2S產(chǎn)生，但這些可疑菌落與雞白痢陽性血清玻板凝集反應(yīng)結(jié)果均為陰性；試驗2組，第二次攻毒后一周（28日齡），SS平板菌落均為“紅色”；空白對照組排菌情況與其它試驗組基本相同，無規(guī)律可循。

3.4 活體撲殺剖檢臟器病變與細菌分離鑒定

每個試驗組和各對照組每次重復試驗的每組隨即抽取10只，進行活體撲殺剖檢，臟器病變主要表現(xiàn)為：脾臟腫大，肝臟腫大，質(zhì)脆、漿膜上可見出血斑點，實質(zhì)中有黃白色壞死灶（具體總數(shù)為試驗3組7只，攻毒對照組7只，試驗1、2、4組和空白對照組無）。肝臟以及消化道各部位沙門氏菌分離結(jié)果見表3。

由表3可知，無論被撲殺的雞肝臟有無病變，皆分離不到雞白痢沙門氏菌；十二指腸和空腸內(nèi)容物中分離到可疑菌落，陽性血清凝集為陰性反應(yīng)，說明分離菌不是攻毒的雞白痢沙門氏菌。

3.5 試驗雞增重情況

試驗結(jié)束的30日齡，各組雛雞平均體重見下表4。

4 討論

4.1 研究結(jié)果表明，雛雞“1~5日齡口服微生態(tài)制劑”或“1~3日齡使用抗生素，4~8日齡口服微生態(tài)制劑”以及“抗生素使用后，立即使用微生態(tài)制劑”的預防模型，可有效地保護雛雞免遭雞白痢沙門氏桿菌強毒的攻擊，減輕其臨床癥狀，減少雛雞的死亡，提高育雛成活率。

實際生產(chǎn)中，為了預防雛雞細菌性疾病，主要是雛雞白痢沙門氏菌病和大腸桿菌病，多數(shù)種雞場，建議養(yǎng)殖者1~3日齡在飼料或飲水中投服抗生素（如慶大霉素、阿米卡星等），育雛過程中尤其在15日齡左右，臨床上雞群有呼吸道疾病發(fā)生時，基層獸醫(yī)首先提倡或要求使用抗生素進行控制，抗生素的頻繁使用嚴重破壞了雛雞本就不完整的消化道正常菌群，這時進入腸道的細菌很容易定居，白痢沙門氏菌也不例外。本研究預防模型的建立緊密結(jié)合生產(chǎn)實際，所以其不失為臨床控制雞白痢病較好的生物防治方法。

4.2 研究試驗中發(fā)現(xiàn)，雛雞白痢桿菌攻毒死亡的雛雞，其肝臟上全部有明顯的壞死病灶，經(jīng)分離培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)基SS平板上皆有沙門氏桿菌可疑菌落生長，并且與雞白痢沙門氏菌陽性血清發(fā)生凝集反應(yīng)，而30日齡活體撲殺的雛雞，盡管肝臟上也有同樣的壞死病灶（如攻毒對照組共7只），但選擇培養(yǎng)基SS平板上并無可疑菌生長。究其原因，可能是因為雞白痢沙門氏菌在體內(nèi)繁殖致病過程中，受到雞體自身免疫保護的強烈抵抗，當致病菌的數(shù)量降到臨床致病量臨界值以下時，即使臟器有病變，但不至于立即死亡而存活。

表3 各組肝臟以及消化道各部位沙門氏菌分離結(jié)果

表 4 試驗雞增重情況

4.3 從表2肛拭排菌試驗的結(jié)果中可知，無論是雞白痢沙門氏菌攻毒的試驗組，還是空白對照組，選擇培養(yǎng)基SS平板上均有疑似雞白痢沙門氏桿菌的生長，但通過其與陽性血清的平板凝集試驗皆表現(xiàn)陰性反應(yīng)，即非雞白痢沙門氏菌，究竟是哪個屬或那個種的細菌等有待進一步研究。

4.4 從試驗雞增重結(jié)果可知，試驗1、2、4組與空白對照組在30日齡時，平均增重差異不顯著，但試驗組還是比對照組稍輕，這與攻毒雞早期采食速度減慢甚至減少有關(guān)。但實際生產(chǎn)中媒介材料雞白痢沙門氏菌儲量很低或沒有，加之使用以上預防模型，臨床上將進一步保障雛雞的健康生長。

[1]王玉東，張文龍，劉國慶，等.雞白痢沙門氏菌病的發(fā)病特點及綜合防治[J].中國家禽，2001，23（11）：18-19.

[2]況彗星，韋婷.禽沙門氏菌的檢測與防治 [J].中國家禽，2003，25（4）：1-4.

[3]德國羅曼動物保健品有限公司北京代表處，上海羅曼動物保健品有限公司，《中國家禽》編輯部.歐洲家禽沙門氏菌病的流行現(xiàn)狀及其控制[J].中國家禽，2007，29（11）：53-54.

[4]劉業(yè)兵，張文龍，潘志明，等.陜西關(guān)中地區(qū)雞白痢沙門氏菌的藥敏試驗[J].畜牧獸醫(yī)雜志，1999，18（2）：7-9.

[5]徐樹強.雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].中國禽業(yè)導刊，2002，19（6）：15.

[6]薛俊龍，田林君，張國權(quán)，等.山西省雞沙門氏菌病流行病學調(diào)查分析[J].山西農(nóng)業(yè)科學，2010，38（9）：58-62.

[7]蔡榮，張曉梅，寧玲忠，等.不同微生態(tài)制劑對雛雞實驗感染雞白痢沙門氏桿菌的影響 [J].湖南農(nóng)業(yè)大學學報，2000，26（1）：61-63.

[8]趙靜，沈艷麗.應(yīng)用競爭排斥法預防雞白痢沙門氏菌感染[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006，（6）：76-77.