亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        甘草附子湯對去卵巢大鼠骨組織中Ⅰ型膠原代謝及組織蛋白酶K表達的影響

        2011-11-17 08:31:12李明慧王桂敏
        中國生化藥物雜志 2011年5期
        關(guān)鍵詞:劑量模型

        李明慧,王桂敏

        (遼寧醫(yī)學院 1.研究生學院,2.附屬第一醫(yī)院 中醫(yī)科,遼寧 錦州 121001)

        絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是指絕經(jīng)后婦女由于卵巢功能下降,雌激素水平急劇下降,骨吸收大于骨形成,以骨量減少,骨小梁變細、斷裂、數(shù)量減少,皮質(zhì)骨多孔、變薄為特征,以至骨的脆性增高及骨折危險性增加的一種全身性骨病。它是目前最為常見的骨代謝失調(diào)性疾病[1]。本研究旨在觀察甘草附子湯對去卵巢大鼠成骨細胞Ⅰ型膠原(ColⅠ)代謝和破骨細胞組織蛋白酶K(Cath K)表達的影響,探求溫腎健脾方對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的防治作用。

        1 材料

        甘草附子湯出自醫(yī)圣張仲景《傷寒論》的原方[2],由甘草、附子、白術(shù)、桂枝組成,自制;苯甲酸雌二醇(批號201009),上海第九制藥廠生產(chǎn)。

        Ⅰ型前膠原羧基末端前肽(PICP)和Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ICTP)測定試劑盒,美國RB公司;ColⅠ、Cath K試劑,購于北京博奧森生物科技有限公司。

        SD雌性大鼠,3月齡,體重(240±20)g,本校動物實驗研究中心,合格證號:遼實動2010-0015。

        2 方法

        2.1 分組

        健康SD大鼠40只,雌性,3月齡,體重(240±20)g,分為5組,每組8只,分別為假手術(shù)組、模型組、甘草附子湯高、低劑量組和雌激素組。

        2.2 造摸

        去卵巢大鼠模型是目前公認為與臨床最接近的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型[3]。腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉,取俯臥位,剪去背毛,常規(guī)消毒,鋪手術(shù)巾;取背側(cè)正中切口,在背部1-6腰椎位置剪開皮膚,向雙側(cè)鈍性分離,用止血鉗拉出游離的脂肪組織,找到粉紅色的卵巢,在其與子宮連接處用0號絲線結(jié)扎,剪去卵巢組織,止血,并向腹腔內(nèi)滴入鏈霉素注射液(8萬單位/mL)數(shù)滴,再作肌層、皮膚縫合[4]。假手術(shù)組僅摘除卵巢附近的脂肪組織一塊。術(shù)后大鼠活動正常,可自行飲水攝食。

        2.3 給藥

        造模1周后分別給藥,假手術(shù)組和模型組灌胃等量水,甘草附子湯組灌胃甘草附子湯,高劑量組2.86mL/g,低劑量組1.43mL/g,雌激素組給予苯甲酸雌二醇肌注1.5mg/kg,3次/周,共12周。

        2.4 觀察指標

        2.4.1 骨形態(tài)學指標的測定取右側(cè)股骨放入10%甲醛溶液中固定24 h以上,EDTA脫鈣,HE染色,制作病理學切片,在光鏡下觀察骨小梁的變化并攝像。

        2.4.2 骨生化指標的測定PICP和ICTP采用酶聯(lián)免疫吸附法按試劑盒說明進行測定。

        2.4.3 分子生物學指標的測定免疫組化法測定Cath K和ColⅠ蛋白。

        2.5 統(tǒng)計學方法

        采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理,所有數(shù)據(jù)均用(±s)表示,多組間比較用單因素方差分析,兩組間比較用LSD法進行顯著性檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

        3 結(jié)果

        3.1 大鼠骨組織形態(tài)學觀察

        結(jié)果見圖1。假手術(shù)組大鼠股骨遠端骨小梁數(shù)目較多,厚度較均勻,形成立體的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(圖1A)。模型組與假手術(shù)組比較,大鼠骨小梁數(shù)目明顯減少、變細、厚薄不均,間距增大,形狀各異,立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)受到破壞,骨髓腔擴大,部分區(qū)域可見大量的脂肪細胞(圖1B)。甘草附子湯高劑量組骨小梁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)基本恢復。甘草附子湯低劑量組、高劑量組、雌激素組與模型組相比,骨小梁數(shù)目有所增多,但低劑量組不如高劑量組明顯。

        圖1 為甘草附子湯對各組大鼠的骨小梁影響Fig.1 The influence of Gancaofuzi Decoction on bone trabeculae

        3.2 甘草附子湯對ColⅠ蛋白表達的影響

        結(jié)果見表1。ColⅠ蛋白主要表達在成骨細胞胞漿及細胞間質(zhì),陽性染色為棕黃色或深棕黃色纖維狀或顆粒狀。在骨細胞胞漿中亦有少量表達。光鏡下觀察各組照片可以發(fā)現(xiàn),甘草附子湯高、低劑量組、雌激素組和假手術(shù)組蛋白陽性。與假手術(shù)組相比,模型組大鼠皮質(zhì)骨及骨小梁中染色較淺,甘草附子湯高劑量組、低劑量組、雌激素組的灰度比模型組有所增加。

        3.3 甘草附子湯對Cath K蛋白表達的影響

        結(jié)果見表1。Cath K蛋白主要表達在骨小梁周圍的破骨細胞胞漿中,成骨細胞周圍亦可見到少量陽性顆粒,陽性染色為棕黃色。光鏡下觀察各組照片可見,Cath K蛋白的表達在模型組比假手術(shù)組明顯增多,比甘草附子湯組和雌激素組顯著減少。

        表1 各組的免疫組化染色的平均IOD值(×103)(±s)Tab.1 Group immunohistochemical stains average IOD values(×103)((±s)

        表1 各組的免疫組化染色的平均IOD值(×103)(±s)Tab.1 Group immunohistochemical stains average IOD values(×103)((±s)

        與模型組比較:1 P<0.05,2 P<0.01;與假手術(shù)組比較:3 P<0.01Compared with model group:1 P<0.05,2 P<0.01;Compared with normal control group:3P<0.01

        組 別 ColⅠCath K假手術(shù)組26.7±3.0 18.7±3.8模型組 16.6±4.53 78.9±5.03中藥高劑量組 24.9±3.92 23.8±3.41中藥低劑量組 21.2±4.01 21.3±3.3雌激素組 25.4±3.02 22.5±3.72

        免疫組織化學染色結(jié)果采用Image Pro Plus4.1圖像分析系統(tǒng)進行分析,每張片子選取不重疊的5個視野,計算陽性區(qū)域的積分光密度(integra optical density,IOD)計算其平均值。

        3.4 PICP和ICTP

        結(jié)果見表2。治療3個月后,甘草附子湯高劑量組和雌激素組血清PICP與模型組比較,顯著升高(P<0.05);甘草附子湯高劑量組和雌激素組血清ICTP水平與模型組比較,顯著下降(P<0.05);甘草附子湯高劑量組與雌激素組比較沒有顯著差異(P>0.05)。而甘草附子湯低劑量組與模型組差異不顯著。

        4 討論

        表2 各組大鼠PICP,ICTP表達(±s,n=8)Tab.2 Each rat,PICP ICTP expression(±s,n=8)

        表2 各組大鼠PICP,ICTP表達(±s,n=8)Tab.2 Each rat,PICP ICTP expression(±s,n=8)

        與模型組比較:1 P<0.05;與假手術(shù)組比較:2 P<0.05Compared with model group:1 P<0.05;Compared with normal control group:2 P<0.05

        組 別 PICP/(μg/L) ICTP/(μg/L)假手術(shù)組79.890±16.547 2.924±0.351模型組 77.660±9.6782 3.478±0.2972中藥高劑量組 94.437±12.4381 3.194±0.4031中藥低劑量組 83.875±13.506 3.032±0.391雌激素組 95.538±15.7841 3.300±0.4281

        傳統(tǒng)中醫(yī)認為“腎主骨,生髓”,所以研究抗骨質(zhì)疏松藥物多從補腎藥物著手[5-6],在大量臨床實踐中,結(jié)合中醫(yī)“腎為先天之本,脾為后天之本”“脾腎同治”,提出溫腎壯骨,健脾益氣為治則。治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松,療效顯著。故選取此方為治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的老方新用。

        現(xiàn)代藥理研究表明,甘草附子湯中附子、桂枝與甘草有抗炎作用。在PMOP中TNF-α及IL-2的炎性因子通過刺激軟骨細胞和破骨細胞減少糖蛋白合成,增加糖蛋白降解并產(chǎn)生膠原酶原和其他中性蛋白酶,釋放骨鈣等,從而導致骨質(zhì)疏松。附子,主要成分是生物堿等物質(zhì),主要抗炎成分是烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿,其抗炎機制可能與中樞和組織中的前列腺素有關(guān)[7]。甘草,目前已分離100多種黃酮類化合物、18種氨基酸、香豆素及多種生物堿[8],甘草酸單銨鹽對小鼠的炎性因子TNF-α及前列腺素具有明顯的抑制作用。白術(shù)主要含內(nèi)酯類、揮發(fā)油類和多糖類物質(zhì)[9],可降低關(guān)節(jié)液中 TNF-α、NO的生成來抑制炎癥的反應(yīng)。桂枝主要成分為揮發(fā)油,其中主要桂皮醇,主要通過抑制關(guān)節(jié)液中炎性細胞因子PGE2的活性和炎性介質(zhì)的含量,來發(fā)揮作用[10]。因此,甘草附子湯通過降低炎性因子TNF-α及IL-2,防止破骨細胞生成,從而減少骨浸蝕和骨破壞,降低骨質(zhì)疏松的發(fā)病率。

        成骨細胞增殖階段基因表達的ColⅠ是人體最豐富的膠原類型,約占骨基質(zhì)的80%~90%,它是構(gòu)成骨的重要成分[11-12]。ColⅠ在合成纖維過程中,在特定蛋白的作用下水解形成PICP并進入血液,因此,血中PICP水平反映了膠原合成速率成骨細胞的活性和膠原合成速率[13-15]。ColⅠ降解時,釋放一種成熟的也是唯一的一種交聯(lián)物ICIP[16-17],它以完整的免疫原性蛋白形式進入血液中,其與ColⅠ降解的比例為1∶1。因此,血清中ICTP是反映骨吸收高度敏感的特異性指標。所以,聯(lián)合檢測血清中PICP和ICTP的水平直接反映了骨Ⅰ型膠原合成和降解狀態(tài)[18]。本實驗中,甘草附子湯組血清中的PICP水平顯著高于模型組(P<0.05),甘草附子湯高劑量組較低劑量組更為顯著,而對于ICTP,甘草附子湯組血清中的含量顯著低于模型組(P<0.05)。可見,甘草附子湯可以促進骨形成,同時抑制了骨吸收,對去卵巢大鼠所致骨質(zhì)疏松有重要的防治作用。

        Cath K是破骨細胞分泌的一種溶酶體酶,其生理作用底物正是在有機骨基質(zhì)中含量豐富的ColⅠ。Cath K通過作用于ColⅠ蛋白的N端及C端三股螺旋處而降解骨纖維膠質(zhì),它對成骨膠原的降解能力遠遠高于其他各種金屬蛋白酶(MMPs),是骨吸收過程中的一個關(guān)鍵酶[20-21]。在本實驗中,模型組的Cath K活性明顯提高,甘草附子湯組及雌激素組Cath K活性明顯降低,其中甘草附子湯高劑量組與雌激素組無明顯差異。

        綜上所述,甘草附子湯通過下調(diào)破骨細胞Cath K的表達來抑制去卵巢大鼠骨組織中成骨細胞ColⅠ蛋白的降解,增加骨小梁的數(shù)量,改善骨小梁的結(jié)構(gòu),減低骨的轉(zhuǎn)換率,從而達到甘草附子湯對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松預防的目的。

        [1]Lane N E.Epidemiology,etiology and diagnosis of osteoporosis[J].Am JObstet Gynecol,2006,194(2):S3-S11.

        [2]王慶其.學習仲景方用甘草的臨床體會[J].上海中醫(yī)藥雜志,2008,48(2):11-13.

        [3]Uppel M E,Miller L M,Burr D B.The effect of the microscopic and nanoscale structureon bone fragility[J].Osteoporos Int,2008,19(9):1251-1265.

        [4]陳 東,王連唐,陳子怡,等.去卵巢后大鼠不同部位的骨組織計量學與骨密度研究[J].中國骨質(zhì)疏松雜志,2002,8(3):208-210.

        [5]孔月晴,王新江.骨質(zhì)疏松證治及腎主骨理論的科學性[J].中國醫(yī)藥學刊,2004,22(4):636-640.

        [6]王 亭,徐暾海.附子甘草配伍研究進展[J].中草藥,2009,40(8):1332-1334.

        [7]續(xù)海訓,徐康雅.參附注射液中附子成分分析[J].中醫(yī)雜志,2003,44(9):677-679.

        [8]蘇俊喜,周 穎,閆文軍,等.甘草有效成分應(yīng)用的研究進展[J].畜牧與飼料科學,2010,31(8):111-113.

        [9]Li CQ,He L C,Jin JQ,etal.Atractylenolide I and Atr-actylenolideⅢinhibit lipopolysaccharide-induced TNF-αand NO production in macrophages[J].Phytotherapy Res,2007,21(4):347-351.

        [10]吳修紅,劉麗佳,王喜軍.桂枝茯苓丸及組成中藥化學成分研究進展[J].中醫(yī)藥學報,2010,38(6):102-106.

        [11]袁紹輝,劉 偉,吳濱奇,等.骨質(zhì)疏松性骨折愈合過程中Ⅰ,Ⅱ型膠原蛋白表達與其力學性能[J].中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(2):208-212.

        [12]趙良軍,彭芬芬,莊 薇,等.骨質(zhì)疏松大鼠膝關(guān)節(jié)組織總膠原、Ⅰ型及Ⅱ型膠原蛋白的含量變化[J].中國組織工程研究與臨床康復,2011,14(2):205-207.

        [13]蘇友新,邢海清,鄭 良.強骨寶對糖尿病性骨質(zhì)疏松大鼠骨膠原代謝的影響[J].中國骨質(zhì)疏松雜志,2006,3(12):289-291.

        [14]陳樹清,周厚明,孫保國.補腎方對去卵巢大鼠血清中PICP、ICTP 的影響[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2009,3(13):13-14.

        [15]涂平生,徐 杰.金雀異黃酮對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合的實驗研究[J].解剖學研究,2005,2(27):108-112.

        [16]楊 光,張 燕.骨質(zhì)疏松骨代謝標志物研究進展[J].廣州醫(yī)藥,2006(1):8-10 .

        [17]Garnero P,F(xiàn)erreras M,Karsdal M A,etal.The type Icollagen fragments ICTP and CTX reveal distinct enzymatic pathways of bonecollagendegradation[J].J Bone Miner Res,2003,18(5):859-867.

        [18]Sigrist I M,Gerhardt C,Alini M,etal.The long-term effects ofovariectomy on bone metabolism in sheep[J].JBone Miner Metab,2007,25(1):28-35.

        [19]曾廣智,譚寧華.組織蛋白酶及其抑制劑研究進展[J].云南植物研究,2005,27(4):334-337.

        [20]Ravikumar M,Pavan S,Bairy S,etal.Virtual screening of cathepsink inhibitorsusing docking and pharmacophoremodels[J].Chem Biol Drug Des,2008,71(6):554-562.

        猜你喜歡
        劑量模型
        一半模型
        結(jié)合劑量,談輻射
        ·更正·
        全科護理(2022年10期)2022-12-26 21:19:15
        中藥的劑量越大、療效就一定越好嗎?
        不同濃度營養(yǎng)液對生菜管道水培的影響
        90Sr-90Y敷貼治療的EBT3膠片劑量驗證方法
        重要模型『一線三等角』
        重尾非線性自回歸模型自加權(quán)M-估計的漸近分布
        3D打印中的模型分割與打包
        FLUKA幾何模型到CAD幾何模型轉(zhuǎn)換方法初步研究
        2021国产视频不卡在线| 亚洲高清在线天堂精品| 真实国产乱子伦精品视频 | 99久久婷婷国产精品网| 熟女无套高潮内谢吼叫免费| 中文字幕无码av激情不卡| 国产小屁孩cao大人| 玩弄丝袜美腿超短裙校花| 国产主播一区二区三区蜜桃| 内射爽无广熟女亚洲| 无码不卡高清毛片免费| 亚洲又黄又大又爽毛片| 亚洲一区二区三区国产| 国产男小鲜肉同志免费| 国产乱人视频在线看| 日本岛国一区二区三区| 少妇一级淫片中文字幕| 一性一交一口添一摸视频| 国产农村妇女毛片精品久久久| 黄网站a毛片免费观看久久| 国产精品黑丝高跟在线粉嫩| 无码日韩精品一区二区三区免费| 国产在线不卡AV观看| 日本熟妇免费一区二区三区| 国产精品毛片无遮挡高清| 无码精品日韩中文字幕| 粗大挺进尤物人妻一区二区| 日韩精品国产精品亚洲毛片| 亚洲一区av在线观看| 富婆如狼似虎找黑人老外| 久久久精品人妻一区二区三区日本 | 日本一区二区久久精品亚洲中文无| 亚洲综合一区二区三区天美传媒 | 中文字幕无码精品亚洲资源网久久 | 亚洲精品国产av成拍色拍| 成人网站在线进入爽爽爽| 97精品伊人久久大香线蕉app| 国产高清精品在线二区| 日本道免费一区二区三区日韩精品 | 欧美性白人极品1819hd| 欧美丰满熟妇aaaaa片|