侯銳 王冠杰 張俠 （河南省濮陽市畜牧局 457000）

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采用超前免疫、大劑量疫苗治療非典型豬瘟的試驗(yàn)

侯銳 王冠杰 張俠 （河南省濮陽市畜牧局 457000）

通過對濮陽地區(qū)某豬場一起疫情的情況和臨床癥狀以及病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等確診為非典型豬瘟，并進(jìn)行超前免疫、大劑量豬瘟疫苗的緊急免疫接種和治療等方法的探討試驗(yàn)，結(jié)果表明，此診斷和防治方法效果良好、疫情得到控制。

非典型豬瘟 診斷 防治

2009年4月濮陽地區(qū)某豬場發(fā)生一起大的疫情，筆者對此疫情進(jìn)行了診斷和防治。

1 材料與方法

1.1 材料

病豬來自濮陽地區(qū)某豬場。普通肉湯與普通瓊脂等培養(yǎng)基均自行配制。ELISA檢測試劑盒購于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)。試驗(yàn)用兔購于河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院動物房。

1.2 方法

按常規(guī)的流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化進(jìn)行綜合判斷。實(shí)驗(yàn)室診斷：（1）觸片鏡檢：無菌采取剛病死仔豬心、肝、肺、血液等病料直接觸片，革蘭氏和瑞氏染色鏡檢。（2）細(xì)菌培養(yǎng)：無菌采取具非典型豬瘟癥狀仔豬脾和淋巴結(jié)接種普通瓊脂、普通肉湯培養(yǎng)基后置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h涂片觀察。（3）血清學(xué)檢驗(yàn)按照試劑盒操作說明應(yīng)用ELISA檢測病豬抗凝血中的豬瘟病原，步驟如下：①取抗凝血10ml，3000轉(zhuǎn)離心30min。②取白血球加裂解液(50μl裂解液+450μl蒸餾水)裂解1h。③離心5min抽取上清液。④加上清液75μl再加25μl單抗過夜。⑤洗滌5遍每次間隔3~5min，倒掉液體拍干。⑥加二抗(1μl二抗+99μl二抗稀釋液)作用1h。⑦洗滌同⑤。⑧加底物100μl避光顯色15min。⑨加終止液100μl，15min內(nèi)測定結(jié)果(定性判定：藍(lán)色為陽性，無色為陰性)。測病原必須免疫半月以上的豬。（4）兔體交叉免疫試驗(yàn)：采取3頭病死豬和重型病豬淋巴結(jié)和脾臟，分別研磨用生理鹽水制成1:10懸液，加青、鏈霉素各2000IU/ml，置4℃冰箱4h，吸取上清液，每份材料肌肉注射于2只健康家兔5ml/只。5d后再取健康家兔2只作對照，分別靜脈注射1:10稀釋的豬瘟兔弱毒凍干疫苗1ml 。以后每隔6h測溫1次，共5d。按《獸醫(yī)生物藥品制造及檢驗(yàn)規(guī)程》的標(biāo)準(zhǔn)判定熱型。

2 結(jié)果

2.1 常規(guī)檢查結(jié)果

2.1.1 流行病學(xué) 該病首先在一窩25日齡仔豬中發(fā)生，病豬體溫升高，排黃色或綠色稀糞，不食或少食，迅速消瘦，后又傳至其他圈舍。經(jīng)用多種抗生素及殺菌藥物治療無效。整個流行期間主要為45日齡左右仔豬，發(fā)病率和病死率分別為52.7%和84.8%。

2.1.2 臨床癥狀 病豬精神萎頓，拱背寒顫，背毛粗亂無光；體溫39.5~41℃左右，食欲減退至廢絕；病豬下痢，呈黃綠色，惡臭；用體溫計(jì)測量時發(fā)現(xiàn)體溫計(jì)抽出后附有壞死的腸黏膜；多以伏臥為主，勉強(qiáng)趕起后搖晃欲倒，極度消瘦；病豬在耳尖、四肢內(nèi)側(cè)有出血點(diǎn)；小公豬陰莖紅腫，包皮積尿，有渾濁物擠出；部分豬出現(xiàn)強(qiáng)直性抽搐，發(fā)出嘶啞的叫聲；病程幾天到1個月，其中育肥豬癥狀沒仔豬明顯。

2.1.3 病理變化 扁桃體輕度水腫，充血；淋巴結(jié)出血性水腫，切面多汁，甚至向外流滴；腎表面有極少量出血點(diǎn)，呈土黃色；少數(shù)病例脾邊緣出血性梗死；有的腹腔有大理石樣變和周邊出血；回腸、育腸及直腸粘膜有數(shù)量不變的出血點(diǎn)；個別豬回盲瓣處有淺淺的潰瘍灶。

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 觸片鏡檢 無菌采取剛病死仔豬心、肝、肺、血液等病料直接觸片，革蘭氏和瑞氏染色鏡檢，未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌。

2.2.2 細(xì)菌培養(yǎng) 無菌采取具非典型豬瘟癥狀仔豬脾和淋巴結(jié)接種普通瓊脂、普通肉湯培養(yǎng)基后置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h涂片觀察，均未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長。

2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)抗原測定結(jié)果

附表 抗原測定結(jié)果

待檢血液12345678陽性陰性 結(jié)果+++++++++++++++++++++++++-

2.2.4 兔體交叉免疫試驗(yàn) 3份被檢病料接種呈定型熱反應(yīng)，據(jù)此判定被檢3頭豬的病料中均含有豬瘟病毒。根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化及實(shí)驗(yàn)室診斷等進(jìn)行綜合判斷。確診為非典型性豬瘟。

2.3 防治結(jié)果

2.3.1 超前免疫 母源抗體水平在不同日齡、不同個體的分布是不平衡的，這就決定首免日期的不一致。仔豬哺乳前注射豬瘟疫苗可避免首免日期的差異，避免母源抗體的影響，接種1~2h后吃母乳，可使仔豬獲得堅(jiān)強(qiáng)免疫力。進(jìn)行2組試驗(yàn)：一組為22頭新生仔豬(共2窩)，進(jìn)行超免；另一組24頭(2窩)，在20日齡首免。實(shí)驗(yàn)結(jié)果超免獲得成功，只有1頭發(fā)??；20日齡首免的，有4頭在注苗前就已發(fā)病，注苗后又有8頭發(fā)病。

2.3.2 大劑量疫苗 大劑量疫苗可以中和一定的抗體而起到強(qiáng)化免疫作用，同時誘生一定量的干擾素，促進(jìn)病豬耐過。進(jìn)行2組試驗(yàn)。一組16頭20日齡仔豬，體溫正常，注射5頭份疫苗進(jìn)行了強(qiáng)化免疫，結(jié)果沒有1頭發(fā)病死亡；一組16頭體溫超過正常范圍，剛發(fā)病仔豬，注射10頭份疫苗進(jìn)行治療，同時配合青、鏈霉素和丁胺卡那霉素，結(jié)果痊愈4頭，死亡5頭，4頭成為僵豬。由此可見，應(yīng)用大劑量疫苗進(jìn)行強(qiáng)化免疫和初期緊急治療有一定效果，這一點(diǎn)正好符合免疫學(xué)有關(guān)原理。

基于上面2個試驗(yàn)，筆者開始對仔豬全部實(shí)行超前免疫，對尚未發(fā)病豬實(shí)行6頭份緊急接種，對發(fā)病期短的豬只進(jìn)行10頭份的大劑量疫苗治療，同時配合抗菌素；對瀕臨死亡和已死亡的豬采用深埋辦法，全場同時用2%~ 3%火堿大面積消毒。此后，疫情很快得到控制。

3 討論

3.1 發(fā)病原因分析

3.1.1 母源抗體的干擾 初生仔豬通過初乳獲得母源抗體，形成被動免疫，這對新生仔豬抵抗豬瘟病毒的感染具有重要作用。該場仔豬20d進(jìn)行首免，這時有些仔豬母源抗體低下，致使未接種就已感染甚至發(fā)??；而有的仔豬母源抗體過高，母抗抑制注入疫苗的應(yīng)答，所有這些為典型豬瘟的感染創(chuàng)造了條件。

3.1.2 仔豬的胎盤感染 每年春秋的定時注苗，使得有些母豬在妊娠早期接種，這樣可引起胎盤感染。胎盤感染存活的仔豬往往構(gòu)成持續(xù)性感染者(亞臨床感染)，但在外界因素突變(如氣候異常)，引起豬抵抗力下降，則表現(xiàn)出臨床癥狀，但多不典型。本場發(fā)病時，天氣陰雨、寒冷，這為非典型豬瘟發(fā)生的誘因。

3.1.3 疫苗使用不當(dāng) 種畜場獸醫(yī)人員的業(yè)務(wù)水平不高，注射疫苗時常不按比例稀釋疫苗；注射不嚴(yán)密，各豬劑量常不均勻；疫苗使用前未作毒價測定等，致使豬體注苗后不能產(chǎn)生足夠的豬瘟抗體。這是育肥豬發(fā)生非典型豬瘟的主要原因。

3.2 非典型性

部分豬具有典型豬瘟癥狀，即淋巴結(jié)切面的大理石樣變，大腸的紐扣狀潰瘍等。這主要是由于低毒力豬瘟病毒感染引起的。而低毒力株豬瘟病毒的存在，主要又與其所處環(huán)境有密切的關(guān)系：豬瘟病毒在抑制環(huán)境下(有一定抗體)，連續(xù)繼代，其毒力逐漸減弱；反之，在非抑制環(huán)境(無中和抗體)，弱毒又會逐漸增強(qiáng)。如果個體的中和抗體水平不足抵抗豬瘟病毒的感染，就會呈現(xiàn)出一種不完全免疫狀態(tài)，形成病毒的抑制環(huán)境，一旦病原入侵，與宿主原有抗體產(chǎn)生中和作用，其致病力必定減弱，多表現(xiàn)非典型。

3.3 抗原與抗體

豬瘟的確診與凈化的依據(jù)不是豬瘟抗體的實(shí)驗(yàn)室診斷，而是豬瘟抗原(帶毒豬)的實(shí)驗(yàn)室診斷。根據(jù)研究，豬瘟抗原抗體之間存在一定的微妙關(guān)系。同一頭豬同一時間可能存在強(qiáng)毒抗原(即帶毒)，但不一定存在強(qiáng)毒抗體，存在強(qiáng)毒抗體時不一定存在強(qiáng)毒抗原。凈化的依據(jù)應(yīng)該是抗原陽性的那些帶毒豬，而不是豬瘟強(qiáng)毒抗體陽性豬。

3.4 超前免疫

超前免疫在實(shí)際操作中有一定的困難，如母豬分娩過程可能拖長或者母豬晚上產(chǎn)仔，仔豬出生后已吮吸了初乳，疫苗稀釋后保存時間過長等，都會導(dǎo)致免疫失敗。

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（2011–04–19）

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