嚴(yán) 俊 陶文照 陳 偉 盧國鋒 胡育新

原發(fā)性肝癌嚴(yán)重危害我國人民的生命健康，大多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是晚期，不適合接受手術(shù)等根治性的治療手段，局部治療成為晚期肝癌的主要治療手段之一［1］。超聲引導(dǎo)下瘤內(nèi)酒精注射成為肝癌治療的重要手段之一［2］，但具有穿透力不足、需反復(fù)多次注射、局部疼痛等潛在不足。本研究中，我們在肝癌動(dòng)物模型上使用成本更為低廉的氫氧化鈉瘤內(nèi)注射，以了解該療法對(duì)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

氫氧化鈉，無水乙醇，生理鹽水(0.9%氯化鈉)均購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。氫氧化鈉依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，用生理鹽水配置成1%、2%、3%無菌溶液。BALB/c雄性裸鼠50只，4～6周齡，體重(20±2)g，由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，無特殊病原菌(SPF)級(jí)屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 人肝癌裸鼠移植瘤模型的建立

使用模型為上海長海醫(yī)院病理科陶文照教授所建立的裸鼠人肝癌組織模型(SMMU-LTNM)［3］。在無菌條件下將皮下移植瘤取出，并切成2 mm×2 mm×2 mm大小瘤塊，用套管針將瘤塊接種于上述50只裸鼠的前肢背部皮下，形成人肝癌裸鼠模型。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥方法

BALB/c裸鼠背部皮下植入瘤塊2周后，隨機(jī)分為5組，接受不同的試劑瘤內(nèi)注射，包括:①氫氧化鈉低濃度組(1% 氫氧化鈉);②中濃度組(2% 氫氧化鈉);③高濃度組(3% 氫氧化鈉);④對(duì)照組(生理鹽水);⑤陽性對(duì)照組(無水酒精)。瘤內(nèi)注射的藥物或生理鹽水的體積均為0.1 ml，每只動(dòng)物在第1天和第11天分別接受1次瘤內(nèi)注射。

1.4 觀察指標(biāo)

腫瘤移植后及治療期間，動(dòng)態(tài)觀察裸鼠移植瘤生長情況及裸鼠的體重變化、飲食和精神狀態(tài)的變化。應(yīng)用游標(biāo)卡尺測量皮下瘤體大小，并按(長×寬2/2)計(jì)算腫瘤體積，隨機(jī)分組后每3天測量一次。取皮下移植瘤置于10%中性福爾馬林液中固定，每封標(biāo)本在近中心處做病理切片，并行HE染色，光鏡下觀察腫瘤組織壞死情況，依據(jù)腫瘤壞死范圍分成輕度(壞死面積＜30%)、中度(壞死面積30% ～70%)、重度(壞死面積＞70%)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12.0軟件處理，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

生理鹽水組裸鼠皮下移植瘤體進(jìn)行性增大，且皮膚干燥、消瘦明顯，處于進(jìn)行性惡液質(zhì)狀態(tài)，平均體重為(18.8±4.8)g。陽性對(duì)照組和各濃度氫氧化鈉組裸鼠皮膚較為紅潤，進(jìn)食較好，體重均顯著重于對(duì)照組(P＜0.05)。氫氧化鈉中、高濃度組動(dòng)物體重均重于低濃度組，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)(圖1)。

圖1 第18天各組荷瘤裸鼠體重

2.2 腫瘤生長情況

對(duì)照組裸鼠皮下肝癌呈漸進(jìn)性生長，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)(d 18)，腫瘤體積由大到小為:對(duì)照組＞氫氧化鈉低濃度組＞陽性對(duì)照組＞氫氧化鈉中濃度組＞氫氧化鈉高濃度組。對(duì)照組腫瘤平均體積為(508±94)mm3，顯著大于各濃度氫氧化鈉組或陽性對(duì)照組(P＜0.05)。氫氧化鈉低濃度組腫瘤平均體積顯著大于中、高濃度組(P＜0.01)，但與陽性對(duì)照組無顯著差異(P=0.157)。氫氧化鈉中濃度組與高濃度組間腫瘤體積比較亦無顯著差異(P=0.07)(圖2)。

2.3 肺轉(zhuǎn)移

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組所有動(dòng)物均出現(xiàn)顯著肺轉(zhuǎn)移，肺轉(zhuǎn)移率顯著高于其他組(P＜0.05)，肺切片HE染色平均每張切片上出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目為(5.5±2.6)個(gè)，氫氧化鈉低濃度組有3只動(dòng)物發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，但肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較少，分別為1、1、3個(gè);陽性對(duì)照組有1只動(dòng)物發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶數(shù)目為4個(gè);氫氧化鈉中、高濃度組的所有動(dòng)物均未發(fā)現(xiàn)明顯的肺轉(zhuǎn)移灶。

2.4 腫瘤組織壞死評(píng)估

腫瘤組織切片HE染色可見所有腫瘤瘤內(nèi)均發(fā)生壞死，各濃度氫氧化鈉治療組每組有8只腫瘤組織表現(xiàn)為大片壞死，陽性對(duì)照組7只腫瘤組織出現(xiàn)大片壞死，而對(duì)照組僅有1只腫瘤組織出現(xiàn)大片壞死。各治療組大片壞死發(fā)生率均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

3 討論

原發(fā)性肝癌是我國常見且危害人民健康最為嚴(yán)重的1種惡性腫瘤，防治形勢十分嚴(yán)峻，5年生存率約3%，我國每年死于此病的患者多達(dá)20萬人［4］。原發(fā)性肝癌以手術(shù)切除為主，但因其惡性度高，極易早期轉(zhuǎn)移且我國患者多合并肝硬化和肝功能失代償，故臨床切除率低且復(fù)發(fā)率高［5］，且能手術(shù)切除治療的僅占20%。

近年來，非手術(shù)治療肝癌技術(shù)逐以開展。除肝動(dòng)脈栓塞治療外，尚有超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)注射治療，包括無水酒精、醋酸等注射、微波固化治療、射頻消融和激光熱療等。其中瘤內(nèi)注射藥物這一方法，因有適應(yīng)癥廣、創(chuàng)傷性小、療效好、副作用小、操作簡便、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)輕等優(yōu)點(diǎn)，更適合我國國情［6］。對(duì)小肝癌患者使用無水酒精肝瘤體內(nèi)注射，遠(yuǎn)期療效并不亞于手術(shù)切除，5年生存率可達(dá)36%。然而，在文獻(xiàn)復(fù)習(xí)和臨床實(shí)際應(yīng)用工作中我們發(fā)現(xiàn)上述方法仍有一些缺陷，如穿透力不足、需反復(fù)多次注射、局部疼痛等［7］，因此，需進(jìn)一步努力探索新的、更加理想的治療藥物，以提高療效和減輕副作用。

氫氧化鈉作為1種強(qiáng)堿，具有較好的滲透性，且在損傷腫瘤的同時(shí)，不提高腫瘤內(nèi)的酸性，從而減少缺氧誘導(dǎo)因子下游的促血管生成因子的表達(dá)。Jiang等［8］對(duì)新西蘭兔施行肝實(shí)質(zhì)內(nèi)注射氫氧化鈉溶液，發(fā)現(xiàn)2.5%和5%的濃度可以引起顯著的局灶性肝臟完全壞死，且2.5%的濃度具有較好的安全性。本研究中，我們應(yīng)用了1%、2%和3%3個(gè)濃度，驗(yàn)證了Jiang等的研究結(jié)果，裸鼠在接受3%氫氧化鈉瘤內(nèi)注射時(shí)體重未發(fā)生顯著下降，反而因?yàn)榻Y(jié)束干預(yù)時(shí)腫瘤負(fù)荷較低，裸鼠體重較重。而這3個(gè)濃度氫氧化鈉溶液瘤內(nèi)注射均顯著抑制腫瘤肺轉(zhuǎn)移，其中1%的低濃度氫氧化鈉就可以達(dá)到與酒精注射相似的療效，中、高濃度的氫氧化鈉療效更為顯著。

圖2 2次注射后各組裸鼠腫瘤變化情況

總之，1% ～3%濃度的氫氧化鈉溶液瘤內(nèi)注射，對(duì)于肝細(xì)胞癌具有較好的療效且無顯著毒副作用，值得進(jìn)一步的臨床研究驗(yàn)證。

［1］梁雪婧，朱尚勇，梁水庭.非手術(shù)局部損毀腫瘤方法治療原發(fā)性肝癌的現(xiàn)狀與進(jìn)展〔J〕.中國癌癥防治雜志，2009，1(4):362.

［2］劉 揚(yáng)，宗 明，張柏和，等.無水酒精局部注射治療復(fù)發(fā)性肝癌對(duì)癌細(xì)胞血行播散的影響〔J〕.中華普通外科雜志，2002，17(4):207.

［3］陶文照，徐 冰，龔志錦，等.人肝癌裸鼠連續(xù)傳代的病理變化特征〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志，2007，14(2):163.

［4］楊秉輝.原發(fā)性肝癌的診斷:從臨床到亞臨床〔J〕.中華消化雜志，2003，23(6):325.

［5］中國抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)，中國抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作委員會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)肝癌學(xué)組.原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治專家共識(shí)〔J〕.臨床腫瘤學(xué)雜志，2009，14(3):259.

［6］李 凱.原發(fā)性肝癌的內(nèi)科治療〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2006，13(4):1.

［7］鄧衛(wèi)萍，曾愛瓊，陳麗輝，等.超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺無水酒精注射治療肝癌的護(hù)理配合〔J〕.海南醫(yī)學(xué)，2009，20(9):147.

［8］Jiang TA，Zhao QY，Chen MY，et al.Low － concentration sodium hydroxide solution injection in normal liver parenchyma of rabbits〔J〕.Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2005，4(2):285.