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        Ki67、PTEN在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義

        2011-11-15 07:38:12鄧秀娟吳海根
        實(shí)用癌癥雜志 2011年4期
        關(guān)鍵詞:性囊交界陽(yáng)性細(xì)胞

        鄧秀娟 吳海根

        卵巢漿液性腫瘤中大約有9%~15%為交界性腫瘤,發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)?;谀壳癒i67基因、PTEN基因與卵巢交界性漿液性囊腺瘤的確切關(guān)系尚不明了,本研究采用免疫組化法檢測(cè)Ki67和PTEN在正常卵巢組織、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤和卵巢漿液性囊腺癌組織中的表達(dá)情況,探討其與卵巢交界性漿液性囊腺瘤組織的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        選擇江西省婦幼保健醫(yī)院2004年1月~2009年l2月收治的、并經(jīng)手術(shù)病理檢查證實(shí)的32例卵巢交界性漿液性囊腺瘤患者,年齡17~58歲,中位年齡31歲。所選患者均為初發(fā)者,術(shù)前未接受過放化療﹑激素及免疫治療。11例正常卵巢組織來源于同期功能失調(diào)性子宮出血行全宮加雙附件手術(shù)者。標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診,所有組織術(shù)后用10%福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋,4 μm連續(xù)切片。依據(jù)2000年FIGO卵巢惡性腫瘤臨床分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期:Ⅰ~Ⅱ期22例,Ⅲ ~Ⅳ期10例,組織學(xué)類型:卵巢交界性漿液性囊腺瘤﹑卵巢漿液性囊腺瘤和卵巢漿液性囊腺癌。

        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

        鼠抗人Ki67、鼠抗人PTEN單克隆抗體和SP試劑盒,均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。染色步驟按試劑盒說明書進(jìn)行,DAB顯色。以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

        1.3 染色結(jié)果判定

        PTEN以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒狀物質(zhì)為陽(yáng)性表達(dá)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)比例進(jìn)行分級(jí)。以高倍鏡下每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)作為判斷標(biāo)準(zhǔn):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) <5%為陰性“-”,5% ~25%為弱陽(yáng)性“+”,26% ~50%為中度陽(yáng)性“++”,>50%為強(qiáng)陽(yáng)性“+++”。Ki67抗原以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒狀物質(zhì)為陽(yáng)性染色。陰性(-):無著色細(xì)胞;陽(yáng)性(+):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<30%;中度陽(yáng)性(++):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)30% ~50%;強(qiáng)陽(yáng)性(+++):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS13進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,應(yīng)用卡方檢驗(yàn)(Fisher精確檢驗(yàn))和統(tǒng)計(jì)圖。

        2 結(jié)果

        2.1 Ki67和PTEN在不同卵巢組織中的表達(dá)(表1)

        Ki67與PTEN表達(dá)卵巢交界性漿液性囊腺瘤與卵巢漿液性囊腺癌組織比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05),而卵巢交界性漿液性囊腺瘤組織與卵巢漿液性囊腺瘤組織比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

        表1 不同卵巢組織中Ki67和PTEN表達(dá)情況(例)

        2.2 Ki67和PTEN表達(dá)與卵巢交界性漿液性囊腺瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系

        PTEN表達(dá)與卵巢交界性漿液性囊腺瘤臨床分期顯著相關(guān)(P=0.03),而Ki67表達(dá)與其臨床分期無明顯相關(guān)性(P>0.05)。PTEN和Ki67表達(dá)均與患者年齡無關(guān)(P >0.05),見表2。

        表2 PTEN和Ki67表達(dá)與卵巢交界性漿液性囊腺瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

        2.3 Ki67與PTEN表達(dá)的關(guān)系

        在正常卵巢﹑卵巢漿液性囊腺瘤和卵巢交界性漿液性囊腺瘤組織中,PTEN表達(dá)率明顯高于Ki67表達(dá)率,但在卵巢漿液性癌組織中Ki67表達(dá)率明顯高于PTEN表達(dá)率,兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(圖1)。

        3 討論

        PTEN定位于人的染色體10q23,是1種腫瘤抑制基因,具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的雙重功能,且具有控制生長(zhǎng)或負(fù)調(diào)控、抑制轉(zhuǎn)化細(xì)胞的惡性表達(dá)的基因。當(dāng)PTEN基因發(fā)生缺失或突變時(shí),將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。大量的實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí),PTEN基因在腫瘤的胚胎期以及與腫瘤的血管形成、局部浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤的分化程度、腫瘤的大小有密切關(guān)聯(lián),有證據(jù)顯示PTEN基因與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān),目前國(guó)內(nèi)外在卵巢交界性漿液性囊腺瘤中PTEN基因研究相對(duì)較少。本組研究發(fā)現(xiàn):在卵巢漿液性囊腺癌中PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低,說明卵巢漿液性囊腺癌中存在著PTEN蛋白的缺失,PTEN基因的失活可能在卵巢漿液性囊腺癌的發(fā)病中起一定的作用。PTEN蛋白的表達(dá)在卵巢漿液性囊腺癌中顯著減少,提示PTEN基因在卵巢漿液性囊腺癌發(fā)生中作為早期分子事件發(fā)揮重要作用。本組研究表明在卵巢交界性漿液性囊腺瘤中臨床分期越晚PTEN陽(yáng)性表達(dá)率就越低,結(jié)果與國(guó)外報(bào)道的一致[1,2],提示PTEN與卵巢交界性漿液性囊腺瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),其異常表達(dá)可能是構(gòu)成卵巢交界性漿液性囊腺瘤進(jìn)一步分化的分子基礎(chǔ),并可能成為反映卵巢交界性漿液性囊腺瘤進(jìn)展程度及預(yù)后的指標(biāo)之一。

        圖1 Ki67和PTEN在各卵巢組織中的表達(dá)

        Ki67為目前較為肯定的核增殖標(biāo)志基因,出現(xiàn)在除G0期和G1早期所有細(xì)胞周期的特異性非組蛋白。在M期達(dá)到最大表達(dá)峰,與細(xì)胞的合成代謝有關(guān),是確定良性和惡性組織生長(zhǎng)狀態(tài)的1種標(biāo)記。本研究為了探索PTEN在卵巢交界性漿液性囊腺瘤中是否可以抑制癌細(xì)胞的增殖,而選用了Ki67反映不同組類卵巢漿液性細(xì)胞的增殖狀態(tài),結(jié)果顯示在卵巢交界性漿液性囊腺瘤中,PTEN表達(dá)強(qiáng)度與臨床分期有關(guān),與患者年齡無關(guān)。PTEN與Ki67的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率從正常卵巢到癌組織呈現(xiàn)遞增的趨勢(shì),提示在卵巢交界性漿液性囊腺瘤的發(fā)生和進(jìn)展中,PTEN蛋白表達(dá)的缺失和減少可能增加了腫瘤細(xì)胞的增殖活性,從而使Ki67的表達(dá)增強(qiáng)。Hrushesky等[3]提出Ki67可作為乳腺癌術(shù)前內(nèi)分泌治療評(píng)估其預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo),Khouja等[4]通過多因素分析顯示Ki67高表達(dá)與患者較短的生存率有關(guān),Ki67可能成為卵巢癌Ⅲ期患者獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)記物。而本組研究顯示Ki67對(duì)卵巢交界性漿液性囊腺瘤患者的早期診斷和預(yù)后估計(jì)可能有一定的參考價(jià)值。

        癌癥的發(fā)生是1個(gè)長(zhǎng)期的多步驟、多因素的變化過程。Ki67與PTEN均參與細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡,兩者作用環(huán)節(jié)一致,但生物學(xué)效應(yīng)相反。PIEN表達(dá)下調(diào)、Ki67表達(dá)上調(diào)提示卵巢交界性漿液性囊腺瘤的預(yù)后不良。Gomes等[5]提出PTEN的失活可能是導(dǎo)致Ⅰ期卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生的早期表現(xiàn)。Kimura等[6]研究發(fā)現(xiàn),PTEN陽(yáng)性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜癌的分期比較中無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而Ki67陽(yáng)性表達(dá)率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提出PTEN表達(dá)的缺失發(fā)生在高分化的子宮內(nèi)膜樣腺癌的早期階段。本組研究顯示抑癌基因PTEN在卵巢漿液性囊腺癌中也有表達(dá),但相對(duì)癌基因Ki67來講,其表達(dá)強(qiáng)度明顯降低,PTEN在卵巢交界性漿液性囊腺瘤組的分期比較中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有文獻(xiàn)報(bào)道卵巢交界性漿液性囊腺瘤可能與早期的卵巢漿液性癌有關(guān)[7].可對(duì)此進(jìn)行深入研究,探討出卵巢交界性漿液性囊腺瘤的標(biāo)記物。促進(jìn)對(duì)卵巢交界性漿液性囊腺瘤的預(yù)防和治療領(lǐng)域的探索。

        Shoman等[8]對(duì)100例雌激素陽(yáng)性他莫西芬治療后的乳腺癌患者進(jìn)行研究,結(jié)果顯示他莫西芬治療失敗的患者中PTEN表達(dá)缺失。P?lcher等[9]提出在晚期卵巢癌術(shù)前輔助治療中,Ki67表達(dá)增高可作為對(duì)化療表現(xiàn)耐藥的一項(xiàng)指標(biāo)。吳卉娟等[10]研究轉(zhuǎn)染野生型PTEN重組質(zhì)粒能有效提高卵巢癌A2780細(xì)胞內(nèi)PTEN的表達(dá),顯著增強(qiáng)A2780細(xì)胞對(duì)紫杉醇?xì)拿舾行?。因而,PTEN作為卵巢交界性漿液性囊腺瘤基因治療的靶基因具有理論價(jià)值及實(shí)際意義,而本組研究顯示Ki67和PTEN在卵巢交界性漿液性囊腺瘤良惡性發(fā)展中有重要意義。

        綜上所述,Ki67和PTEN的表達(dá)可能在卵巢交界性漿液性囊腺瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用,可為不同人群中研究卵巢交界性漿液性囊腺瘤的病因、發(fā)病學(xué)環(huán)節(jié)提供有用的分子生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo),同時(shí)也可為臨床診斷和輔助治療提供重要依據(jù),可能成為卵巢交界性漿液性囊腺瘤的標(biāo)記物和評(píng)價(jià)其預(yù)后的指標(biāo)。

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        [4]Khouja MH,Baekelandt M,Nesland JM,et al.The clinical importance of Ki67,p16,p14,and p57 expression in patients with advanced ovarian carcinoma〔J〕.Int J Gynecol Pathol,2007,26(4):418.

        [5]Gomes CP,Andrade LA.PTEN and p53 expression in primary ovarian carcinomas:immunohistochemical study and discussion of pathogenetic mechanisms〔J〕Int J Gynecol Cancer,2006,16(Suppl 1):254.

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        [10]吳卉娟,吳海濤,翁丹卉,等.PTEN基因增強(qiáng)卵巢癌A2-780細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性的研究〔J〕.中國(guó)癌癥雜志,2007,17(9):669.

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